李貝貝　劉崇懷　姜建福

摘要：品種鑒定是葡萄種質(zhì)資源保存、研究、開(kāi)發(fā)利用以及新品種品種權(quán)保護(hù)的重要依據(jù)。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的深入發(fā)展，出現(xiàn)了多種基于DNA水平的分子標(biāo)記技術(shù)用于品種鑒定。本文綜述了目前國(guó)內(nèi)外幾種主要的分子標(biāo)記技術(shù)（AFLP、RAPD、SSR、ISSR、SRAP、SNP、iPBS）在葡萄品種鑒定中的應(yīng)用與研究進(jìn)展，并闡述了各種標(biāo)記方法的基本原理和特點(diǎn)，以期為今后葡萄品種鑒定提供參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：葡萄；分子標(biāo)記；品種鑒定；研究進(jìn)展；基本原理；特點(diǎn)

中圖分類號(hào)：S663.101 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2017）15-0015-06

葡萄為葡萄科（Vitaceae）葡萄屬（Vitis L.）植物，是世界范圍內(nèi)栽培最廣泛的樹種之一，目前世界已經(jīng)報(bào)道的葡萄品種有6 000～10 000個(gè)[1]。在葡萄的生產(chǎn)過(guò)程中，優(yōu)良品種是提高葡萄質(zhì)量和種植效益的必要條件，也是其產(chǎn)業(yè)持續(xù)發(fā)展的重要保障，回顧我國(guó)葡萄產(chǎn)業(yè)的發(fā)展歷程，每一個(gè)快速發(fā)展時(shí)期都伴隨著新品種的引進(jìn)、選育與推廣，新品種對(duì)促進(jìn)葡萄產(chǎn)業(yè)的發(fā)展發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用[2]。

葡萄多為無(wú)性繁殖，扦插繁殖容易，不同地區(qū)之間品種交流頻繁，導(dǎo)致其種類和品種繁多，同名異物及同物異名現(xiàn)象嚴(yán)重[3]。另外，由于國(guó)內(nèi)現(xiàn)階段的種苗市場(chǎng)管理還不完善，部分不法苗木商為了自身利益，導(dǎo)致市場(chǎng)上以劣充優(yōu)、以假亂真現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生[4]。因此，為了保護(hù)育種者的權(quán)益及保證葡萄產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展，對(duì)葡萄品種進(jìn)行快速、準(zhǔn)確可靠的鑒定顯得尤為重要。同時(shí)，隨著我國(guó)加入世貿(mào)組織和國(guó)際植物新品種保護(hù)聯(lián)盟后，一個(gè)新品種的推廣、產(chǎn)權(quán)保護(hù)都必須提供該品種特異的鑒定標(biāo)記[5]。而傳統(tǒng)的品種鑒定都以形態(tài)學(xué)標(biāo)記為主，該方法易受環(huán)境及季節(jié)的影響，且鑒定時(shí)間長(zhǎng)、工作量大。此外，由于新品種選育技術(shù)的同質(zhì)化，品種之間的形態(tài)差異也越來(lái)越小，目測(cè)區(qū)分植株性狀就顯得越來(lái)越困難。

近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展與成熟，使根據(jù)遺傳物質(zhì)DNA在不同生物個(gè)體之間的差異來(lái)鑒別生物物種成為可能，并且取得了顯著成果。分子標(biāo)記技術(shù)是一種以DNA多態(tài)性為基礎(chǔ)，通過(guò)檢測(cè)DNA分子由于缺失、插入、易位、倒位、重排或存在長(zhǎng)短與排列不一的重復(fù)序列等機(jī)制而產(chǎn)生多態(tài)性的技術(shù)[6]，該技術(shù)不受環(huán)境因素及發(fā)育階段的影響，具有快速、簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、可靠、穩(wěn)定、經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn)。國(guó)際植物品種權(quán)保護(hù)聯(lián)盟（International Union for the Protection of New Varieties of Plants，簡(jiǎn)稱UPOV）也將DNA分子標(biāo)記鑒定作為農(nóng)作物品種DUS（distinctness uniformity and stability）測(cè)試的輔助手段[7]。已經(jīng)發(fā)展起來(lái)的分子標(biāo)記多達(dá)60多種，應(yīng)用較廣的主要有AFLP、RAPD、SSR、ISSR、SRAP、SNP以及iPBS等。目前，DNA分子標(biāo)記鑒定技術(shù)已在多種作物上開(kāi)展了廣泛的研究，在葡萄品種的鑒定方面取得了很大的進(jìn)展，本文對(duì)目前國(guó)內(nèi)外7種主要的分子標(biāo)記技術(shù)原理以及在葡萄品種鑒定上的應(yīng)用進(jìn)展作一綜述，以期為今后葡萄品種鑒定技術(shù)的選擇提供參考依據(jù)。

1國(guó)內(nèi)外葡萄品種的鑒定技術(shù)

1.1RAPD技術(shù)

隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA（random amplified polymorphic DNA，RAPD）分子標(biāo)記發(fā)展于1990年[8-9]，它是以基因組DNA為模板，利用人工合成的單鏈隨機(jī)引物（一般8～10 bp）對(duì)其進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過(guò)凝膠電泳檢測(cè)擴(kuò)增片段，從而得到多態(tài)性標(biāo)記的一種技術(shù)。RAPD標(biāo)記簡(jiǎn)便、快速、成本低，無(wú)須了解基因組序列信息，DNA用量少，基于以上優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于種質(zhì)資源鑒定及遺傳關(guān)系分析等方面[10-14]。

1997年，Stavrakakis利用15個(gè)RAPD標(biāo)記鑒別了8個(gè)希臘品種，結(jié)果表明，RAPD標(biāo)記技術(shù)適合用于葡萄品種鑒定[15]。王軍等利用RAPD標(biāo)記技術(shù)分別分析了中國(guó)野生葡萄和鮮食葡萄，認(rèn)為RAPD標(biāo)記技術(shù)可有效區(qū)分葡萄種質(zhì)，是一種快速、經(jīng)濟(jì)實(shí)用的分子標(biāo)記技術(shù)[16-17]。Bajraktari等以Rahovec的6個(gè)主栽品種為材料，利用10對(duì)高效的RAPD引物對(duì)其進(jìn)行鑒定分析，鑒定結(jié)果與形態(tài)學(xué)檢測(cè)的結(jié)果完全一致，6份種質(zhì)均被區(qū)分開(kāi)，排除了同名異物的存在[18]。2008年，李玉霞等依據(jù)RAPD技術(shù)對(duì)蛇龍珠葡萄的來(lái)源和親緣關(guān)系進(jìn)行了分析，認(rèn)為蛇龍珠可能為法國(guó)的嘎赫姆奈赫，而非以前被認(rèn)為的品麗珠[19]。隨后，2012年李紅娟等利用RAPD分子標(biāo)記對(duì)8個(gè)蛇龍珠營(yíng)養(yǎng)系進(jìn)行遺傳多樣性分析，并將其與赤霞珠和品麗珠之間的親緣關(guān)系進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果顯示蛇龍珠的5個(gè)營(yíng)養(yǎng)系之間沒(méi)有任何差別，其余3個(gè)營(yíng)養(yǎng)系之間卻存在一定的差別，提出了蛇龍珠在遺傳基礎(chǔ)上與品麗珠有一定的差異，應(yīng)屬不同品種[20]。Zhao等用基于RAPD標(biāo)記的MCID法完成了對(duì)葡萄品種的鑒定，該方法對(duì)將來(lái)葡萄品種鑒定以及新品種權(quán)保護(hù)具有重要意義[21-23]。El-Sayed等僅用1對(duì)RAPD引物就將Thompson Seedless、Red Roomy、Palomino、Rish Baba、Ruby Seedless、Beauty Seedless、Superior和Flame Seedless等8個(gè)葡萄品種區(qū)分開(kāi)，再次證明了RAPD標(biāo)記鑒定葡萄品種的可行性[24]。另外，RAPD標(biāo)記還可用于區(qū)分芽變品種，如張國(guó)海成功地應(yīng)用RAPD分子標(biāo)記鑒定了巨峰及其芽變品種98-2、京亞及其芽變品種洛浦早生[25]。RAPD分子標(biāo)記以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)在20世紀(jì)90年代前期得到了廣泛的應(yīng)用，但在實(shí)際應(yīng)用中也存在一定的缺陷，其穩(wěn)定性和重復(fù)性較差，這主要是因?yàn)樵摲N標(biāo)記是顯性標(biāo)記，不能區(qū)別純合體和雜合體。

1.2AFLP技術(shù)

擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性（amplified fragment length polymorphism，AFLP）標(biāo)記是由荷蘭科學(xué)家Zabeau等發(fā)明的一種分子標(biāo)記技術(shù)[26-27]。其基本原理是利用成對(duì)的限制性內(nèi)切酶對(duì)基因組DNA進(jìn)行酶切，酶切片段與人工接頭（與酶切片段含有共同黏末端）連接，并通過(guò)引物（引物由接頭，酶切位點(diǎn)和2～3個(gè)核苷酸組成）擴(kuò)增得到大量DNA片段，最后通過(guò)聚丙烯酰氨凝膠電泳對(duì)擴(kuò)增片段多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)。AFLP技術(shù)結(jié)合了RFLP與RAPD等2種分子標(biāo)記技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，既有前者的可靠性，又有后者的靈敏性。endprint

AFLP技術(shù)以其重復(fù)性好、多態(tài)性高、分辨率高等優(yōu)勢(shì)常被用于葡萄無(wú)性系變異或突變品種的鑒定[28-29]。該技術(shù)可以解決同工酶標(biāo)記、形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)等不能解決的問(wèn)題。Scott等成功地應(yīng)用AFLP技術(shù)鑒定了火焰無(wú)核及其早熟突變體，這也是首次利用AFLP標(biāo)記成功鑒定突變體[30]。Cervera等利用AFLP分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)35個(gè)鮮食品種及2個(gè)Napoleon無(wú)性系變異品種（N10-7、N76-7）進(jìn)行鑒定，分別使用2個(gè)引物組合[2E（+ACC，+ACT）/M+CAT，2E（+ACC，+ACT）/M+CTG]和1個(gè)引物組合[2E（+ACC，+ACT）/M+CTT]將鮮食品種和無(wú)性系變異品種區(qū)分開(kāi)，結(jié)果表明，AFLP技術(shù)是鑒定無(wú)性系變異品種的一種有效方法[31]。超藤葡萄是藤稔的芽變品種，二者親緣關(guān)系十分接近，鮑露等應(yīng)用傳統(tǒng)的形態(tài)標(biāo)記以及RAPD分子標(biāo)記不易將其區(qū)分開(kāi)，而利用AFLP標(biāo)記成功地將其區(qū)分開(kāi)，這突顯了AFLP標(biāo)記的重復(fù)性強(qiáng)、多態(tài)性豐富的優(yōu)點(diǎn)[32]。2011年，Vlba等采用SSR標(biāo)記與AFLP標(biāo)記成功地鑒別開(kāi)一對(duì)同物異名品種（Glianico Nero與Aglianico del Vulture Nero），而早在2001年Costacurta已提出了這樣的猜測(cè)，Vlba等對(duì)其進(jìn)行了驗(yàn)證，認(rèn)為AFLP是區(qū)分同名異物或同物異名品種的有效方法[33]。無(wú)性系篩選是葡萄品種改良的重要方法，近年來(lái)育種家在無(wú)性系篩選方面也做了很多工作，Manjari Naveen是依據(jù)形態(tài)學(xué)篩選出的一個(gè)無(wú)核白雞心的無(wú)性系變異品種，2013年Shinde等對(duì)Manjari Naveen與無(wú)核白雞心的DNA進(jìn)行了AFLP分析，結(jié)果顯示Manjari Naveen與無(wú)核白雞心為2個(gè)不同的品種[34]。雖然AFLP分子標(biāo)記穩(wěn)定性好、準(zhǔn)確性高、能有效區(qū)分親緣關(guān)系較近的品種，但其對(duì)DNA質(zhì)量要求較高，并且操作復(fù)雜、成本較高。

1.3ISSR技術(shù)

簡(jiǎn)單重復(fù)間序列（inter simple sequence repeat，ISSR）是基于微衛(wèi)星標(biāo)記（SSR）發(fā)展而來(lái)的一種分子標(biāo)記，由Zietkiewicz等于1994年提出[35]。[JP2]它是在微衛(wèi)星序列的3′端或5′端錨定2～4個(gè)核苷酸，以其為引物對(duì)SSR之間的DNA片段進(jìn)行擴(kuò)增。ISSR技術(shù)即利用了豐富的SSR序列信息，同時(shí)又克服了RFLP技術(shù)的局限性和RAPD的假陽(yáng)性[36]，以其簡(jiǎn)單迅速、多態(tài)性豐富、穩(wěn)定高效等特點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于品種鑒定、親緣關(guān)系鑒定、遺傳多樣性分析以及遺傳圖譜構(gòu)建等方面。[JP]

Argade等以印度的43份無(wú)籽葡萄品種（歐亞種）為材料，利用ISSR分子標(biāo)記方法對(duì)其進(jìn)行鑒定，篩選出的14個(gè)多態(tài)性引物能夠準(zhǔn)確地將樣本區(qū)分開(kāi)，其中有3對(duì)ISSR引物（UBC857、888和890）能將該42個(gè)無(wú)籽葡萄品種全部清楚地區(qū)分開(kāi)[37]。Hassan等依據(jù)表型、ISSR標(biāo)記對(duì)3份埃及葡萄品種進(jìn)行分析，經(jīng)UPGMA軟件聚類發(fā)現(xiàn)Red Romy與Matrouh親緣關(guān)系較近，與Bez E1-anza較遠(yuǎn)，認(rèn)為ISSR標(biāo)記適合于葡萄品種鑒定[38]。2014年，Choudhary等用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)，采用10對(duì)ISSR引物對(duì)Nanasaheb purple、Sonaka、Thompson seedless和Ganesh的遺傳變異進(jìn)行了分析，再次證明ISSR標(biāo)記用于葡萄品種鑒定的可行性[39]。錢春等利用ISSR分子標(biāo)記方法分別鑒定了白香蕉及其芽變品種和巨峰及其芽變株系，結(jié)果表明，ISSR標(biāo)記能有效用于芽變鑒定[40-41]。李繼洋等對(duì)新疆19份葡萄品種的DNA進(jìn)行了ISSR分析，建立了14個(gè)葡萄品種的DNA指紋圖譜，為葡萄品種的快速鑒定奠定了基礎(chǔ)[42]。張永輝等應(yīng)用ISSR技術(shù)分析了81份葡萄品種的遺傳關(guān)系，根據(jù)聚類結(jié)果，將誤定為毛葡萄的毛葡萄1099確定為桑葉葡萄，并確定福建野葡萄和華東葡萄1058屬于同物異名材料[43]。張娜以新疆的137份葡萄種質(zhì)為試驗(yàn)材料，采用ISSR標(biāo)記對(duì)其遺傳多樣性進(jìn)行了分析，根據(jù)聚類結(jié)果得知新疆本地葡萄品種并非野生種，而是由歐亞種演變而來(lái)的[44]。綜上所述，ISSR技術(shù)適合用于葡萄品種鑒定，但I(xiàn)SSR也存在一定的缺點(diǎn)，即其只是部分共顯性，不能有效區(qū)分檢測(cè)位點(diǎn)的純合與雜合。

1.4SRAP技術(shù)

相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性（sequence-related amplified polymorphism，SRAP）發(fā)展于2001年，由美國(guó)加州大學(xué)的Li等提出[45]。其原理是利用設(shè)計(jì)的引物對(duì)開(kāi)放閱讀框（open reading frames，ORFs）進(jìn)行擴(kuò)增[46]，正向引物對(duì)外顯子進(jìn)行擴(kuò)增，反向引物對(duì)內(nèi)含子和啟動(dòng)子區(qū)域進(jìn)行擴(kuò)增，由于不同物種以及個(gè)體間的內(nèi)含子、啟動(dòng)子和間隔序列存在很大的變異，從而擴(kuò)增出多態(tài)性片段。SRAP分子標(biāo)記技術(shù)具有操作簡(jiǎn)單、可靠性好、重復(fù)性好等特點(diǎn)，且優(yōu)于AFLP、ISSR和RAPD，在種質(zhì)資源遺傳多樣性分析以及品種鑒定上得到廣泛應(yīng)用。

苑煒建立了適于葡萄SRAP分析的技術(shù)體系，應(yīng)用SRAP分析標(biāo)記評(píng)價(jià)了156份葡萄種質(zhì)的親緣關(guān)系及遺傳多樣性水平[47]。Guo等利用19對(duì)SRAP引物區(qū)分開(kāi)了包括歐亞種、歐美雜種、中國(guó)野生種在內(nèi)的76份葡萄種質(zhì)，其中包含洛浦早生與京亞、98-1與緋紅、98-2與巨峰，表明SRAP也可鑒定芽變品種[48]。Liu等以中國(guó)野生葡萄為試驗(yàn)材料，應(yīng)用SRAP技術(shù)對(duì)其遺傳多樣性進(jìn)行了分析，在遺傳相似系數(shù)為0.84處可清楚地區(qū)分開(kāi)所有品種，聚類結(jié)果也驗(yàn)證了桑葉葡萄是毛葡萄的亞種[49]。張旭彤等也利用SRAP標(biāo)記技術(shù)對(duì)中國(guó)野生葡萄進(jìn)行了研究，進(jìn)一步證明了SRAP標(biāo)記鑒定葡萄品種的可行性[50-53]。但是，SRAP標(biāo)記也存在一定的限制，其沒(méi)有通用的退火溫度，研究者需要對(duì)不同植物材料的退火溫度進(jìn)行摸索，從而延長(zhǎng)了SRAP標(biāo)記的試驗(yàn)周期，且SRAP是針對(duì)ORFs區(qū)域進(jìn)行擴(kuò)增，對(duì)基因組的擴(kuò)增范圍有限。endprint

1.5SNP技術(shù)

單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphism，SNP）分子標(biāo)記是在1996年由Lander提出的第3代DNA遺傳標(biāo)記[54]，是指基因組DNA序列上單個(gè)堿基的變異所引起的DNA序列多態(tài)性，這種變異是由單個(gè)堿基的轉(zhuǎn)換、顛換所致。SNP標(biāo)記是用于檢測(cè)種內(nèi)個(gè)體間遺傳變異的分子單位最小的技術(shù)，穩(wěn)定性好、數(shù)量巨大且分布廣泛，其多樣性是目前所有分子標(biāo)記中最豐富的一種。目前SNP已廣泛應(yīng)用于遺傳多樣性分析、品種鑒定等方面。

Dong等設(shè)計(jì)9對(duì)SNP引物成功地區(qū)分開(kāi)了16個(gè)葡萄品種，結(jié)果證實(shí)SNP標(biāo)記可用于葡萄品種鑒定以及遺傳多樣性分析[55]。Riahi等利用73個(gè)SNP標(biāo)記對(duì)44份突尼斯葡萄品種的[WTBX][STBX]VvmybA1基因、VvmybA2[WTBZ][STBZ]基因進(jìn)行分析，研究品種之間的親緣關(guān)系及遺傳多樣性，結(jié)果分別用27個(gè)SNP標(biāo)記和22個(gè)SNP標(biāo)記區(qū)分開(kāi)了22份突尼斯栽培種以及22份突尼斯野生種，認(rèn)為開(kāi)發(fā)的2套SNP標(biāo)記對(duì)今后的品種鑒定有巨大的幫助[56]。Ghaffari等同樣也以突尼斯葡萄品種為試驗(yàn)材料，采用SNP分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)其中的29份野生種與28份栽培種的親緣關(guān)系進(jìn)行了分析，結(jié)果表明，突尼斯的野生種并非是當(dāng)?shù)仄贩N，可能來(lái)自其他地區(qū)，同時(shí)發(fā)現(xiàn)2個(gè)錯(cuò)誤命名品種（Turki與Reine de Vignes）[57]。Cabezas等通過(guò)對(duì)挑選出的11個(gè)樣本進(jìn)行重測(cè)序并獲得了300多個(gè)SNP標(biāo)記，對(duì)其進(jìn)行分析后最終篩選出48個(gè)均勻分布于葡萄19條染色體上的具有高分辨率的SNP標(biāo)記，將其作為葡萄基因分型的一套標(biāo)準(zhǔn)，并利用該標(biāo)準(zhǔn)成功鑒定了來(lái)自世界各地的一組葡萄品種，充分證明SNP分子標(biāo)記技術(shù)的可靠性及穩(wěn)定性[58]。所有這些研究都證實(shí)了SNP分子標(biāo)記可以用于葡萄品種的鑒定。但是用于檢測(cè)SNP的DNA芯片設(shè)計(jì)成本高，且由于DNA樣品的復(fù)雜性，有些SNP不能被檢測(cè)到。

1.6SSR技術(shù)

簡(jiǎn)單重復(fù)序列（simple sequence repeat，SSR）別稱微衛(wèi)星DNA（microsatellite DNA），由Moore等于1991年創(chuàng)立[59]，是一類由1～6個(gè)堿基為重復(fù)單元組成的簡(jiǎn)單串聯(lián)重復(fù)序列。這些簡(jiǎn)單重復(fù)序列均勻、隨機(jī)、廣泛地分布于真核生物的基因組上，具有豐富的多態(tài)性。其基本原理是根據(jù)SSR兩端的保守互補(bǔ)序列設(shè)計(jì)1對(duì)特異引物，利用PCR對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)增，因重復(fù)單元的次數(shù)不同，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度就產(chǎn)生了差異，從而體現(xiàn)出SSR座位上的多態(tài)性。SSR分子標(biāo)記具有標(biāo)記數(shù)量多、多態(tài)性高、信息量高、試驗(yàn)穩(wěn)定性和重復(fù)性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單方便、對(duì)DNA質(zhì)量要求低、呈共顯性遺傳等獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，已經(jīng)成為目前分子標(biāo)記技術(shù)的熱點(diǎn)，在國(guó)內(nèi)外得到了廣泛的應(yīng)用。

Thomas等相繼在1993、1996、1999年報(bào)道了VVS2、VVMD5、VVMD7、VVMD32、VVMD28、VVMD27、VVMD25[60-62]等7個(gè)適合葡萄品種鑒定的SSR引物。1999年，Sefc等為了豐富SSR標(biāo)記多態(tài)性，又開(kāi)發(fā)了2對(duì)SSR引物VrZAG79和VrZAG62[63]。因該9對(duì)引物均勻分布于葡萄19條染色體上且具有高的多態(tài)性而被國(guó)外視為通用引物，并且法國(guó)、意大利、德國(guó)、瑞士、美國(guó)等國(guó)研究者利用該9對(duì)引物構(gòu)建了數(shù)據(jù)庫(kù)。2006年Kiss等利用SSR分子標(biāo)記方法構(gòu)建了109個(gè)葡萄品種的SSR指紋圖譜，可以方便其他研究者利用該指紋圖譜進(jìn)行品種鑒定[64]。韓國(guó)研究者Cho等利用SSR-PCR標(biāo)記技術(shù)對(duì)30個(gè)葡萄品種進(jìn)行了鑒定，研究表明Jinok與康拜爾早生相似系數(shù)為1，可能為同一品種，同時(shí)僅用3對(duì)SSR引物（VVIt60、VVIn61、VVIu20）就將剩余的28份種質(zhì)區(qū)分開(kāi)[65]。Durán等采用SSR技術(shù)從分子水平上分析了阿根廷品種Pedro Giménez和西班牙品種Pedro Ximénez的差異，證明了兩者并非是同一品種，并認(rèn)為Pedro Giménez是Muscat of Alexandria和Criolla Chica的后代[66]。Jahnke等依據(jù)SSR分子標(biāo)記技術(shù)完成了砧木品種的分析鑒定[67]。2015年Mihaljevic等以克羅地亞和黑山的284個(gè)地方品種為試驗(yàn)材料，利用9對(duì)SSR引物對(duì)其進(jìn)行遺傳多樣性分析，結(jié)果檢測(cè)出25個(gè)之前未曾報(bào)道過(guò)的基因型，并將得到的數(shù)據(jù)與歐洲數(shù)據(jù)庫(kù)以及其他已報(bào)道的相關(guān)研究結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)了一些新的同名異物和同物異名品種[68]。SSR分子標(biāo)記還可用于親本鑒定[69]、無(wú)性系鑒定[70-71]以及同物異名和同名異物品種的鑒定[72-74]。目前國(guó)內(nèi)也開(kāi)展了SSR標(biāo)記鑒定葡萄品種的研究，例如樊秀彩等以山葡萄、河岸葡萄以及239株二者的雜交后代為材料，從12對(duì)SSR引物中篩選出7對(duì)能擴(kuò)增出父本特異條帶的引物，作為雜種鑒定的標(biāo)記，利用該7對(duì)特異引物對(duì)供試材料進(jìn)行快速鑒定，結(jié)果表明，雜交后代中有161株被確認(rèn)為真雜種，認(rèn)為SSR標(biāo)記可有效地對(duì)葡萄屬種間雜種進(jìn)行鑒定[75]。杜晶晶應(yīng)用9對(duì)SSR引物鑒別了80份葡萄種質(zhì)，并構(gòu)建了80份葡萄種質(zhì)的有效分子身份證[76]。李慧等利用SSR標(biāo)記和IRAP標(biāo)記對(duì)關(guān)口葡萄的親緣關(guān)系進(jìn)行了分析，結(jié)果表明關(guān)口葡萄屬于歐美雜交種，既不是尼加拉也不是白香蕉[77]。成冰等對(duì)13個(gè)釀酒白葡萄品種進(jìn)行了SSR分析與鑒定，研究表明引物VrZAG62和VVIb66都可以將這13個(gè)釀酒白葡萄品種區(qū)分開(kāi)[78]。憲立杰等對(duì)取自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院鄭州果樹研究所葡萄資源圃的45份葡萄種質(zhì)進(jìn)行了SSR分析，利用19對(duì)核心引物擴(kuò)增出76條帶，其中74條具有多態(tài)性，并利用SSR標(biāo)記初步建立了一個(gè)SSR基因型指紋庫(kù)，為鑒定葡萄品種或品系提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)[79]。郭春苗等以新疆44個(gè)適宜制干葡萄品種為試材，從52對(duì)引物中篩選出8對(duì)多態(tài)性高的引物并對(duì)其進(jìn)行SSR分析，利用4條引物構(gòu)建了品種DNA指紋圖譜，通過(guò)統(tǒng)計(jì)測(cè)驗(yàn)可將44份葡萄種質(zhì)區(qū)分開(kāi)來(lái)，認(rèn)為SSR分子標(biāo)記技術(shù)可準(zhǔn)確地鑒定葡萄品種[80]。李雪雁等以75個(gè)葡萄栽培品種為材料，選用19對(duì)核心SSR引物對(duì)其進(jìn)行研究，建立了一套適合于葡萄DNA指紋圖譜構(gòu)建的技術(shù)體系，為葡萄種質(zhì)資源的鑒定提供了依據(jù)[81]。尹玲等對(duì)我國(guó)新育成的24份葡萄種質(zhì)進(jìn)行了SSR分析，結(jié)果表明，所用的6對(duì)SSR引物可以明確地區(qū)分開(kāi)供試葡萄品種，還能正確地鑒定出品種的倍性，并建立了24份葡萄品種的SSR指紋圖譜，為品種鑒定、親緣關(guān)系分析以及植物品種權(quán)保護(hù)提供參考依據(jù)[82]。研究者普遍認(rèn)為，SSR分子標(biāo)記具有高的多態(tài)性，非常適用于葡萄品種鑒定和DNA指紋圖譜的構(gòu)建。endprint

1.7iPBS技術(shù)

引物結(jié)合位點(diǎn)間擴(kuò)增（inter primer binding site，iPBS）標(biāo)記是一種新型、簡(jiǎn)單、快速、高效的分子標(biāo)記方法，該技術(shù)由Kalendar等在2010年建立[83]。它是以長(zhǎng)末端重復(fù)序列（long terminal repeats，LTR）類反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子保守位點(diǎn)設(shè)計(jì)引物對(duì)該類反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子中2個(gè)引物結(jié)合位點(diǎn)（PBS）區(qū)間進(jìn)行擴(kuò)增的一種分子標(biāo)記技術(shù)，與早期基于反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子的分子標(biāo)記方法不同，不須要預(yù)先獲知LTR的序列。iPBS標(biāo)記技術(shù)是葡萄種質(zhì)資源遺傳多樣性分析及鑒定的一種新的技術(shù)手段。近些年，iPBS標(biāo)記在杏[84]、楊梅[85]、雪蓮果[86]、虎杖[87]、牡丹[88]等植物上都有所研究。

2014年張瀟玉等以巨峰葡萄為試材，iPBS引物2249為擴(kuò)增引物，對(duì)葡萄iPBS-PCR反應(yīng)體系的各個(gè)成分以及退火溫度進(jìn)行優(yōu)化，利用優(yōu)化后的iPBS-PCR反應(yīng)體系對(duì)18份葡萄種質(zhì)進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)，獲得的條帶清晰、穩(wěn)定且多態(tài)性高，為葡萄種質(zhì)資源鑒定及遺傳多樣性評(píng)價(jià)提供了重要的技術(shù)支持[89]。Guo等對(duì)35份葡萄種質(zhì)進(jìn)行了iPBS分析，利用15對(duì)iPBS引物擴(kuò)增出99條DNA譜帶，其中86.3%具有多態(tài)性，由軟件UPGMA進(jìn)行聚類，結(jié)果表明葡萄栽培種和野生種存在明顯的差異，且擁有豐富的遺傳多樣性[90]。iPBS也存在自身的限制，其對(duì)模板DNA純度和片段大小要求較高。iPBS作為一種剛發(fā)展起來(lái)的新型分子標(biāo)記，在葡萄品種鑒定上的應(yīng)用剛起步。

2小結(jié)與展望

葡萄品種的鑒定方法從最初的形態(tài)學(xué)鑒定發(fā)展到同工酶鑒定，再到現(xiàn)在常用的分子標(biāo)記鑒定，經(jīng)歷了從形態(tài)學(xué)到分子生物學(xué)，從外部到內(nèi)部的過(guò)程。傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)標(biāo)記及同工酶鑒定易受環(huán)境因素的影響，同時(shí)也受不同發(fā)育時(shí)期的限制。而分子標(biāo)記則不存在上述問(wèn)題，它是從分子的角度展示了不同品種間存在的差異。本文所介紹的幾種DNA分子標(biāo)記技術(shù)在葡萄品種鑒定應(yīng)用中各有優(yōu)缺點(diǎn)，在鑒定一些不易區(qū)分的親緣關(guān)系較近的品種或芽變品種時(shí)，可將幾種分子標(biāo)記方法相結(jié)合以達(dá)到最終目標(biāo)。DNA分子標(biāo)記的發(fā)展是永無(wú)止境的，今后不僅要加速開(kāi)發(fā)新型的DNA指紋技術(shù)，還要對(duì)現(xiàn)有DNA分子標(biāo)記技術(shù)加以改進(jìn)，建立快速鑒定葡萄品種的方法體系，從而實(shí)現(xiàn)品種鑒定的簡(jiǎn)單化、自動(dòng)化。

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，以DNA分子標(biāo)記為基礎(chǔ)的指紋圖譜構(gòu)建逐漸成為熱點(diǎn)，因其具有準(zhǔn)確可靠、簡(jiǎn)便快速、易于自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)已成為品種鑒定的重要技術(shù)手段。國(guó)際植物品種權(quán)保護(hù)保護(hù)聯(lián)盟（UPOV）在BMT測(cè)試指南草案中已經(jīng)將構(gòu)建DNA指紋數(shù)據(jù)庫(kù)的標(biāo)記方法確定為SSR和SNP[4]，SSR標(biāo)記以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，成為當(dāng)前構(gòu)建指紋圖庫(kù)以及品種鑒定的首選標(biāo)記。隨著生物技術(shù)和互聯(lián)網(wǎng)信息技術(shù)的發(fā)展壯大，構(gòu)建品種DNA指紋數(shù)據(jù)庫(kù)和全國(guó)統(tǒng)一查詢平臺(tái)勢(shì)在必行?？梢栽诶眯螒B(tài)學(xué)鑒定品種的同時(shí)，通過(guò)篩選適合葡萄品種鑒定的核心引物，建立現(xiàn)有葡萄品種的DNA指紋數(shù)據(jù)庫(kù)，并利用計(jì)算機(jī)技術(shù)將該指紋數(shù)據(jù)庫(kù)與對(duì)應(yīng)品種的形態(tài)學(xué)數(shù)據(jù)相結(jié)合建立一個(gè)平臺(tái)，從而實(shí)現(xiàn)快速鑒定葡萄品種的目的。該平臺(tái)的建立可以使試驗(yàn)數(shù)據(jù)在不同實(shí)驗(yàn)室得到共享，可有效保護(hù)葡萄育成品種的知識(shí)產(chǎn)權(quán)和育種者的權(quán)益，保證葡萄產(chǎn)業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展。

[HS2]參考文獻(xiàn)：

[1]Laucou V，Lacombe T，Dechesne F，et al. High throughput analysis of grape genetic diversity as a tool for germplasm collection management[J]. Theoretical and Applied Genetics，2011，122（6）：1233-1245.

[2]姜建福，孫海生，樊秀彩，等. 我國(guó)葡萄品種權(quán)保護(hù)現(xiàn)狀與分析[J]. 農(nóng)業(yè)科技管理，2015，34（5）：61-65.

[3]Emanuelli F，Lorenzi S，Grzeskowiak L，et al. Assessment of diversity and genetic structure is an essential step for effective use of grape germplasm collections[C]. Ⅲ International Symposium on Molecular Markers in Horticulture，2013：27-30..

[4]沈永寶，施季森. 植物種或品種鑒定的展望[J]. 江蘇林業(yè)科技，2004，31（5）：41-45.

[5]金偉棟，洪德林. 雜交水稻品種指紋鑒定研究進(jìn)展[J]. 上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2006，22（1）：104-108.

[6]劉靜，何濤，淳澤. 分子標(biāo)記技術(shù)在石斛屬植物中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào)，2008，14（6）：855-862.

[7]楊坤，唐浩，李祥羽. 利用DNA指紋圖譜輔助植物新品種保護(hù)的可能性[J]. 生物技術(shù)通報(bào)，2009（1）：1-5.

[8]Williams J K，Kubelik A R，Livak K J，et al. DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers[J]. Nucleic Acids Research，1990，18（22）：6531-6535.

[9]Welsh J，Mcclelland M. Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers[J]. Nucleic Acids Research，1990，18（24）：7213-7218.[ZK）]endprint

[10]陳姝，錢正強(qiáng)，宮霞，等. SSR和RAPD 2種分子標(biāo)記對(duì)昆明西山野生蘡薁葡萄資源遺傳多樣性分析比較[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2010，23（6）：2008-2013.

[11]Ergül A，Marasali B，A[KG-*3]g[DD（-1*2][HT6]ˇ[DD）]ao[KG-*3]g[DD（-1*2][HT6]ˇ[DD）]lu Y S. Molecular discrimination and identification of some Turkish grape cultivars（Vitis vinifera L.）by RAPD markers[J]. VITIS-Journal of Grapevine Research，2002，41（3）：159.

[12]于華平，房經(jīng)貴，張美勇，等. RAPD標(biāo)記用于葡萄，蘋果等7種果樹的品種鑒定的研究[J]. 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2009，21（10）：5-9.

[13]Wolf T，Eimert K，Ries R. Reliable identification of grapevine rootstock varieties using RAPD PCR on woody samples[J]. Australian Journal of Grape and Wine Research，1999，5（2）：34-38.

[14]吳紅，常永義，郝燕，等. 利用RAPD標(biāo)記研究部分葡萄品種的親緣關(guān)系[J]. 果樹學(xué)報(bào)，2008，25（6）：932-936.

[15]Stavrakakis M H P. Discrimination of eight Greek grape cultivars. （Vitis vinifera L.） by random amplified polymorphic DNA markers[J]. Vitis，1997，36（4）：175-178.

[16]王軍，葛玉香，賀普超. RAPD標(biāo)記在山葡萄種質(zhì)鑒定中的應(yīng)用[J]. 植物研究，2004，24（4）：473-476.

[17]Frotscher J，Nocentini M，Ruehl E，et al. Quality control：identification of table grape cultivars using RAPD markers[C]. Ⅱ International Symposium on Biotechnology of Fruit Species，2012：193-196.

[18]Bajraktari Y，Cadri N，Papa S，et al. Ampelographic and random amplified polymorphic DNA（RAPDS）based analysis of six grapewine varieties of Rahovec，Kosovo[J]. Journal of Hygienic Engineering and Design，2014，7：180-185.

[19]李玉霞，龔玉梅，王振平. 釀酒葡萄品種“蛇龍珠”親緣關(guān)系的RAPD分析[J]. 中外葡萄與葡萄酒，2008（3）：17-20.

[20]李紅娟，周新明，劉勇強(qiáng)，等. 蛇龍珠親緣關(guān)系鑒定在營(yíng)養(yǎng)系選種中的應(yīng)用[J]. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2012，28（28）：153-157.

[21]Zhao M Z，Zhang Y P，Wu W M，et al. A new strategy for complete identification of 69 grapevine cultivars using random amplified polymorphic DNA（RAPD）markers[J]. Afr.J.Plant Sci，2011，5（4）：273-280.

[22]張曉瑩，張彥，宋長(zhǎng)年，等. 利用基于DNA標(biāo)記的人工繪制植物品種鑒別圖（MCID）法快速鑒定歐亞葡萄品種[J]. 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2012，20（6）：703-714.

[23]王玉娟，張彥，房經(jīng)貴，等. 利用基于RAPD標(biāo)記的MCID法快速鑒定72個(gè)葡萄品種[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，45（14）：2913-2922.

[24]El-Sayed N E，Hashad M M，Shaaban M M，et al. Molecular characterization and discrimination among grapevine cultivars by RAPD markers[J]. Austrilian Journal of Basic and Applied Sciences，2011，5（2）：230-235.

[25]張國(guó)海. 兩個(gè)早熟葡萄芽變品種生物學(xué)特性研究與分子鑒定[D]. 武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2010.

[26]Zabeau M，Vos P. Selective restriction fragment amplification：a general method for DNA fingerprinting：EP92402629 [P]. 1993-10-20.

[27]Vos P，Hogers R，Bleeker M，et al. AFLP：a new technique for DNA fingerprinting[J]. Nucleic Acids Research，1995，23（21）：4407-4414.

[28]Meneghetti S，Calò A，Bavaresco L. A strategy to investigate the intravarietal genetic variability in Vitis vinifera L. for clones and biotypes identification and to correlate molecular profiles with morphological traits or geographic origins[J]. Molecular Biotechnology，2012，52（1）：68-81.endprint

[29]Stajner N，Jakse J，Javornik B，et al. Highly variable AFLP and S-SAP markers for the identification of ‘Malbec and ‘Syrah clones[J]. Vitis，2009，48（3）：145-150.

[30]Scott K D，Ablett E M，Lee L S，et al. AFLP markers distinguishing an early mutant of Flame Seedless grape[J]. Euphytica，2000，113（3）：243-247.

[31]Cervera M T，Cabezas J A，Sánchez-Escribano E，et al. Characterization of genetic variation within table grape varieties（Vitis vinifera L.） based on AFLP markers[J]. Vitis，2000，39（3）：109-114.

[32]鮑露，徐昌杰，江文彬，等. 葡萄AFLP技術(shù)體系建立及其在超藤與藤稔葡萄品種鑒別中的應(yīng)用[J]. 果樹學(xué)報(bào)，2005，22（4）：422-425.

[33]Alba V，Anaclerio A，Gasparro M，et al. Ampelographic and molecular characterisation of aglianico accessions （Vitis vinifera L.） collected in southern Italy[J]. South African Journal of Enology and Viticulture，2011，32（2）：164-173.

[34]Shinde M P，Upadhyay A，Aher L B，et al. Molecular marker analysis to differentiate a clonal selection of Centennial Seedless grapevine[J]. African Journal of Biotechnology，2013，12（14）：1594-1597.

[35]Zietkiewicz E，Rafalski A，Labuda D. Genome fingerprinting by simple sequence repeat （SSR）-anchored polymerase chain reaction amplification[J]. Genomics，1994，20（2）：176-183.

[36]張青林，羅正榮. ISSR及其在果樹上的應(yīng)用[J]. 果樹學(xué)報(bào)，2004，21（1）：54-58.

[37]Argade N C，Tamhankar S A，Karibasappa G S，et al. DNA profiling and assessment of genetic relationships among important seedless grape（Vitis vinifera） varieties in India using ISSR markers[J]. Journal of Plant Biochemistry and Biotechnology，2009，18（1）：45-51.

[38]Hassan N A，El-Homosany A，Gomma A H，et al. Morphological and ISSR polymorphisms in some Egyptian grapes（Vitis vinefera L.）collection[J]. World Applied Sciences Journal，2011，15（10）：1369-1375.

[39]Choudhary R S，Zagade V S，Khalakar G D，et al. ISSR based genotypic differentiation of grape（Vitis Vinifera L.）[J]. The Bioscan，2014，9（2）：823-828.

[40]錢春. 白香蕉葡萄芽變突變體鑒定及四倍體誘導(dǎo)研究[D]. 重慶：西南大學(xué)，2006.

[41]李琳. 巨峰葡萄芽變株系的鑒定及分子標(biāo)記分析[D]. 金華：浙江師范大學(xué)，2013.

[42]李繼洋，代培紅，羅淑萍，等. 基于ISSR的葡萄品種親緣關(guān)系分析及其指紋圖譜構(gòu)建[J]. 新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，37（1）：30-34.

[43]張永輝，劉崇懷，樊秀彩，等. ISSR標(biāo)記在中國(guó)野生葡萄分類中的應(yīng)用[J]. 果樹學(xué)報(bào)，2011，28（3）：406-412.

[44]張娜. 葡萄種質(zhì)資源遺傳多樣性的ISSR分析[D]. 烏魯木齊：新疆大學(xué)，2015.

[45]Li G，Quiros C F. Sequence-related amplified polymorphism （SRAP），a new marker system based on a simple PCR reaction：its application to mapping and gene tagging in Brassica[J]. Theoretical and Applied Genetics，2001，103（2/3）：455-461.

[46]楊迎花，李先信，曾柏全，等. 新型分子標(biāo)記SRAP的原理及其研究進(jìn)展[J]. 湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013（5）：15-17.endprint

[47]苑煒. 156份新疆葡萄種質(zhì)資源分子標(biāo)記分析[D]. 新疆：新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)，2013.

[48]Guo D L，Zhang J Y，Liu C H，et al. Genetic variability and relationships between and within grape cultivated varieties and wild species based on SRAP markers[J]. Tree Genetics & Genomes，2012，8（4）：789-800.

[49]Liu C H，F(xiàn)an X C，Jiang J F，et al. Genetic diversity of Chinese wild grape species by SSR and SRAP markers[J]. Biotechnology & Biotechnological Equipment，2012，26（2）：2899-2903.

[50]張旭彤. 中國(guó)野生葡萄種質(zhì)資源的親緣關(guān)系研究[D]. 楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2012.

[51]Jing Z B，Wang X P，Cheng J M. Analysis of genetic diversity among Chinese wild Vitis species revealed with SSR and SRAP markers[J]. Genetics and Molecular Research，2013，12（2）：1962-1973.

[52]劉昆玉，徐豐，石雪暉，等. 基于SRAP標(biāo)記的刺葡萄親緣關(guān)系分析[J]. 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2013，38（6）：607-611.

[53]金炳奎，宗成文，曹后男，等. 山葡萄SRAP技術(shù)體系的建立及其在品種鑒定中的應(yīng)用[J]. 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，35（2）：198.

[54]Lander E S. The new genomics：global views of biology[J]. Science，1996，274（5287）：536-539.

[55]Dong Q H，Cao X E，Yang G，et al. Discovery and characterization of SNPs in Vitis vinifera and genetic assessment of some grapevine cultivars[J]. Scientia Horticulturae，2010，125（3）：233-238.

[56]Riahi L，Ayari B，Zoghlami N，et al. High efficiency and informativeness of a set of SNP molecular markers in Tunisian local grapevines discrimination[J]. Biochemical Systematics and Ecology，2013，51：175-183.

[57]Ghaffari S，Hasnaoui N，Zinelabidine L H，et al. Genetic diversity and parentage of Tunisian wild and cultivated grapevines （Vitis vinifera L.） as revealed by single nucleotide polymorphism （SNP） [JP2]markers[J]. Tree Genetics & Genomes，2014，10（4）：1103-1112.[JP]

[58]Cabezas J A，Ibáez J，Lijavetzky D，et al. A 48 SNP set for grapevine cultivar identification[J]. BMC Plant Biology，2011，11（1）：153.

[59]Moore S S，Sargeant L L，King T J，et al. The conservation of dinucleotide microsatellites among mammalian genomes allows the use of heterologous PCR primer pairs in closely related species[J]. Genomics，1991，10（3）：654-660.

[60]Thomas M R，Scott N S. Microsatellite repeats in grapevine reveal DNA polymorphisms when analysed as sequence-tagged sites [JP3]（STSs）[J]. Theoretical and Applied Genetics，1993，86（8）：985-990.[JP]

[61]Bowers J E，Dangl G S，Vignani R，et al. Isolation and characterization of new polymorphic simple sequence repeat loci in grape （Vitis vinifera L.）[J]. Genome，1996，39（4）：628-633.

[62]Bowers J E，Dangl G S，Meredith C P. Development and characterization of additional microsatellite DNA markers for grape[J]. American Journal of Enology and Viticulture，1999，50（3）：243-246.endprint

[63]Sefc K M，Regner F，Turetschek E，et al. Identification of microsatellite sequences in Vitis riparia and their applicability for genotyping of different Vitis species[J]. Genome，1999，42（3）：367-373.

[64]Kiss E，Kozma P，Halász G，et al. Pedigree of carpathian basin and hungarian grapevine cultivars based on microsatellite analysis[C]. Ⅸ International Conference on Grape Genetics and Breeding，2006：221-224.

[65]Cho K H，Bae K M，Noh J H，et al. Genetic diversity and identification of korean grapevine cultivars using SSR markers[J]. Korean Journal of Breeding Science，2011，43（5）：422-429.

[66]Duran M F，Agueero C B，Martinez L E. Assessing the identity of the variety ‘Pedro Gimenez grown in Argentina through the use of microsatellite markers[J]. Revista de La Facultad de Ciencias Agrarias，2011，43（2）：193-202.

[67]Jahnke G，Molnar G K，Majer J，et al. Analysis of grape rootstocks by ssr markers[J]. Journal International des Sciences de la Vigne et du Vin，2011，45（4）：199-210.

[68]Mihaljevi[KG-*3]c[DD（-1*2][HT6]'[DD）] M ，Anhalt U M，Rühl E，et al. Cultivar identity，intravarietal variation，and health status of native grapevine varieties in Croatia and Montenegro[J]. American Journal of Enology and Viticulture，2015，66（4）：531-541.

[69]Huber F，Roeckel F，Schwander F，et al. A view into American grapevine history：Vitis vinifera cv. ‘Semillon is an ancestor of ‘Catawba and ‘Concord[J]. Vitis，2016，55（2）：53-56.

[70]Nikkhah R，Ghaderi N. Identification of grapevine clone genotypes by microsatellite markers[C]. Ⅱ International Symposium on Underutilized Plant Species（Crops for the Future-Beyond Food Security），2011：791-796.

[71]Troshin L，Milovanov A，Zviagin A. Molecular marker screening of new promising wine grape clones[J]. Vitis，2015，54（SI）：105-106.

[72]García-Muoz S，Lacombe T，de Andrés M T，et al. Grape varieties （Vitis vinifera L.） from the Balearic Islands：genetic characterization and relationship with Iberian Peninsula and Mediterranean Basin[J]. Genetic Resources and Crop Evolution，2012，59（4）：589-605.

[73]Beslic Z，Todic S，Korac N，et al. Genetic characterization and relationships of traditional grape cultivars from Serbia[J]. Vitis，2012，51（4）：183-189.

[74]Crespan M，Calo A，Giannetto S，et al. ‘Sangiovese and ‘garganega are two key varieties of the Italian grapevine assortment evolution[J]. Vitis，2008，47（2）：97-104.

[75]樊秀彩，張穎，姜建福，等. SSR分子標(biāo)記鑒定山葡萄和河岸葡萄種間雜種[J]. 西北植物學(xué)報(bào)，2012，32（11）：2195-2200.endprint

[76]杜晶晶. 基于SSR標(biāo)記的葡萄遺傳多樣性分析及分子身份證構(gòu)建[D]. ?？冢汉Ｄ洗髮W(xué)，2013.

[77]李慧，羅正榮，張青林. 基于SSR和IRAP標(biāo)記的“關(guān)口葡萄”親緣關(guān)系分析[J]. 果樹學(xué)報(bào)，2014，31（6）：1040-1046.

[78]成冰，張京芳，馬正強(qiáng)，等. 釀酒白葡萄品種的SSR分析與鑒定[J]. 西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，29（2）：103-106.

[79]憲立杰，劉興菊，李雪雁，等. 葡萄種質(zhì)遺傳多樣性的SSR分析及指紋庫(kù)構(gòu)建[J]. 北方園藝，2013（11）：87-90.

[80]郭春苗，李寧，周曉明，等. 基于SSR標(biāo)記的葡萄品種（系）遺傳多樣性分析與指紋圖譜構(gòu)建[J]. 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，52（11）：2051-2058.

[81]李雪雁，梁海永，憲立杰，等. 基于SSR技術(shù)對(duì)七十五份栽培葡萄品種的鑒定研究[J]. 北方園藝，2015（13）：115-119.

[82]尹玲，張晨，向江，等. 我國(guó)新育成葡萄品種SSR指紋圖譜的建立[J]. 果樹學(xué)報(bào)，2015，32（3）：366-373.

[83]Kalendar R，Antonius K，Sm[KG-*4]y[DD（-1*2][HT6]'[DD）]kal P，et al. iPBS：a Universal method for DNA fingerprinting and retrotransposon isolation[J]. Theoretical and Applied Genetics，2010，121（8）：1419-1430.

[84][JP3]Baranek M，Meszaros M，Sochorova J，et al. Utility of retrotransposon-[JP]derived marker systems for differentiation of presumed clones of the apricot cultivar Velkopavlovicka[J]. Scientia Horticulturae，2012，143（143）：1-6.

[85]郭志海，王鵬凱，郄紅麗，等. 楊梅iPBS-PCR反應(yīng)體系的建立與優(yōu)化[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（11）：51-54.

[86]Ziarovská J，F(xiàn)ernández E C，Bezo M. Developing the iPBS strategy for yakon germplasm evaluation[J]. The Journal of Microbiology，Biotechnology and Food Sciences，2013，2（1）：1967-1979.

[87]陳靜，陳新，何忠寶，等. 不同產(chǎn)地虎杖基于iPBS技術(shù)的遺傳多樣性研究[J/OL]. （2012-02-29）[2016-01-20]. http：//www.paper.edu.cn/html/releasepaper/2012/02/1106/.

[88]張曦，侯小改，郭大龍，等. 利用iPBS技術(shù)克隆牡丹反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子LTR序列[J]. 植物學(xué)報(bào)，2014，49（3）：322-330.

[89]張瀟玉，郭大龍，郭明曉，等. 葡萄iPBS-PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化[J]. 果樹學(xué)報(bào)，2014，31（3）：508-513.

[90]Guo D L，Guo M X，Hou X G，et al. Molecular diversity analysis of grape varieties based on iPBS markers[J]. Biochemical Systematics and Ecology，2014，52：27-32.endprint