王 坤，黃曉露，梁曉靜，韋曉娟，李開祥，馬錦林

（廣西林業(yè)科學(xué)研究院 廣西特色經(jīng)濟(jì)林培育與利用重點(diǎn)實驗室，廣西 南寧 530002）

金花茶Camellia nitidissima屬山茶科Theaceae山茶屬Camellia金花茶組C. sect. Chrysantha植物[1]，是世界珍稀植物[2]，其花色金黃，瑩潤奪目，在山茶科植物中獨(dú)樹一色，具有極高的觀賞性以及極大的市場開發(fā)潛力[3]。自20世紀(jì)60年代初在廣西南寧首次被發(fā)現(xiàn)以來，轟動了世界園藝界和植物界，在國際上負(fù)有盛名，與銀杉、桫欏、珙桐等“植物活化石”齊名，屬《瀕危野生動植物種國際貿(mào)易公約》附錄Ⅱ中的植物種，被譽(yù)為“植物界大熊貓”[1]，被國內(nèi)外廣大園藝、育種工作者當(dāng)作培育黃色山茶系新品種的寶貴原始材料[4-5]。

金花茶植物中含有黃酮類[6]、多糖[7]、茶多酚[8]等多種活性成分，同時還含有豐富的天然微量元素，除了適宜制茶，還是一種傳統(tǒng)中草藥。近年來有關(guān)其活性研究表明，金花茶具有抗腫瘤[9]、抗氧化[10-11]、降血脂[12]、降血糖[13]等多種功效。近幾十年來，廣大園藝、育種和營養(yǎng)品及食品開發(fā)工作者針對這一珍稀物種在引種、資源收集與保存、生理研究[14]、優(yōu)良單株選育[15]、繁育[16]、綜合栽培技術(shù)以及加工利用方面[17]開展了大量的研究工作。特別是近年來，我國金花茶原產(chǎn)區(qū)對金花茶的花、葉的開發(fā)利用已初具規(guī)模[18]，產(chǎn)品暢銷，市場開發(fā)利用十分活躍，帶動了大面積的規(guī)模化、集約化的基地種植。

金花茶主產(chǎn)于中國，主要分布于我國南部的廣西，其次是越南，我國的貴州和云南及緬甸、泰國、馬來西亞和日本等有少量分布或零星栽培[19]。根據(jù)目前資料統(tǒng)計，越南目前總共發(fā)現(xiàn)有22個金花茶物種，與我國金花茶主產(chǎn)區(qū)的廣西接壤的越南北部地區(qū)，是越南金花茶主要分布中心。目前的文獻(xiàn)均是對金花茶中的單一成分進(jìn)行研究[20-21]，未綜合評價金花茶的藥用價值，為此，筆者選取具有顯著藥用價值的主要活性成分總黃酮、總多糖、皂苷、茶多酚[22]為考察指標(biāo)，對廣西本地金花茶與越南引進(jìn)金花茶的葉片進(jìn)行分析，對比研究其在藥用價值方面的差異性，旨在為選取開發(fā)利用價值高的金花茶優(yōu)良品種提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備與試劑

UV-2550型紫外-可見分光光度計（日本島津公司）、TP3200電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）、SK3310LHC超聲波提取器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）、L530低速離心機(jī)（湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司）、FW100高速萬能粉碎機(jī)（天津泰斯特儀器公司）。

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品：120 ℃下干燥至恒質(zhì)量；葡萄糖：使用前于105 ℃恒溫烘干至恒質(zhì)量；人參皂甙：120 ℃下干燥至恒質(zhì)量；沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品（GA，相對分子質(zhì)量188.14）；標(biāo)準(zhǔn)品均采購于南寧冠鑫科技有限公司；乙腈、甲醇為色譜純試劑；其他試劑均為分析純。

1.2 試驗材料

11種金花茶組植物栽培在廣西壯族自治區(qū)林業(yè)科學(xué)研究院金花茶種植資源庫，扦插苗，2～3年生。越南金花茶（塔姆島金花茶C.tamdaoensis、箱田金花茶C. hakodae、羅斯曼金花茶C. rosmanii、多毛金花茶C. hirsute、黃抱莖金花茶C. murauchii、厚葉金花茶C. crassiphylla、箱寧金花茶C. phanii）于2015年7月引自越南三島國家自然保護(hù)區(qū)。2016年6月28日，采集11種金花茶植物2年生老葉，經(jīng)洗凈烘干，用植物粉碎機(jī)粉碎成約50目，密封保存于-4 ℃冰箱中，備用。

1.3 試驗方法

1.3.1 總黃酮含量測定

1.3.1.1 樣品提取及測定

精密稱取1 g粉碎后的金花茶葉至100 mL燒瓶中，加入50 mL的70%乙醇溶液，冷浸30 min后，在70 ℃下浸提2.0 h，放冷至室溫，過濾，濾渣用70%乙醇溶液洗滌，合并濾液，然后將濾液移至100 mL容量瓶中定容，搖勻，作供試品溶液，待用。精密吸取供試品溶液0、1.0 mL，置于25 mL容量瓶中，分別加50%乙醇至10 mL，先加5%NaNO2溶液1 mL，靜置6 min后加10% Al(NO3)3溶液1 mL，6 min后加4% NaOH溶液10 mL，再加50%乙醇后靜置15 min，以加入0 mL供試品溶液為空白液，測定波長為510 nm。

1.3.1.2 線性關(guān)系考察

精密配制0.2 mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液，待用。分別取上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.0、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 mL置于25 mL容量瓶中，參照1.3.1.1的方法配制一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，測定波長為510 nm，以蘆丁含量（mg/mL）為縱坐標(biāo)，吸光度為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程如下，在0.2～1.6 mg/mL之間有良好的線性關(guān)系。

A＝0.3488C－0.002 7（R2＝0.999 8）。

1.3.2 總多糖含量測定

1.3.2.1 樣品提取及測定

稱取樣品0.1 g于離心管中，加入20 mL無水乙醇，充分混勻后超聲提取1 h，提取溫度為80 ℃，然后4 000 r/min離心10 min，棄去上清液，不溶物用10 mL乙醇溶液洗滌、離心。用水將上述不溶物轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶中，加入50 mL水，沸水浴回流提取2 h。冷卻至室溫，過濾，將上清液轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，殘渣洗滌2～3次，洗滌液轉(zhuǎn)移至容量瓶，加水定容。吸取1.00 mL樣品溶液于20 mL具塞試管中，測定吸光度，同時做空白實驗。

1.3.2.2 線性關(guān)系考察

配制100 mg/L標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液：稱取0.100 0 g葡萄糖于100 mL燒杯中，加水溶解，定容至1 000 mL，4 ℃冰箱中避光貯存。分別吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL標(biāo)準(zhǔn)液至試管中，蒸餾水補(bǔ)至1.0 mL。向試液中加入1.0 mL5%苯酚溶液，快速加入5 mL硫酸，靜置10 min。充分混勻后將試管放置于30 ℃水浴中反應(yīng)20 min，在490 nm處測吸光度，以質(zhì)量濃度C為橫坐標(biāo)，吸光度A縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程如下，在9.89～89.01 μg/mL之間有良好的線性關(guān)系。

A＝0.0106C＋0.073 6（R2＝0.999 7）。

1.3.3 總皂苷含量測定

1.3.3.1 樣品提取及測定

金花茶總皂苷含量測定采用香草醛-冰醋酸-高氯酸法[23]。精確稱量5 g金花茶葉粉末，以1∶1的比例加入蒸餾水，于80 ℃下25 kHz浸提2 h，反復(fù)提取2次，合并提取液，過濾濃縮得金花茶提取液100 mL，然后慢慢加入3倍體積的無水乙醇，邊加邊攪拌，溶液中不斷生成絮狀沉淀，于4 ℃冰箱中靜置24 h，離心分離，取上清液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至乙醇揮發(fā)完全，加入等體積的無水乙醚進(jìn)行萃取，反復(fù)3次后取下層溶液濃縮得到待測液10 mL。精確吸取待測液1.0 mL，用甲醇溶液定容至100 mL備用。

1.3.3.2 線性關(guān)系考察

精確配制質(zhì)量濃度為0.2284mg/mL的人參皂甙Rg1標(biāo)準(zhǔn)品溶液，置于-4 ℃冰箱中備用；準(zhǔn)確配制5%香草醛-冰醋酸溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。準(zhǔn)確吸取人參皂甙Rg1標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1 mL，揮干甲醇后加入0.35 mL新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液，1 min后，再加入1.0 mL高氯酸，于80 ℃的水浴中加熱，25 min后取出，用冰水浴冷卻10 min，冷卻后加入5.0 mL冰醋酸，搖勻，靜置15 min后于540 nm處測定吸光值，同時作空白對照。得回歸方程如下，在24.4～122.0 μg/mL之間有良好的線性關(guān)系。

A＝0.0066C＋0.011 6（R2＝0.999 0）。

1.3.4 茶多酚含量測定

1.3.4.1 樣品提取及測定[24]

稱取0.200 0 g均勻磨碎的試樣，加入70 ℃的70%的甲醇溶液5 mL，在70 ℃水浴中浸提30 min，冷卻后離心，取上清液，重復(fù)提取1次，合并上清液定容至10 mL，搖勻，過0.45 μm膜，然后用移液管移取2 mL至10 mL容量瓶中，用穩(wěn)定溶液（分別將25 mL EDTA溶液、25 mL抗壞血酸溶液、50 mL乙腈加入500 mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻）定容至刻度，搖勻，過0.45 μm膜，待測。

1.3.4.2 線性關(guān)系考察

配制沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（1 000 μg/mL）：稱取0.110±0.001 g沒食子酸，于100 mL容量瓶中溶解并定容至刻度，搖勻（現(xiàn)配）。用移液管分別移取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液于100 mL容量瓶中，分別用水定容至刻度，搖勻，質(zhì)量濃度分別為10、20、30、40、50 μg/mL。用移液管分別移取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液和水各1.0 mL于刻度試管內(nèi)，在每個試管內(nèi)分別加入5.0 mL的福林酚試劑，搖勻。反應(yīng)3～8 min，加入4.0 mL7.5%Na2CO3溶液，加水定容至刻度，搖勻。室溫下放置60 min。在765 nm波長條件下用分光光度計測定吸光度。以質(zhì)量濃度C為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程如下，在9.89～89.01 μg/mL之間有良好的線性關(guān)系。

A＝0.0107C＋0.033 7（R2＝0.999 9）。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品含量

取11種不同品種的金花茶組植物，分別測定其葉片的總黃酮、總多糖、總皂苷及茶多酚含量，結(jié)果見表1。

2.2 方差分析

使用SPSS19.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，不同金花茶組植物的主要活性成分含量的方差分析結(jié)果見表2。由表2中P值可見，這11種金花茶品種在4種主要活性成分含量方面差異均極顯著，尤其是茶多酚的含量，差異最為顯著（P值為1.41×10-13），其次為總黃酮、皂苷、總多糖的含量，P值分別為2.62×10-12、1.79×10-10、1.11×10-7。

2.3 聚類分析

使用SPSS19.0統(tǒng)計軟件，以金花茶葉片中4種有效活性成分含量為參數(shù)組合，對11種金花茶組植物進(jìn)行聚類分析，結(jié)果見圖1。

結(jié)果顯示，樹狀圖結(jié)果與金花茶品種有明顯的對應(yīng)關(guān)系。當(dāng)距離系數(shù)為10時，總體可以分為3大類，第1類有塔姆島金花茶、羅斯曼金花茶、凹脈金花茶、箱寧金花茶、箱田金花茶；第2類有多毛金花茶、黃抱莖金花茶、厚葉金花茶；第3類有顯脈金花茶、小花金花茶、普通金花茶。

第2類為藥用價值最高的金花茶品種，生理活性成分含量最高，而且這3種金花茶均屬于越南金花茶；而第3類為藥用價值最低的金花茶品種，生理活性成分含量最低，且均屬于廣西本地金花茶。第1類為藥用價值稍低的金花茶品種，其中包含4種越南金花茶和1種廣西本地金花茶。所以，

比起廣西本地金花茶，越南金花茶葉片藥用價值較高，具有較好的開發(fā)利用價值。

表1 11種金花茶組植物葉片中總黃酮、總多糖、總皂苷及茶多酚含量（n＝3）Table1 Contents of total flavonoids, total polysaccharides, total saponins and tea polyphenols in leaves of11cultivars of C. sect. Chrysantha (n＝3) %

表2 11種金花茶組植物葉片主要活性成分的方差分析Table2 Variance analysis of main active ingredient contents in leaves of11cultivar of C. sect. Chrysantha

圖1 11種金花茶組植物的聚類分析Fig.1 Cluster analysis on11cultivars of C. sect. Chrysantha

3 結(jié)論與討論

隨著人們對營養(yǎng)健康的不斷追求，天然植物營養(yǎng)成分與生物活性物質(zhì)不斷地被研究與開發(fā)[25]，金花茶的營養(yǎng)保健及藥用價值越來越受到人們的重視，開發(fā)具有保健及藥用價值的產(chǎn)品已成趨勢。

通過對11種金花茶組植物葉片主要活性成分含量進(jìn)行分析，可知越南引種金花茶與廣西本地金花茶在藥用價值方面存在顯著差異。越南金花茶中的多毛金花茶、厚葉金花茶、黃抱莖金花茶，藥用價值較高，其葉片中4種主要活性成分總黃酮、總多糖、皂苷、茶多酚總含量達(dá)到38.03%、38.91%、36.62%，具有較好的栽培與利用價值。而廣西本地金花茶中的普通金花茶、顯脈金花茶和小花金花茶的葉片中，這4種主要活性成分總含量分別為16.95%、17.68%、14.43%，含量較低。黃興賢等[26]對14種廣西本地金花茶葉片的總黃酮含量進(jìn)行了研究，其中普通金花茶和顯脈金花茶葉片的總黃酮含量分別為3.079%和6.188%，與本研究結(jié)果相近，而凹脈金花茶葉片的總黃酮含量（2.037%）低于在本次研究中測得的13.44%。覃小玲等[27]用紅外光譜方法對3種廣西本地金花茶進(jìn)行了對比分析，結(jié)果也表明，普通金花茶的黃酮、皂苷、多糖含量是最低的，這與本研究結(jié)果一致。

鑒于收集金花茶花朵的局限性，文中僅對越南金花茶和廣西本地金花茶的葉片進(jìn)行了研究，下一步將對其花的藥用價值及優(yōu)良品種的引進(jìn)和選育進(jìn)行研究。

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