于建華

（延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院 133000）

隱孢子蟲（Cryptosporidia）寄生在脊椎動(dòng)物體內(nèi)，是一種廣泛分布在世界各地的原蟲，是導(dǎo)致人類腹瀉性疾病的原因之一。目前，隱孢子蟲廣泛地分布在世界各個(gè)地區(qū)，被證實(shí)是導(dǎo)致人類腹瀉性疾病的重要病因之一[1]。我國對寵物市場的條例和規(guī)范，寵物鳥的疫病防控和檢測管理不規(guī)范。由于缺乏管理措施和檢疫措施，以寵物作為病原攜帶者及傳播媒介的一系列疾病，給寵物產(chǎn)業(yè)帶來了重大的經(jīng)濟(jì)損失，同時(shí)嚴(yán)重危害了人類的身心健康，近些年來有很多關(guān)于禽類的隱孢子蟲病的報(bào)道。該病可以通過檢測寵物鳥的感染率間接體現(xiàn)出人類生活環(huán)境中該病原的污染程度。目前，國內(nèi)關(guān)于鸚鵡隱孢子蟲的流行病學(xué)報(bào)道很少，科研學(xué)者對禽類感染該病的研究甚少。為探討隱孢子蟲在鸚鵡中的流行情況，深入研究隱孢子蟲的流行特點(diǎn)，為該病的進(jìn)一步研究提供依據(jù)，本研究采用ELISA檢測法對鸚鵡的隱孢子蟲的感染情況進(jìn)行調(diào)查研究，期望能對該病的深入研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 被檢血清

鸚鵡共計(jì)311只。其中雄性163只，雌性148只。小于5月齡 105只、6～12月齡 100只，13～18月齡 106只。

1.2 主要試劑

鳥隱孢子蟲（Ab）ELISA試劑盒由上海諾淵實(shí)業(yè)有限公司提供。

2 方法

2.1 血清樣本采集

將鸚鵡固定，用剪刀剪去胸前的羽毛，然后用酒精對皮膚進(jìn)行消毒，最后用一次性采血針進(jìn)行心臟采血。將血液在37℃溫箱放置2h，然后移入4℃放置1h，取出后3000 r/min下離心5 min。將離心得到的上層血清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，做編號標(biāo)記，置于-20℃冰箱內(nèi)保存。

2.2 樣品檢測

檢測鸚鵡血清中隱孢子蟲的抗體水平使用ELISA試劑盒。

2.3 試驗(yàn)結(jié)果判定

試驗(yàn)的有效性：

陽性對照孔平均值≥1.00；陰性對照孔平均值≤0.10；

臨界值計(jì)算（Cut-off）：臨界值=陰性對照孔的平均值+0.15；

陰性判定標(biāo)準(zhǔn)：樣品的OD值<臨界值（Cut-off）則隱孢子蟲抗體為陰性；

陽性判定標(biāo)準(zhǔn)：樣品的OD值≥臨界值（Cut-off）則隱孢子蟲抗體為陽性。

3 被檢樣本血清抗體的檢測結(jié)果

在本次研究中，共有311份鸚鵡血清，總計(jì)10份鸚鵡血清呈現(xiàn)隱孢子蟲抗體陽性，陽性率為3.22%。其中亞歷山大鸚鵡陽性率為0%，情侶鸚鵡陽性率為15.39%，雉尾鸚鵡陽性率為9.09%，虎皮鸚鵡的陽性率為1.98%，不同品種鸚鵡間的感染率有顯著差異（P<0.05）。

4 結(jié)論

試驗(yàn)表明，鸚鵡中存在隱孢子蟲感染，總體陽性率為3.22%。隱孢子蟲的流行狀況與鸚鵡的品種差異有關(guān)，與鸚鵡性別、年齡關(guān)系不大。

5 討論

隱孢子蟲寄生在脊椎動(dòng)物體內(nèi)，是一種廣泛分布在世界各地的原蟲，是導(dǎo)致人類腹瀉性疾病的原因之一。自然環(huán)境中普遍存在隱孢子蟲卵囊，當(dāng)人與被感染的動(dòng)物接觸，飲用或食用被污染的水和食物都會(huì)引起隱孢子蟲的感染。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的逐漸成熟，出現(xiàn)了越來越多的隱孢子蟲檢測方法，常用診斷方法有顯微鏡檢測、血清學(xué)檢測和分子生物學(xué)檢測。早期的研究多使用改良抗酸染色法，該方法由于染色后易留下紅色顆粒，鏡下難以鑒別。使用PCR或基因探針發(fā)靈敏度高，且特異性強(qiáng)。對于血清樣本，常采用ELISA和酶聯(lián)免疫印跡試驗(yàn)（ELIB），特異性靈敏度都較好，可用于隱孢子蟲病的流行病學(xué)調(diào)查。本研究采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），對購買于甘肅省市場的原產(chǎn)地在北京和濰坊2個(gè)地區(qū)的4種鸚鵡隱孢子蟲抗體進(jìn)行了調(diào)查。我國鸚鵡隱孢子蟲總陽性率為3.22%。情侶鸚鵡血清中隱孢子蟲抗體檢出率為15.39%，雉尾鸚鵡中為9.09%，虎皮鸚鵡中為1.98%，亞歷山大鸚鵡中為 0%（0/22，P＞0.05）。 雄性鸚鵡的感染率（3.68%）高于雌性鸚鵡（2.70%，P＞0.05）。 小于5月齡的鸚鵡（5.71%）感染率高于 6～12 月齡（4.00%）和 13～18 月齡（0）鸚鵡（P＞0.05）。 不同基因型隱孢子蟲毒力不同，不同品種的鸚鵡對隱孢子蟲的抵抗力不同，鸚鵡接觸被隱孢子蟲污染的傳染源的幾率不一樣。