康靜靜，王昭悅，張子雁，焦 哲，張金花，陰正興，姬廣宙，霍 軍

(1.河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院 動(dòng)物醫(yī)藥學(xué)院， 河南 鄭州 450046；2.鄭州市金水區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村工作委員會(huì)， 河南 鄭州 450000；3.河南貝里奧生物科技有限公司，河南 鄭州 450000)

燙傷是指由于光、電、熱等作用于機(jī)體引起的皮膚、黏膜、皮下組織等的損傷，屬于常見(jiàn)的外傷疾病[1]。根據(jù)組織病理學(xué)觀察皮膚燙傷程度可將其分為三類(lèi)：Ⅰ°、Ⅱ°(淺Ⅱ°和深Ⅱ°)、Ⅲ°，不同程度的燙傷會(huì)引起不同程度的皮膚缺損、炎性反應(yīng)及機(jī)體機(jī)能障礙等[2]。近年來(lái)，由于中藥毒副作用小、不易產(chǎn)生藥物依賴(lài)性等優(yōu)點(diǎn)，使用中藥制劑治療燙傷越來(lái)越受到人們的重視。藥膏(又稱(chēng)軟膏、油膏)，是采用動(dòng)、植物油、蜂蜜、凡士林等基質(zhì)加入藥物細(xì)粉(或提取的有效成分)混合而成，具有一定的黏稠性，對(duì)皮膚具有保護(hù)、濕潤(rùn)、潤(rùn)澤作用，涂于皮膚或黏膜能漸漸軟化或溶化，有效成分可被緩慢吸收，持久發(fā)揮療效[3]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立小鼠皮膚燙傷模型，使用自制復(fù)方中草藥膏涂抹燙傷皮膚，同時(shí)以無(wú)藥物使用小鼠作為空白對(duì)照，從病理組織學(xué)角度探討自制中草藥膏在皮膚燙傷修復(fù)中的作用，為復(fù)方中草藥膏的開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供臨床依據(jù)。

1 材枓與方法

1.1 試劑與器材

10%福爾馬林固定液，乙醚，75%乙醇溶液，復(fù)方中草藥(金銀花、乳香、沒(méi)藥等)，5 mL注射器，恒溫水浴箱，Leica手動(dòng)輪轉(zhuǎn)切片機(jī)，光學(xué)顯微鏡成像系統(tǒng)等。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

6～8周齡Balb/c小鼠，購(gòu)自鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[SCXK(豫)2010-0002]，體重18～20 g，飼養(yǎng)1周適應(yīng)環(huán)境后，取30只小鼠隨機(jī)分為2組(空白對(duì)照組和復(fù)方中草藥膏組)，分籠飼養(yǎng)。其中每組各取3只作為正常對(duì)照，其余12只用于燙傷模型建立。

1.3 復(fù)方中草藥膏的制備

分別稱(chēng)取適量的中草藥(金銀花、沒(méi)藥、乳香、血余炭、冰片等)，煎液后，加入95%乙醇沉淀，取上清液，再加入一定量的羥苯乙酯、羊毛脂和凡士林，經(jīng)濃縮、靜置，滅菌處理，冷卻后制成藥膏使用。

1.4 小鼠背部皮膚燙傷模型的建立

根據(jù)參考文獻(xiàn)[4]中所示建模方法，建立小鼠背部皮膚燙傷模型。燙傷后小鼠按原有分組單籠飼養(yǎng)并給予飼料及水分。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中保證墊料干燥清潔，通風(fēng)良好。

1.4.1 給藥方法

空白對(duì)照組小鼠背部燙傷處不做特殊處理，自然愈合；復(fù)方中草藥膏組小鼠背部燙傷處皮膚給予涂膏處理，自建模后早晚各給藥1次，連續(xù)給藥21d，單籠飼養(yǎng)。

1.4.2 組織取材及樣品處理

從建模后首次給藥計(jì)算，分別在建模后第7 d、第14 d和第21 d末次用藥1 h后，每組隨機(jī)選取3只小鼠，頸椎脫臼處死，將燙傷處皮膚組織取出，置于新鮮配制的福爾馬林固定液中固定備用。

1.4.3 病理組織學(xué)觀察

將固定完全的皮膚組織制備石蠟組織切片，切片厚度不超過(guò)4 μm，HE染色后，顯微鏡下觀察燙傷處皮膚的愈合情況并采圖。

2 小鼠燙傷皮膚組織病理學(xué)觀察結(jié)果

2.1 空白對(duì)照組小鼠燙傷皮膚的組織病理學(xué)結(jié)果

如圖1所示，燙傷7 d后，空白對(duì)照組小鼠皮膚燙傷創(chuàng)面表皮細(xì)胞受損，損傷處可見(jiàn)較薄的肉芽組織層，其中有少量新生毛細(xì)血管，燙傷處皮下結(jié)締組織明顯水腫，組織間有大量粉紅染色的水腫液浸潤(rùn)，可見(jiàn)炎性細(xì)胞(圖1-A)；燙傷14d后，對(duì)照組小鼠燙傷處可見(jiàn)新生毛細(xì)血管和大量的成纖維細(xì)胞(圖1-B)，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯(圖1-C)；燙傷21d后，可見(jiàn)燙傷邊緣處皮膚大部分已修復(fù)完全，皮下組織內(nèi)可見(jiàn)新生的皮膚附屬結(jié)構(gòu)，但仍可見(jiàn)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(圖1-D)。

圖1 空白對(duì)照組小鼠燙傷皮膚的組織學(xué)觀察結(jié)果

2.2 復(fù)方中草藥膏組小鼠燙傷皮膚的組織病理學(xué)結(jié)果

如圖2所示，燙傷7 d后，用藥組小鼠燙傷皮膚創(chuàng)面可見(jiàn)明顯的新生肉芽組織層，表皮細(xì)胞已有增殖，皮下結(jié)締組織有水腫，以及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(圖2-A)；燙傷14 d后，用藥組小鼠燙傷處可見(jiàn)豐富的新生毛細(xì)血管和大量的成纖維細(xì)胞，肉芽組織間可見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(圖2-B)，部分區(qū)域可見(jiàn)纖維細(xì)胞和膠原纖維分布(圖2-C)；燙傷21 d后，可見(jiàn)燙傷處邊緣皮膚已修復(fù)完全，形成了完整的表皮結(jié)構(gòu)，可見(jiàn)表皮角質(zhì)層，皮下組織內(nèi)可見(jiàn)新生的皮膚附屬結(jié)構(gòu)(圖2-D)。

圖2 復(fù)方中草藥組小鼠燙傷皮膚的組織學(xué)觀察結(jié)果

3 討論

根據(jù)組織病理學(xué)觀察結(jié)果，與空白對(duì)照組相比，小鼠燙傷處皮膚經(jīng)過(guò)復(fù)方中草藥膏外涂治療后，表皮及真皮結(jié)構(gòu)組織處的炎性反應(yīng)均有明顯的改善，主要表現(xiàn)在炎性滲出液減少；燙傷處肉芽組織生成和成熟速度加快，新生毛細(xì)血管和成纖維細(xì)胞數(shù)量增加；燙傷后14 d即可見(jiàn)成熟的纖維細(xì)胞和膠原纖維；燙傷處表皮細(xì)胞再生良好，主要表現(xiàn)在表皮已完全再生，并出現(xiàn)角質(zhì)化。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，所用復(fù)方中草藥膏可通過(guò)減少燙傷局部滲出和炎癥反應(yīng)，加快肉芽組織生長(zhǎng)等方式促進(jìn)燙傷皮膚的修復(fù)。

目前臨床上常使用抗菌、消炎藥等治療燙傷，但抗菌消炎藥存在易過(guò)敏、易產(chǎn)生耐藥性、降低機(jī)體防御功能等缺點(diǎn)[5]。而傳統(tǒng)中藥尤其是外用中藥在傷口治療中具有獨(dú)特療效，故目前復(fù)方中藥制劑藥物在治療皮膚外傷中應(yīng)用較廣泛[6-9]。根據(jù)皮膚創(chuàng)傷愈合的病理學(xué)修復(fù)過(guò)程，通常在創(chuàng)傷發(fā)生后數(shù)小時(shí)內(nèi)便出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，且表皮開(kāi)始再生；2-3 d傷口開(kāi)始收縮，14 d左右停止；大約3 d時(shí)肉芽組織開(kāi)始增生，傷后近1個(gè)月皮膚基本愈合完全。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)制備石蠟組織切片，從病理組織學(xué)角度觀察不同時(shí)間、不同組別的Balb/c小鼠皮膚創(chuàng)面愈合情況，結(jié)果顯示符合皮膚愈合過(guò)程。與空白對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組愈合修復(fù)效果較好，可以作為自制復(fù)方中草藥膏促進(jìn)燙傷創(chuàng)面愈合作用的判定標(biāo)準(zhǔn)。本實(shí)驗(yàn)連續(xù)外涂復(fù)方中草藥膏21 d后，發(fā)現(xiàn)復(fù)方中草藥膏能顯著提高燙傷皮膚的愈合率，縮短創(chuàng)面愈合的時(shí)間。有關(guān)該藥膏治療燙傷的作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。