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(貴州工程應(yīng)用技術(shù)學(xué)院生態(tài)工程學(xué)院， 貴州 畢節(jié) 551700)

紫蘇(Perillafrutescens(L.)Britton)為唇形科(Labiatae)紫蘇屬(PerillaL.)一年生草本植物，又名白蘇、赤蘇、香蘇等[1-2]。莖、葉、果均可入藥，具有良好的抗菌、抗病毒、抗衰老、抗氧化、降血脂等作用，在天然美白和護(hù)膚品方面效果顯著，且安全、無毒、無副作用[3-5]。同時又可作為蔬菜和保健品，是衛(wèi)生部規(guī)定的第一批既可作食品又可作藥品的60種作物之一[6-7]。紫蘇作為一種集油、菜、藥、香料、保健于一體的多用途經(jīng)濟(jì)植物，具有巨大的開發(fā)應(yīng)用價值，其研究與應(yīng)用越來越受到人們的重視和關(guān)注。黃酮類化合物是一類具有較高藥用價值的化合物，廣泛存在于多種植物的器官中，具有防癌、抗癌、抗炎、抗衰老、抑制腫瘤、降血糖、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等生理功能[8-11]。而黃酮在紫蘇中含量較高，因此具有很高的研究及開發(fā)價值。目前，國內(nèi)外對紫蘇籽粒黃酮含量的研究報道極少，而對畢節(jié)市紫蘇籽黃酮含量的研究還未見報道。鑒于此，本研究首次對畢節(jié)市不同區(qū)縣紫蘇籽粒黃酮含量進(jìn)行測定與分析，為紫蘇遺傳育種、食品、保健品及化妝品的開發(fā)和利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材 料

供試紫蘇材料來源于貴州工程應(yīng)用技術(shù)學(xué)院生態(tài)工程學(xué)院紫蘇種子資源庫，其編號、原產(chǎn)地、代號等見表1。

表1 供試紫蘇材料

序號材料編號種名原產(chǎn)地代號1ZS20151013001Perillafrutescens七星關(guān)區(qū)鴨池鎮(zhèn)ZS0012ZS20151105001Perillafrutescens七星關(guān)區(qū)鴨池鎮(zhèn)ZS0023ZS20151105003Perillafrutescens七星關(guān)區(qū)朱昌鎮(zhèn)ZS0044ZS20151111003Perillafrutescens七星關(guān)區(qū)岔河鎮(zhèn)ZS0125ZS20151111002Perillafrutescens七星關(guān)區(qū)鴨池鎮(zhèn)ZS0136ZS20151114002Perillafrutescens黔西縣紅林鄉(xiāng)ZS0167ZS20151114007Perillafrutescens黔西縣紅林鄉(xiāng)ZS0218ZS20151114009Perillafrutescens黔西縣紅林鄉(xiāng)ZS0239ZS20151105007Perillafrutescens黔西縣紅林鄉(xiāng)ZS02410ZS20151114012Perillafrutescens黔西縣紅林鄉(xiāng)ZS02611ZS20151120001Perillafrutescens七星關(guān)區(qū)雙山新區(qū)ZS02812ZS20151130002Perillafrutescens納雍縣維新鎮(zhèn)ZS03113ZS20151130003Perillafrutescens納雍縣維新鎮(zhèn)ZS03214ZS20151226001Perillafrutescens威寧縣哲覺鎮(zhèn)ZS03315ZS20151226002Perillafrutescens黔西縣綠化鄉(xiāng)ZS03416ZS20151226003Perillafrutescens威寧縣哲覺鎮(zhèn)ZS03517ZS20151226004Perillafrutescens威寧縣龍街鎮(zhèn)ZS03618ZS20151227001Perillafrutescens威寧縣秀水鄉(xiāng)ZS03719ZS20151228001Perillafrutescens黔西縣綠化鄉(xiāng)ZS03920ZS20151228002Perillafrutescens威寧縣云桂鄉(xiāng)ZS04021ZS20161229002Perillafrutescens納雍縣老凹壩鄉(xiāng)ZS04222ZS20151229003Perillafrutescens大方縣興隆鄉(xiāng)ZS04323ZS20151230002Perillafrutescens威寧縣中水鎮(zhèn)ZS04524ZS20160109001Perillafrutescens大方縣八堡鄉(xiāng)ZS04625ZS20160109005Perillafrutescens威寧縣草海鎮(zhèn)ZS05026ZS20160111001Perillafrutescens赫章縣白果鎮(zhèn)ZS063

續(xù)表1

序號材料編號種名原產(chǎn)地代號27ZS20160111002Perillafrutescens赫章縣白果鎮(zhèn)ZS06428ZS20160112001Perillafrutescens大方縣八堡鄉(xiāng)ZS06529ZS20160112003Perillafrutescens金沙縣龍壩鄉(xiāng)ZS06730ZS20160112004Perillafrutescens金沙縣龍壩鄉(xiāng)ZS06831ZS20160112005Perillafrutescens金沙縣龍壩鄉(xiāng)ZS06932ZS20160114001Perillafrutescens威寧縣黑土河鄉(xiāng)ZS07233ZS20160114002Perillafrutescens威寧縣中水鎮(zhèn)ZS07334ZS20160116002Perillafrutescens威寧縣斗谷鄉(xiāng)ZS07835ZS20160117001Perillafrutescens大方縣高店鄉(xiāng)ZS08036ZS20160117004Perillafrutescens大方縣高店鄉(xiāng)ZS08337ZS20160118001Perillafrutescens織金縣以那鎮(zhèn)ZS09038ZS20160118002Perillafrutescens織金縣以那鎮(zhèn)ZS09139ZS20160120003Perillafrutescens大方縣黃泥塘鎮(zhèn)ZS09640ZS20160120004Perillafrutescens大方縣黃泥塘鎮(zhèn)ZS09741ZS20160122002Perillafrutescens織金縣以那鎮(zhèn)ZS10042ZS20160125002Perillafrutescens織金縣以那鎮(zhèn)ZS10543ZS20160125003Perillafrutescens織金縣以那鎮(zhèn)ZS10644ZS20160125004Perillafrutescens織金縣以那鎮(zhèn)ZS10745ZS20160125005Perillafrutescens織金縣以那鎮(zhèn)ZS10846ZS20160126001Perillafrutescens黔西縣綠化鄉(xiāng)ZS10947ZS20160126004Perillafrutescens織金縣以那鎮(zhèn)ZS11248ZS20160128001Perillafrutescens威寧縣龍街鎮(zhèn)ZS11849ZS20160129002Perillafrutescens大方縣黃泥塘鎮(zhèn)ZS12050ZS20160202002Perillafrutescens威寧縣龍街鎮(zhèn)ZS12451ZS20160202003Perillafrutescens威寧縣草海鎮(zhèn)ZS12552ZS20160206001Perillafrutescens威寧縣草海鎮(zhèn)ZS129

1.2 儀器與試劑

SHB-IVA雙A循環(huán)水式多用真空泵：鄭州長城科工貿(mào)有限公司產(chǎn)品；721 G可見分光光度計：上海儀電分析儀器有限公司產(chǎn)品。

雙功能水浴恒溫振蕩器(SHA-B)：江蘇金壇億通電子有限公司產(chǎn)品；電熱恒溫培養(yǎng)箱(HH.B11.420)：天津市實(shí)驗(yàn)儀器廠產(chǎn)品；超純水器(GWA-UN 1-20)：北京普析通用儀器有限責(zé)任公司產(chǎn)品。

甲醇和乙酸鉀：天津市大茂化學(xué)試劑廠；無水氯化鋁：天津市瑞金特化學(xué)品有限公司；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品：上海金穗生物科技有限公司，上述試劑均為分析純。

1.3 方 法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

參照文獻(xiàn)[12]的方法，稍加改動。取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品1.4 mg，用70%的甲醇溶液定容25 mL，分別取該標(biāo)準(zhǔn)液溶液0.5，1，1.5，2，2.5 mL于25 mL的容量瓶中，分別加0.1 mol/L的三氯化鋁溶液8 mL、1 mol/L的醋酸鉀溶液12 mL，70%的甲醇溶液定容25 mL，搖勻，分別加0.1 mol/L的三氯化鋁溶液8 mL、1 mol/L的醋酸鉀溶液12 mL，70%的甲醇溶液定容25 mL，搖勻，分別對上述蘆丁溶液進(jìn)行測定，用吸光度(A)為縱坐標(biāo)，濃度(C)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.2 紫蘇樣品的制備和黃酮含量的測定

參照文獻(xiàn)[12]的方法，稍加改動。各紫蘇種子在65 ℃下烘干到恒重，粉碎，取1 g，于50 mL的錐形瓶中，加70%甲醇溶液30 mL，60 ℃恒溫水浴4 h，抽濾，70%甲醇溶液清洗濾紙和濾渣，合并濾液，冷卻，定容到50 mL，取1.0 mL置25 mL容量瓶中，加0.1 mol/L三氯化鋁8 mL，1 mol/L醋酸鉀12 mL，70%的甲醇溶液定容25 mL，搖勻，靜置30 min，420 nm波長下比色。

1.3.3 黃酮含量計算

根據(jù)測定結(jié)果，按下列公式計算黃酮含量X(%)：

2 數(shù)據(jù)處理

利用Excel 2007進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，利用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行方差分析。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同紫蘇籽粒黃酮含量分析

不同紫蘇籽粒黃酮含量見表2。結(jié)果表明：52份紫蘇籽粒黃酮含量在0.100 0%～0.662 5%之間，平均為0.339 7%。來自威寧縣草海鎮(zhèn)的紫蘇(ZS 125)含量最高，為0.662 5%，而來自織金縣以那鎮(zhèn)的紫蘇(ZS 112)含量最低，僅有0.100 0%。根據(jù)紫蘇籽粒中黃酮含量頻數(shù)分布情況(表3)，可將52份紫蘇材料分為4種類型：a.低黃酮類型，黃酮含量低于0.156 3%，有3份材料，占5.77%；b.較低黃酮類型，黃酮含量在0.156 3%～0.381 3%之間，有29份材料，占55.77%；c.較高黃酮類型，黃酮含量在0.381 3%～0.606 3%之間，有19份材料，占36.54%；d.高黃酮類型，黃酮含量在0.606 3%以上，有1份材料，占1.92%。

表2 不同紫蘇籽粒黃酮含量

代號黃酮含量代號黃酮含量代號黃酮含量ZS0010.1979ZS0390.1823ZS0900.1833ZS0020.5083ZS0400.3677ZS0910.2604ZS0040.2573ZS0420.1896ZS0960.3365ZS0120.3188ZS0430.2146ZS0970.2198ZS0130.4198ZS0450.3833ZS1000.2031ZS0160.5177ZS0460.3229ZS1050.3906ZS0210.2698ZS0500.5406ZS1060.4365ZS0230.3198ZS0630.4219ZS1070.2542ZS0240.5573ZS0640.5094ZS1080.2542ZS0260.2240ZS0650.3542ZS1090.1542ZS0280.3823ZS0670.3104ZS1120.1000ZS0310.2219ZS0680.3667ZS1180.2688ZS0320.1740ZS0690.4573ZS1200.5250ZS0330.3771ZS0720.4417ZS1240.3688ZS0340.1490ZS0730.3969ZS1250.6625ZS0350.4104ZS0780.4010ZS1290.2208ZS0360.3031ZS0800.5125ZS0370.2833ZS0830.5604

表4 不同產(chǎn)地紫蘇籽粒黃酮含量表現(xiàn)

序號原產(chǎn)地黃酮含量(%)極差標(biāo)準(zhǔn)差變異范圍均值變異系數(shù)1七星關(guān)區(qū)0.31040.11280.1979～0.50830.34732.46982黔西縣0.40830.15970.1490～0.55730.296753.82543納雍縣0.04790.02440.1740～0.22190.195112.50644威寧縣0.44170.11220.2208～0.66250.387628.94745大方縣0.34580.13620.2146～0.56240.380735.77626赫章縣0.08750.06190.4219～0.50940.465613.29477金沙縣0.14690.07410.3104～0.45730.378119.59808織金縣0.33650.10890.1000～0.43650.260341.8363

3.2 不同產(chǎn)地紫蘇籽粒黃酮含量表現(xiàn)及變異分析

由表4可知：不同產(chǎn)地紫蘇籽粒黃酮含量大小依次為赫章縣>威寧縣>大方縣>金沙縣>七星關(guān)區(qū)>黔西縣>織金縣>納雍縣。變異系數(shù)為12.506 4%～53.825 4%。赫章縣紫蘇籽粒黃酮含量最高，達(dá)0.465 6%，變異系數(shù)較小，為13.294 7%，可作為高黃酮紫蘇來源地，但其育種選擇范圍較窄。威寧縣、大方縣、七星關(guān)區(qū)紫蘇籽粒黃酮含量均較高，分別為0.387 6%、0.380 7%、0.347 4%，變異系數(shù)均較大，分別為28.947 4%、35.776 2%、32.469 8%，因此，這幾個地方均可作為高黃酮來源地，同時也有較寬的育種選擇范圍。金沙縣的紫蘇籽粒黃酮含量為0.378 1%，變異系數(shù)為19.598 0%，黃酮含量較高，但育種選擇范圍較窄。黔西縣和織金縣紫蘇籽粒黃酮含量均較小，分別為0.296 7%、0.260 3%，變異系數(shù)均很大，分別為53.825 4%和41.836 3%，表明來源于這兩個縣的紫蘇在高黃酮產(chǎn)品的開發(fā)及應(yīng)用方面沒有優(yōu)勢，但有很寬的育種選擇范圍。納雍縣紫蘇籽粒黃酮含量最小，僅為0.195 1%，變異系數(shù)也最小，僅為12.506 4%，表明該縣紫蘇在高黃酮產(chǎn)品的開發(fā)、利用以及育種方面均沒有優(yōu)勢。

表3 不同紫蘇籽粒黃酮含量頻數(shù)分布

序號組限(%)組中值(%)頻數(shù)累計頻數(shù)1(0.0483,0.1563)0.1023332(0.1563,0.2688)0.212616193(0.2688,0.3813)0.325113324(0.3813,0.4938)0.437611435(0.4938,0.6063)0.55018516(0.6063,0.7188)0.6623152

3.3 不同產(chǎn)地紫蘇籽粒黃酮含量多重比較

由表5可知：赫章縣紫蘇籽粒黃酮含量最高，為0.465 6%，威寧縣次之，為0.387 6%，兩者與大方縣、金沙縣均無顯著差異，但均顯著高于七星關(guān)區(qū)，極顯著高于黔西縣、織金縣、納雍縣。大方縣紫蘇籽粒黃酮含量為0.380 7%，與金沙縣、七星關(guān)區(qū)間差異不顯著，但顯著高于黔西縣，極顯著高于織金縣、納雍縣。金沙縣和七星關(guān)區(qū)紫蘇籽粒黃酮含量分別為0.378 1%和0.347 4%，與黔西縣間的差異均不顯著，但均顯著高于織金縣，極顯著高于納雍縣。黔西縣紫蘇籽粒黃酮含量為0.296 7%，與織金縣差異不顯著，而顯著高于納雍縣。納雍縣黃酮含量最低，僅為0.195 1%，與織金縣的差異不顯著，均顯著低于其他縣。

表5 不同產(chǎn)地紫蘇籽粒黃酮含量的多重比較

縣(區(qū))平均數(shù)(%)SSR法0.050.01 赫章縣0.4656aA 威寧縣0.3876aA 大方縣0.3807abAB 金沙縣0.3781abcABC 七星關(guān)區(qū)0.3474bcABC 黔西縣0.2967cdBCD 織金縣0.2603deCD 納雍縣0.1951eD

4 討 論

目前，國內(nèi)外對紫蘇粗蛋白含量、粗脂肪含量、含油量等已進(jìn)行了相關(guān)研究[13-16]，而對紫蘇籽粒黃酮含量的研究報道極少，僅發(fā)現(xiàn)馬堯等[17]測定了吉林當(dāng)?shù)氐囊粋€優(yōu)良紫蘇品種果實(shí)中的總黃酮含量，發(fā)現(xiàn)其含量約為0.62μg/g。陳建欣等[18]測定了一個紫蘇種子中的黃酮含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，其含量為2.007%。本研究首次對畢節(jié)市不同縣(區(qū))紫蘇籽粒黃酮含量進(jìn)行測定研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)供試紫蘇籽粒黃酮含量在0.100 0%～0.662 5%之間，平均為0.339 7%，與馬堯等[17]、陳建欣等[18]的研究有所差異，可能是由所考察的紫蘇材料的遺傳因素、栽培的氣候環(huán)境因素等的不同所造成。

畢節(jié)市紫蘇籽粒黃酮含量在各區(qū)縣變異差異較大，來自黔西縣的紫蘇籽粒黃酮含量變異系數(shù)為53.825 4%，變異最大，遺傳育種選擇范圍最廣。來自織金縣的變異系數(shù)次之，為41.836 3%，變異較大，遺傳育種選擇范圍也較廣。而來納雍章縣的變異系數(shù)最小，僅為12.506 4%，變異最小，遺傳育種選擇范圍最窄。另外，原產(chǎn)威寧縣草海鎮(zhèn)的紫蘇(ZS 125)黃酮含量最高，為0.662 5%，高于其他紫蘇材料，值得在高黃酮紫蘇資源的育種、開發(fā)及利用中進(jìn)一步應(yīng)用。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:一部[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010.

[2]張志軍,張鑫,李會珍,等.發(fā)育紫蘇種子營養(yǎng)累積與脂肪酸組分變化[J].中國糧油學(xué)報,2011,26(5):30-32,37.

[3]Lee J H,Ki H P,Lee M H,et al.Identification,characterisation,and quantification of phenolic compounds in the antioxidant activity-containing fraction from the seeds of Korean perilla (Perillafrutescens) cultivars[J].Food Chemistry,2013,136(2):843-852.

[4]Feng Lijun,Yu Chenhuan,Ying Kejing,et al.Hypolipidemic and antioxidant effects of total flavonoids of Perilla frutescens,leaves in hyperlipidemia rats induced by high-fat diet[J].Food Research International,2011,44(1):404-409.

[5]王靜,劉大川.紫(白)蘇葉黃酮類化合物抗氧化性能的研究[J].中國油脂,2004,29(3):33-36.

[6]上官海燕,吳巧鳳.紫蘇葉與白蘇葉的總黃酮和微量元素的比較分析[J].廣東微量元素科學(xué),2008,15(4):29-32.

[7]譚美蓮,嚴(yán)明芳,汪磊,等.國內(nèi)外紫蘇研究進(jìn)展概述[J].中國油料作物學(xué)報,2012,34(2):225-231.

[8]劉一杰,薛永常.植物黃酮類化合物的研究進(jìn)展[J].中國生物工程雜志,2016,36(9):81-86.

[9]鄒麗秋,王彩霞,匡雪君,等.黃酮類化合物合成途徑及合成生物學(xué)研究進(jìn)展[J].中國中藥雜志,2016,41(22):4 124-4 128.

[10]閆超,郭軍,張美莉,等.內(nèi)蒙古蕎麥總黃酮含量測定[J].糧食與油脂,2015,28(2):52-54.

[11]魏明.麥冬提取物中總黃酮的含量測定[J].中國醫(yī)藥科學(xué),2015,5(9):58-59,66.

[12]鄧琳瓊.普通蕎麥雜種優(yōu)勢研究[D].貴陽:貴州師范大學(xué)碩士學(xué)位論文,2011.

[13]王計平，史華平，南建福．紫蘇種子油成分自然變異的研究[J].山西農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,38(7):56-58,76.

[14]胡彥,丁友芳,溫春秀,等．紫蘇屬植物種子含油率及其脂肪酸組成[J].食品科學(xué),2010,31(4):165-169.

[15]張志軍,孫子文,李會珍,等.不同品種紫蘇種子營養(yǎng)成分及脂肪酸組分分析[J].中國糧油學(xué)報,2012,27(8):57-59.

[16]周曉晶,李可,范航,等.不同變種及種源紫蘇種子油脂肪酸組成及含量比較[J].北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報,2015,37(1):98-106.

[17]馬堯,莊云.紫蘇不同部位總黃酮含量測定[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,38(33):18 775-18 776.

[18]陳建欣,劉靜,汪川蘇.紫蘇中黃酮的提取及測定研究[J].廣州化工,2015,43(3):132-134.