◎ 梁玉博

（信陽市食品安全監(jiān)督所，河南 信陽 464000）

酶聯(lián)免疫吸附試驗是基于免疫酶特點的免疫測定方法，其在使用過程中具有敏感度高、方便快捷、準確度高等優(yōu)良特點。在單克隆抗體技術(shù)發(fā)展過程中，免疫試劑盒測試技術(shù)逐漸呈現(xiàn)了商業(yè)化的特點。食品問題不僅與人體健康息息相關(guān)，而且對國計民生具有一定的影響，受到了政府及相關(guān)專業(yè)人士的極大關(guān)注。因此，酶聯(lián)免疫吸附試驗在食品檢測中的應(yīng)用具有非常重要的意義。

1 酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測流程

1.1 樣品預(yù)處理

酶聯(lián)免疫吸附試驗在檢測過程中，一般需要一定的樣品預(yù)處理。預(yù)處理可能會在不同程度上破壞食品的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，為了避免過程分析物質(zhì)提取出現(xiàn)問題，可采用100%的水、甲醇、丁醇混合物物質(zhì)，按75∶25∶5的比例提取物質(zhì)。在特殊情況下，也可以采用超臨界萃取技術(shù)利用液相甲醇改性過的二氧化碳，結(jié)合三元混合溶劑的應(yīng)用，最大程度地降低酶聯(lián)免疫吸附試驗前期分析物質(zhì)處理的損失。

1.2 抗原合成及抗體選擇

在小分子物質(zhì)檢測過程中，由于其自身缺乏免疫抗原的特點，需要應(yīng)用免疫原性載體蛋白。對于半抗原改性環(huán)節(jié)，可綜合考慮偶聯(lián)比、位點、偶聯(lián)劑等因素，選擇相應(yīng)的偶聯(lián)載體蛋白結(jié)合位點，然后在相應(yīng)催化劑的作用下合成完全抗體。而在抗體選擇環(huán)節(jié)可根據(jù)具體檢測項目，結(jié)合效價、穩(wěn)定性、交叉反應(yīng)等因素，確定相應(yīng)的抗體偶合物。

1.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗方法選擇

在食品安全檢測過程中，不同的檢測項目所需的檢測方法也有所區(qū)別，如直接競爭酶聯(lián)免疫法、間接競爭酶聯(lián)免疫檢測、抗原抗體復(fù)合物免疫法等。結(jié)合相應(yīng)食品檢測物質(zhì)濃度特點，可優(yōu)先選擇靈敏度最高的檢測方面，便于提高整體檢測效率。

2 酶聯(lián)免疫吸附試驗在食品物質(zhì)檢測中的應(yīng)用

2.1 食品毒害物質(zhì)檢測

酶聯(lián)免疫吸附試驗在食品毒害物質(zhì)中具有良好的應(yīng)用。酶聯(lián)免疫吸附試驗在食品毒害物質(zhì)檢測中主要用于黃曲霉毒素、SPF雞的檢測，隨后又逐漸出現(xiàn)了河豚毒素、玉米烯酮等毒素的檢測標準[1]。在實際病毒害物質(zhì)檢測過程中，酶聯(lián)免疫吸附試驗主要有直接法、競爭法、夾心法等，其中直接酶聯(lián)免疫吸附試驗具有簡單、便捷且檢測限度低的優(yōu)點，在實際應(yīng)用中較廣泛。如利用直接酶聯(lián)免疫吸附試驗可以對食品中致癌物質(zhì)丙烯酰胺進行檢測，檢測限達到65.70 μg/kg，可達到優(yōu)良的檢測靈敏度。

2.2 食品藥物殘留檢測

酶聯(lián)免疫吸附試驗在食品藥物殘留中的檢測主要針對農(nóng)藥殘留，商品檢測試劑盒可對蔬菜、食品及其周邊環(huán)境中的農(nóng)藥殘留進行有效檢測。目前，酶聯(lián)免疫吸附試驗針對殺菌劑、除草劑、殺蟲劑等常見藥物殘留具有良好的檢測效果。現(xiàn)階段常用的酶聯(lián)免疫吸附試驗主要是利用相應(yīng)的免疫血清制作水、蔬菜、土壤等常見食品藥物殘留物質(zhì)試劑盒，如利用兔抗氨芐西林鈉血清可進行乳制品中的氨芐西林鈉的檢測；用甲萘威免疫血清可利用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測甲萘威殘留。在具體的酶聯(lián)免疫吸附試驗食品藥物殘留檢測過程中，主要是通過簡單的前期試劑盒處理，進行批量食品樣品的檢測，通過相應(yīng)抗體的酶聯(lián)免疫檢測試驗，可在檢測食品中的新霉素、慶大霉素、卡那霉素等殘留物質(zhì)檢測，還可以將相應(yīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測殘留的實施方法進行相關(guān)區(qū)域標準的制定，從而進一步提高區(qū)域內(nèi)食品安全檢測的準確率，為區(qū)域內(nèi)藥物殘留檢測限度的有效降低提供合理的依據(jù)。

2.3 食品過敏原檢測

在食品過敏反應(yīng)中，酶聯(lián)免疫吸附試驗主要用于魚類食品的過敏檢測。在實際應(yīng)用中，可采用夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗對魚類過敏原進行合理檢測，如將兔的抗鱈魚小清蛋白抗體多克隆產(chǎn)物作為捕獲劑，對多種魚類過敏原進行有效檢測[2]。使用兔的抗鱈魚小清蛋白回收率可達到68%以上，且最低檢測限度為0.01 mg/kg，對于食品中過敏魚蛋白的控制具有良好的效果。此外，酶聯(lián)免疫吸附試驗還可由于食品中芥末過敏原的檢測，其主要利用兔的多克隆抗芥末血清作為檢測試劑，在堿性磷酸酶的催化下，檢測回收率可達95%以上，為食品監(jiān)管機構(gòu)監(jiān)管職權(quán)的有效實施提供了良好的保障。現(xiàn)階段，我國市場中對于食品中過敏原的檢測，主要采用酶聯(lián)免疫吸附試驗測試盒。

2.4 食品微生物檢測

微生物污染是現(xiàn)階段我國食品的主要安全威脅之一，常規(guī)的微生物學(xué)檢驗檢驗周期較長且整體環(huán)節(jié)較復(fù)雜，對于整體食品微生物的有效檢測造成了不利的影響，而通過酶聯(lián)免疫吸附試驗微生物檢測可以通過單克隆抗體的制備，有效檢測食品中的大腸桿菌、沙門氏菌、鐮刀菌等有害微生物?，F(xiàn)階段，直接酶聯(lián)免疫吸附試驗針對沙門氏菌等微生物的最低檢測限度可達到500 CFU/g，且整體檢測時間可在22.0 h以內(nèi)。此外，在社會發(fā)展過程中轉(zhuǎn)基因食品也成為我國食品安全的主要威脅因素，酶聯(lián)免疫吸附試驗可對轉(zhuǎn)基因食品中的CP4的蛋白質(zhì)進行快速檢測，而酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑盒的推出，進一步推動了轉(zhuǎn)基因酶聯(lián)免疫檢測工作的進程。

3 結(jié)語

以往的食品檢測方法具有工序繁瑣、檢測時間長的弊端，并無法在大批量食品檢測中發(fā)揮良好的效益。而酶聯(lián)免疫吸附試驗通過相關(guān)免疫試劑盒的應(yīng)用，具有簡單、快捷、準確的優(yōu)點。現(xiàn)階段經(jīng)濟發(fā)達地區(qū)已加大了先進檢測技術(shù)的應(yīng)用，且進行了綠色貿(mào)易壁壘的設(shè)置，對于我國檢測基礎(chǔ)造成了一定的沖擊。因此，我國應(yīng)結(jié)合現(xiàn)階段發(fā)展情況，加大高靈敏度食品檢測技術(shù)的研制，結(jié)合藥物殘留等衛(wèi)生指標的細化制定，為我國食品行業(yè)的穩(wěn)定發(fā)展提供保障。

[1]徐 鎮(zhèn) 酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)在食品檢測領(lǐng)域中的應(yīng)用進展[J].食品安全導(dǎo)刊，2017（27）：122.

[2]秦蕾影，陳 昊，項水蘭，等.酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)在食品安全檢測中的應(yīng)用研究[J].農(nóng)業(yè)科技與信息，2016（32）：41-42.