魏順英 楊愛萍 汪祖春 趙俊哲 邱海英

(青海紅十字醫(yī)院婦一科，青海 西寧 810000)

子宮內(nèi)膜樣腺癌是中老年女性常見的腫瘤，居于全球女性常見惡性腫瘤第4位，病變形成時臨床癥狀出現(xiàn)較早，診斷較容易，因此預(yù)后較好，但是對于有轉(zhuǎn)移的患者，腫瘤侵襲能力明顯增強，腫瘤細(xì)胞對周圍組織破壞能力明顯增強，預(yù)后差〔1〕。病變形成過程中轉(zhuǎn)移相關(guān)因子可以出現(xiàn)明顯變化〔2〕。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)-D及其受體(R)-3是與腫瘤淋巴管生成相關(guān)的蛋白，均是VEGF家族的成員，近年研究顯示二者具有促進腫瘤轉(zhuǎn)移的作用〔3,4〕。本實驗應(yīng)用免疫組化方法檢測轉(zhuǎn)移性子宮內(nèi)膜樣腺癌中VEGF-D和VEGFR-3的表達，探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1臨床資料 2014年1月至2016年12月青海紅十字醫(yī)院確診為子宮內(nèi)膜樣腺癌并有轉(zhuǎn)移的患者65例為觀察組，年齡45～79歲，平均62.5歲。納入均經(jīng)病理學(xué)確診，并符合WHO中的診斷標(biāo)準(zhǔn)及分型。轉(zhuǎn)移指周圍組織和器官侵犯15例、血道轉(zhuǎn)移10例、淋巴道轉(zhuǎn)移40例。40例無轉(zhuǎn)移的子宮內(nèi)膜樣腺癌患者為對照組，年齡44～77歲，平均61.9歲。30例子宮肌瘤行子宮全切后非腫瘤性子宮內(nèi)膜組織為正常對照組，年齡40～75歲，平均52.8歲。手術(shù)標(biāo)本均常規(guī)取材，并留取術(shù)后蠟塊組織。3組一般資料無明顯差異。

1.2VEGF-D和VEGFR-3蛋白的檢測方法 術(shù)后石蠟包埋組織均切取4 μm切片，應(yīng)用免疫組化方法檢測VEGF-D和VEGFR-3的表達，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色。嚴(yán)格按說明書進行操作，做好質(zhì)量控制。

1.3結(jié)果判定 VEGF-D和VEGFR-3的陽性部位為細(xì)胞質(zhì)，以細(xì)胞質(zhì)中染成棕黃色到棕褐色為陽性反應(yīng)細(xì)胞。以染色強度+陽性細(xì)胞的百分率來綜合評定。染色強度的評分：0分，無顯色；1分，棕黃色；2分，棕褐色。陽性細(xì)胞百分率：切片中選擇5個400倍視野的上皮細(xì)胞分布區(qū)，計數(shù)陽性率，取其平均值；0分，<10%；1分，10%～49%；2分，≥50%。以0～2分為陰性，以>2分為陽性。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行χ2檢驗、線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.13組VEGF-D和VEGFR-3的表達 3組VEGF-D和VEGFR-3表達差異顯著(P<0.001)。見表1。

表1 3組中VEGF-D和VEGFR-3表達比較〔n(%)〕

2.2VEGF-D和VEGFR-3表達在觀察組不同臨床病理特征中比較 見表2。觀察組中VEGF-D和VEGFR-3表達與腫瘤的脈管累犯、浸潤深度均密切相關(guān)。觀察組VEGF-D的表達與細(xì)胞的增殖指數(shù)密切相關(guān)。

2.3觀察組中VEGF-D和VEGFR-3表達的相關(guān)性 VEGF-D和VEGFR-3的表達呈正相關(guān)(r=0.49，P<0.05)。

表2 VEGF-D和VEGFR-3表達在觀察組不同臨床病理特征中的比較〔n(%)〕

3 討 論

子宮內(nèi)膜癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是主要轉(zhuǎn)移途徑，也是影響預(yù)后的重要因素，病變具有明顯的播散性及異源性黏附的特征。有報道顯示有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者5年生存率(23.81%)明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者〔5〕?；颊叱０橛懈郊霓D(zhuǎn)移，同時肌層浸潤深度大于1/2。陽性淋巴結(jié)的數(shù)目對預(yù)后也可能有重要的影響。淋巴血管間隙受累意味著腫瘤可能向遠處轉(zhuǎn)移。淋巴管生成因子是重要的淋巴道轉(zhuǎn)移調(diào)控因子，其包括兩種蛋白，即VEGF-C和VEGF-D。VEGF-D是新發(fā)現(xiàn)的調(diào)節(jié)因子，是在核酸數(shù)據(jù)庫中通過基于計算機的同源性搜索而發(fā)現(xiàn)的〔6,7〕。人VEGF-D的cDNA序列含有419個堿基對，其蛋白編碼354個氨基酸〔8〕。VEGF-C和VEGF-D的受體均是VEGFR-3，該受體在淋巴管出現(xiàn)之前，是原始心血管網(wǎng)形成所必需的，因此VEGFR-3的表達主要局限于淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞〔9,10〕。VEGF-D不僅是淋巴管生成中重要的調(diào)節(jié)因子，也對淋巴道轉(zhuǎn)移有重要促進作用〔11,12〕。

本研究結(jié)果提示VEGF-D和VEGFR-3是促進腫瘤形成過程中的重要蛋白，二者具有腫瘤化的特征，同時二者高表達是腫瘤轉(zhuǎn)移的一個重要信號。本文提示VEGF-D和VEGFR-3二者參與腫瘤的脈管浸潤過程，這為腫瘤轉(zhuǎn)移提供了直接條件，二者高表達具有促進腫瘤侵襲的作用，尤其是肌層侵犯及子宮體周圍組織的侵犯。VEGF-D可以引起腫瘤細(xì)胞的增生繁殖，使腫瘤細(xì)胞的數(shù)目增多，腫瘤體積增大。VEGF-D和VEGFR-3二者具有協(xié)同作用。子宮內(nèi)膜癌的間質(zhì)中可見淋巴管新生，之后管腔形成，這些淋巴管的生成為腫瘤轉(zhuǎn)移提供了直接的通路，腫瘤細(xì)胞易于遷移，通過淋巴循環(huán)播散到其他部位，通過黏附因子的調(diào)節(jié)作用，形成轉(zhuǎn)移灶〔13,14〕。近年也有學(xué)者關(guān)注前哨淋巴結(jié)中VEGF-D的表達，認(rèn)為VEGF-D在前哨淋巴結(jié)中的作用與原發(fā)癌中的作用相似，即引起受體發(fā)生磷酸化后激活，活化多條細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，引起淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、分化和遷移，促進淋巴管生成，促進腫瘤的轉(zhuǎn)移〔15〕。VEGF-D和VEGFR-3在腫瘤中促進轉(zhuǎn)移的作用也與多種蛋白因素有關(guān)，如與黏合斑激酶(FAK)的相互作用〔16〕，與基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-7的協(xié)同作用等〔17〕，因此關(guān)注其影響因素可能在研究二者通路中有更重要的意義。

1鄧海燕,楊進瓊.盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對子宮內(nèi)膜癌預(yù)后影響分析〔J〕.河北醫(yī)藥,2008;30(4):440-1.

2王 燕.子宮內(nèi)膜癌子宮外轉(zhuǎn)移的影響因素分析〔J〕.中國醫(yī)藥導(dǎo)報,2015;34(2):50-3.

3Onogawa S,Kitadai Y,Tanaka S,etal.Expression of VEGF-C and VEGF-D at the invasive edge correlates with lymph node metastasis and prognosis of patients with colorectal carcinoma〔J〕.Cancer Sci,2004;95(1):32-9.

4Wang Z,Wu Y,Guo A,etal.VEGF-D expression and EGFR mutations in non-small-cell lung carcinoma〔J〕.J Molec Diagn,2008;26(15):723-4.

5佐 晶,安菊生,宋 艷,等.子宮內(nèi)膜癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床病理因素與預(yù)后的相關(guān)性〔J〕.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床,2016;36(6):840-5.

6Gu Y,Qi X,Guo S.Lymphangiogenesis induced by VEGF-C and VEGF-D promotes metastasis and a poor outcome in breast carcinoma:a retrospective study of 61 cases〔J〕.Clin Exp Metast,2008;25(7):717-25.

7Sugiura T,Inoue Y,Matsuki R,etal.VEGF-C and VEGF-D expression is correlated with lymphatic vessel density and lymph node metastasis in oral squamous cell carcinoma:Implications for use as a prognostic marker〔J〕.Int J Oncol,2009;34(3):673-4.

8Okada K,Osaki M,Araki K,etal.Expression of hypoxia-inducible factor(HIF-1alpha),VEGF-C and VEGF-D in non-invasive and invasive breast ductal carcinomas〔J〕.Anticancer Res,2005;25(4):3003-9.

9Akahane M,Akahane T,Matheny SL,etal.Vascular endothelial growth factor-D is a survival factor for human breast carcinoma cells〔J〕.Int J Cancer,2006;118(4):841-9.

10Hanrahan V,Currie MJ,Gunningham SP,etal.The angiogenic switch for vascular endothelial growth factor(VEGF)-A,VEGF-B,VEGF-C,and VEGF-D in the adenoma-carcinoma sequence during colorectal cancer progression〔J〕.J Pathol,2003;200(2):183-94.

11Szajewski M,Kruszewski WJ,Lakomy J,etal.VEGF-C and VEGF-D overexpression is more common in left-sided and well-differentiated colon adenocarcinoma〔J〕.Oncol Reports,2014;31(1):125-30.

12湯紅平,張雅潔,顧瑩瑩,等.VEGF-C和VEGF-D在乳腺癌中的表達及其作用〔J〕.腫瘤,2006;26(6):551-4.

13Yokoyama Y,Charnockjones DS,Licence D,etal.Vascular endothelial growth factor-D is an independent prognostic factor in epithelial ovarian carcinoma〔J〕.Brit J Cancer,2003;88(2):237-44.

14Raica M,Cimpean AM,Ceausu R,etal.Lymphatic microvessel density,VEGF-C,and VEGFR-3 expression in different molecular types of breast cancer〔J〕.Anticancer Res,2011;31(5):1757-64.

15趙 群,吳玉梅,王建東,等.實時熒光定量PCR檢測早期宮頸癌及前哨淋巴結(jié)VEGF-C及VEGF-D mRNA表達〔J〕.腫瘤學(xué)雜志,2013;19(1):14-8.

16閆文靜,黎衛(wèi)平,李東鵬.FAK和VEGF-D在子宮內(nèi)膜癌中的表達及其相互關(guān)系的研究〔J〕.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2008;35(21):4295-7.

17范麗昕,李吉友,沈 琳.聯(lián)合檢測MMP-7VEGF-D和KAI1在胰腺癌預(yù)后判斷中的價值〔J〕.中國腫瘤臨床,2006;33(9):506-9.