張放放，郭曉帆

（沈陽(yáng)工學(xué)院，遼寧 撫順 113122）

通過(guò)對(duì)富硒猴頭菇的凍干粉和香菇酶解物的研究，發(fā)現(xiàn)它們分別可使大腸埃希氏菌和大腸桿菌減少，對(duì)腸道菌群環(huán)境有改善的效果，從而提高生命體的免疫力。文章通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)系統(tǒng)分析不同食用菌子的實(shí)體水提物對(duì)腸道菌群的不同影響。

1 材料及方法

1.1 材料、試劑

從本地市場(chǎng)采購(gòu)的新鮮杏鮑菇、雙孢菇、平菇、黑木耳、香菇、金針菇6種菌類。

來(lái)自試劑公司美國(guó)Omega的D3350-1（此為提取出的細(xì)菌DNA試劑盒）和國(guó)產(chǎn)的分析純的其他化學(xué)試劑。

1.2 設(shè)備儀器

可旋轉(zhuǎn)的蒸發(fā)儀、壓力方式為立式的蒸汽滅菌器、既可數(shù)顯、測(cè)速又可保證恒溫的磁力攪拌器、高速組織的絞碎機(jī)、厭氧的手套箱、離心機(jī)、萬(wàn)用爐（電子）、恒溫水浴缸。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

（1）制備食用菌子的實(shí)體水提物。取一定的蒸餾水加熱，然后取蒸餾水一半體積的食用菌子原料，將其絞碎，放入蒸餾水中，在保證蒸餾水恒溫55℃的情況下，加熱2 h后，將混合液過(guò)濾并收集起濾液。將濾液通過(guò)低溫進(jìn)行濃縮、干燥冷凍，即為食用菌子的實(shí)體水提物。

（2）測(cè)定食用菌子的實(shí)體水提物具體成分。此實(shí)驗(yàn)采用的是自動(dòng)凱氏定氮儀法來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)含量；根據(jù)一些文獻(xiàn)測(cè)定實(shí)體水提物的總糖含量以及水分含量。

（3）配制厭氧培養(yǎng)基。厭氧培養(yǎng)基需要實(shí)體水提物、菊糖、牛肉膏粉、魚(yú)粉。首先將之前已經(jīng)提取出來(lái)的水提物分別放入6個(gè)瓶中，并且在每個(gè)瓶中各加入0.18 g的糖；取3個(gè)瓶，在瓶中分別加入0.12 g的牛肉膏和魚(yú)粉，并且再多加入0.3 g的菊糖，作為陽(yáng)性對(duì)照；另外3個(gè)瓶作為實(shí)驗(yàn)組。最后需要在6個(gè)瓶中各加入30 mL的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，然后放在121℃的高壓環(huán)境中，進(jìn)行2 h的滅菌。

（4）配制腸道微生物的培養(yǎng)液。配制此培養(yǎng)液需要保證沒(méi)有其他因素的影響，選擇了一位兩個(gè)月內(nèi)沒(méi)有服用過(guò)抗生素，且身體健康的青年男性作為受試者。首先需要將受試者的新鮮糞便收集起來(lái)。提取3 g已經(jīng)混合好的新鮮糞便，在里面加入30 m磷酸鹽緩沖液（需進(jìn)行脫氧處理），使用離心機(jī)將此混合液進(jìn)行離心，得到糞便懸液，且將其迅速放在之前準(zhǔn)備好的厭氧手套箱中。

（5）培養(yǎng)腸道微生物以及提取分離微生物的DNA。取出之前備好的糞便懸液0.3 g、厭氧培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)組2.7 mL、厭氧培養(yǎng)基對(duì)照組2.7 mL；將3種液體分別放在一起并進(jìn)行充分混合。將混合后的液體在厭氧手套箱重進(jìn)行恒溫培養(yǎng)，并每隔12 h進(jìn)行充分混合。48 h后即可完成對(duì)糞便懸液的接種。將接種好的糞便懸液進(jìn)行提取分離，需按照之前的DNA試劑盒上的說(shuō)明提取分離，提取分離完成后，將提取分離后的物質(zhì)放在-20℃的環(huán)境中保存。

（6）對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)序分析。將之前的分離出的DNA，通過(guò)引物接頭的連接，在經(jīng)過(guò)二代測(cè)序的方法，對(duì)測(cè)序后的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)收集，從而得到不同模板中DNA片段的序列。

2 結(jié)語(yǔ)

經(jīng)過(guò)上述實(shí)驗(yàn)，得出這樣的結(jié)論：不同食用菌子的實(shí)體水提物所含有的粗蛋白和還原糖均不相等，也因此不同食用菌的實(shí)體水提物對(duì)腸道微生物的影響各有不同，通過(guò)對(duì)腸道菌群的影響，達(dá)到對(duì)身體的影響。例如：食用黑木耳則能產(chǎn)生較多的雙歧桿菌，既能通腸胃、環(huán)節(jié)胃腸障礙，又能有效地抵抗炎癥和感染；而金針菇、杏鮑菇則能使身體里產(chǎn)生較多屬放線菌門(mén)的有益菌，能軟化和保護(hù)血管，增強(qiáng)免疫力，也可降低人體中血脂和膽固醇；雙孢菇的食用則可減少厚壁菌門(mén)的數(shù)量，達(dá)到減肥效果；平菇的食用則可使產(chǎn)生較多的乳桿菌，從而促進(jìn)肌體健康?？偟膩?lái)說(shuō)，不同的菌類實(shí)體水提物對(duì)腸道菌群有不同影響。