苗 青 劉永革 王 燕 李 珍 任亦欣 關(guān) 輝 皇惠杰 許 巍 向 莉

(首都醫(yī)科大學附屬北京兒童醫(yī)院過敏反應(yīng)科,北京 100045)

支氣管哮喘(簡稱哮喘)是兒童常見的慢性呼吸系統(tǒng)疾病，由多種免疫細胞、氣道結(jié)構(gòu)細胞和炎癥介質(zhì)等共同參與的慢性炎癥性疾病[1]。一直以來，Th1/Th2失衡被認為是導致哮喘發(fā)生的主要免疫病理學機制，近年來隨著研究的深入，已證實多種效應(yīng)性T淋巴細胞亞群(例如調(diào)節(jié)性T細胞、Th17細胞等)均參與到氣道炎癥事件中，其細胞亞群數(shù)目和功能的異常與哮喘、過敏性鼻炎的發(fā)生、病程進展密切相關(guān)[2，3]。本研究前期工作發(fā)現(xiàn)：具有不同變應(yīng)原致敏模式(致敏變應(yīng)原種類、致敏程度)的哮喘患者其氣道炎癥水平及肺功能參數(shù)指標上均存在顯著差異[4，5]。國外的一項出生隊列研究也證實[6]：出生后早期即出現(xiàn)對于多種變應(yīng)原致敏的嬰幼兒，其未來發(fā)生哮喘、過敏性鼻炎的風險顯著高于非致敏者和單一致敏者，但是具體機制尚未完全明確?；诖?，本研究將根據(jù)不同致敏模式(SPT檢出陽性過敏原數(shù)量、種類)的哮喘患者進行分組，橫斷面比較不同組間哮喘患者外周血T淋巴細胞亞群數(shù)目差異，希望能夠為進一步明確不同變應(yīng)原致敏哮喘患者機體的免疫功能狀態(tài)差異提供更多依據(jù)。

1 材料與方法

1.1實驗材料、試劑 雙色及四色淋巴細胞亞群分析試劑盒、FACS Calibur型流式細胞儀、熒光素標記抗體和配套溶血劑均為美國Beckman Coulter公司產(chǎn)品。

1.2實驗方法

1.2.1研究對象 選取2016年1～6月在北京兒童醫(yī)院哮喘過敏門診確診為哮喘患者374例，男184例、女190例，年齡3～14歲，平均(8.8±2.5)歲。哮喘診斷均符合中華醫(yī)學會呼吸病學分會哮喘學組制訂的診斷標準[7]。排除標準：重度和極性發(fā)作期哮喘；近4周內(nèi)有呼吸道感染；近3個月內(nèi)全身或局部使用過激素或免疫抑制劑；過敏原皮膚點刺試驗前3天使用過抗過敏藥物；合并其他心肺疾病、患有呼吸系統(tǒng)其他疾病及其他系統(tǒng)已確診疾病者。根據(jù)SPT檢出陽性變應(yīng)原數(shù)目將研究對象分為3組(非致敏組、單一致敏組、多重致敏組)；根據(jù)SPT檢出陽性變應(yīng)原種類將研究對象分為5組(塵螨組、霉菌組、動物皮屑組、花粉組、其他組)。本研究經(jīng)首都醫(yī)科大學附屬北京兒童醫(yī)院倫理委員會審核通過，研究前向患兒家長講述本研究的目的和實施方案，征得患兒家長同意，并簽署知情同意書。

1.2.2過敏原皮膚點刺試驗(Skin prick testing,SPT) 皮膚點刺制劑包括塵螨組(戶塵螨、粉塵螨)、霉菌組(黑曲霉、鏈格孢、產(chǎn)黃青霉)、動物皮屑組(狗毛皮屑、貓毛皮屑)、花粉組(大籽蒿花粉、葎草花粉、豚草花粉、藜草花粉、圓柏花粉、洋白蠟花粉、臭椿花粉、梧桐花粉、樺樹花粉)、其他組(蟑螂)等五大類共計18種常見吸入過敏原，均由北京新華聯(lián)協(xié)和藥業(yè)有限責任公司提供。具體操作：選擇雙側(cè)前臂掌側(cè)點刺，用點刺針分別透過液滴，刺破真皮后維持數(shù)秒，以不出血為度，然后快速輕提針尖棄去針頭，每一試區(qū)間隔不少于1 cm。點刺完成后立刻用吸水棉球從側(cè)邊輕輕吸去部分多余的點刺液，避免流淌互相干擾。等待20 min，觀察結(jié)果。同時設(shè)陰性對照組(緩沖鹽水- 甘油對照液)和陽性對照組(5 mg/ml鹽酸組胺對照液)。結(jié)果判斷標準：①無風團和紅斑反應(yīng)或風團塊反應(yīng)范圍小于點刺陽性對照組1/3記為(-)；②風團塊反應(yīng)范圍為點刺陽性對照組1/3及以上記為(+)；③風團塊反應(yīng)范圍為點刺陽性對照組2/3及以上記為(++)；④風團塊反應(yīng)范圍與點刺陽性對照組基本相同記為(+++)；⑤風團塊反應(yīng)范圍大于點刺陽性對照組記為(++++)。凡出現(xiàn)過敏原皮膚點刺試驗陽性結(jié)果者，即定義為該大類過敏原陽性致敏。僅對于一類過敏原陽性致敏者判定為單一致敏；存在至少一類過敏原陽性致敏者判定為多重致敏；上述五大類過敏原結(jié)果均陰性者判定為未致敏。

1.2.3標本采集及外周血淋巴細胞分型 抽取EDTA抗凝血4 ml，一部分通過流式細胞儀進行外周血CD3、CD4、CD8、CD4/CD8以及Tregs亞群測定；另一部分進行外周血Th1、Th2、Th17細胞亞群測定。使用Beckman Coulter公司專用的熒光校正微球?qū)x器進行光路與流路的校準，使流式細胞儀的準確度、精確度、熒光與散射光靈敏度和分辨率處于最佳的運行狀態(tài)。按照試劑使用說明書的要求，根據(jù)所測的樣本數(shù)取相應(yīng)數(shù)目的流式細胞儀專用試管。①外周血CD3、CD4、CD8、CD4/CD8、NK、B、Tregs亞群測定：向每支試管中分別加入熒光素標記的抗體試劑各10 μl，再加入EDTA抗凝全血100 μl，混勻置室溫、避光孵育20 min取出后向每支試管中分別加入溶血劑500 μl，混勻置室溫、避光孵育10 min后上機。分別計算T細胞(CD3+CD19+)、CD4+T細胞(CD3+CD4+)、CD8+T細胞(CD3+CD8+)和Tregs(CD4+CD25+FOXP3+)占總淋巴細胞的百分比；②外周血Th1(CD4+IFN- γ+T)、Th2(CD4+IL- 4+T)和Th17細胞亞群(CD4+IL- 17A+T)測定方法參照陳嘯洪等[8]方法。所有流式數(shù)據(jù)應(yīng)用FlowJo軟件進行分析，數(shù)據(jù)均由同一技術(shù)員(本文第1作者)在同一標準下進行讀取，數(shù)據(jù)的取舍和分析則由本文第二作者共同完成。

2 結(jié)果

2.1不同SPT檢出陽性過敏原數(shù)目患者外周血T淋巴細胞亞群比較 根據(jù)SPT檢出陽性過敏原數(shù)量，將哮喘患者分為未致敏哮喘組(109例，男59例，女50例，平均年齡8.3歲)、單一致敏哮喘組(112例，男42例，女70例，平均年齡9.2歲)及多重致敏哮喘(153例，男83例，女70例，平均年齡12.2歲)三組，另選取健康對照組兒童102例(男52例，女50，平均年齡8.9歲)，各組間T淋巴細胞亞群測定結(jié)果見表1。與健康對照組兒童相比，未致敏哮喘組、單一致敏哮喘組以及多重致敏哮喘三組哮喘患者的外周血T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD4/CD8比值、Th1細胞、Th2細胞、Th1/Th2比值、Tregs、Th17細胞、Tregs/Th17比值等指標的組間差異均具有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)。進一步對三組患者外周血效應(yīng)性T細胞亞群進行兩兩比較發(fā)現(xiàn)，Tregs、Th17細胞以及Tregs/Th17比值在三組間差異具有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)，未觀察到三組間Th1細胞、Th2細胞以及Th1/Th2比值兩兩比較差異無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)，見表2，圖1。

2.2不同致敏變應(yīng)原組間淋巴細胞亞群測定結(jié)果比較 根據(jù)SPT陽性檢出過敏原種類，將入組哮喘患者致敏譜主要分為塵螨組(213例，男126例，女87例，平均年齡8.3歲)、霉菌組(176例，男76例，女100例，平均年齡8.6歲)、動物皮屑組(93例，男36例，女57例，平均年齡8.8歲)、花粉組(137例，男64例，女73例，平均年齡9.1歲)以及其他組(27例，男13例，女14例，平均年齡9.4歲)各組間淋巴細胞亞群測定結(jié)果見表3。與健康對照組兒童相比，塵螨組、霉菌組、動物皮屑組、花粉組以及其他組過敏原致敏患者的外周血T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD4/CD8比值、Th1細胞、Th2細胞、Th1/Th2比值、Tregs、Th17細胞、Tregs/Th17比值等指標的組間差異均具有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)。同樣地，對上述5組不同變應(yīng)原致敏的哮喘患者外周血效應(yīng)性T細胞亞群進行兩兩比較發(fā)現(xiàn)，5組患者的外周血Th1細胞、Th2細胞、Th1/Th2比值、Tregs、Th17細胞以及Tregs/Th17比值存在組間差異，且差異具有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)(表4，圖2)。

Items(%)Un-sensitizedasthma(n=109)Mono-sensitizedasthma(n=112)Poly-sensitizedasthma(n=153)Heathcontrols(n=102)FPTcell(CD3+)59.4±13.744.1±12.550.2±13.467.8±11.915.9<0.05CD4+Tcell(CD3+CD4+T)35.1±10.333.1±14.132.0±10.236.6±9.118.7<0.05CD8+Tcell(CD3+CD8+T)25.6±9.026.9±12.523.3±7.920.5±6.710.6<0.05CD4/CD8ratio1.4±1.11.4±1.21.4±1.41.8±1.414.1<0.05Th1cell(CD4+IFN-γ+T)9.1±3.99.9±5.88.6±6.913.9±4.216.8<0.05Th2cell(CD4+IL-4+T)1.1±0.51.0±0.40.9±0.50.5±0.310.7<0.05Th1/Th2ratio8.3±4.89.0±3.98.7±1.725.9±10.526.3<0.05Tregs(CD4+CD25+FOXP3+T)3.5±1.72.1±0.21.8±0.45.5±2.821.4<0.05Th17cell(CD4+IL-17A+T)0.9±0.51.1±0.41.3±0.80.6±0.222.6<0.05Tregs/Th17ratio3.8±1.91.6±0.51.6±0.39.1±1.833.9<0.05

表2未致敏、單一致敏、多重致敏三組哮喘患者外周血效應(yīng)性T細胞亞群兩兩比較(LSD-t,P)

Tab.2PairwisecomparisoninTlymphocytessubsetsamongun-sensitizedasthmagroup,mono-sensitiveasthmagroupandpoly-sensitizedasthmagroup(LSD-t,P)

ItemsTh1cellsTh2cellsTh1/Th2ratioTregsTh17cellsTregs/Th17ratioUn-sensitizedvsmono-sensitized6.1,>0.0511.5,>0.054.8,>0.0511.1,<0.0511.3,<0.0510.2,<0.05Un-sensitizedvsploy-sensitized8.3,>0.0510.4,>0.057.9,>0.0519.4,<0.0520.6,<0.0521.6,<0.05Mono-sensitizedvspoly-sensitized10.9,>0.057.9,>0.056.2,>0.0513.1,>0.0519.8,<0.0511.4,>0.05

圖1 未致敏、單一致敏、多重致敏三組哮喘患者外周血效應(yīng)性T細胞亞群兩兩比較Fig.1 Pairwise comparison in T lymphocytes subsets among un- sensitized asthma group,mono- sensitized asthma group and poly- sensitized asthma group(%,±s)

圖2 不同變應(yīng)原致敏的哮喘患者外周血效應(yīng)性T細胞亞群兩兩比較Fig.2 Pairwise comparison in T lymphocytes subsets among asthmatics with different types of sensitized allergens(%,±s)

ItemsHousedustmitegroup(n=213)Mouldgroup(n=176)Animaldandergroup(n=93)Pollengroup(n=137)Othergroup(n=27)Healthgcontrols(n=102)FPTcell(CD3+)42.6±9.740.0±7.141.7±8.744.4±8.742.8±10.867.8±11.917.7<0.05CD4+Tcell(CD3+CD4+)32.6±13.434.1±10.534.9±11.734.1±14.032.7±12.236.6±9.125.1<0.05CD8+Tcell(CD3+CD8+T)25.9±7.826.4±10.527.0±10.122.6±8.523.9±8.420.5±6.76.9<0.05CD4/CD8ratio1.3±1.01.3±1.01.2±0.91.4±0.81.4±0.91.8±1.423.7<0.05Th1cell(CD4+IFN-γ+T)9.5±3.48.9±2.610.2±4.99.6±3.48.9±3.411.9±4.231.3<0.05Th2cell(CD4+IL-4+T)1.4±0.61.2±0.50.7±0.21.1±0.40.6±0.10.5±0.337.2<0.05Th1/Th2ratio7.6±4.17.8±3.410.1±8.68.1±3.415.4±3.625.9±10.531.0<0.05Tregs(CD4+CD25+FOXP3+T)1.6±0.82.4±1.22.3±1.11.9±0.82.0±1.05.5±2.831.6<0.05Th17cell(CD4+IL-17A+T)1.4±0.61.0±0.70.8±0.31.2±0.40.7±0.40.6±0.239.7<0.05Tregs/Th17ratio1.1±0.22.1±1.02.9±1.51.6±0.61.9±0.69.1±1.840.5<0.05

表4不同變應(yīng)原致敏的哮喘患者外周血效應(yīng)性T細胞亞群兩兩比較(LSD-t,P)

Tab.4PairwisecomparisoninTlymphocytessubsetsamongasthmaticswithdifferenttypesofsensitizedallergens(LSD-t,P)

ItemsTh2cellsTh1/Th2ratioTregsTh17cellsTregs/Th17ratioHousedustmitevsMould6.1,>0.0510.3,>0.0521.3,<0.0531.2,<0.0525.8,<0.05HousedustmitevsAnimaldander21.6,<0.0514.0,<0.0527.3,<0.0528.4,<0.0521.3,<0.05HousedustmitevsPollen6.9,>0.058.5,>0.0531.2,<0.0526.7,<0.0521.6,<0.05HousedustmitevsOther23.6,<0.0511.2,<0.0536.1,<0.0539.7,<0.0529.1,<0.05MouldvsAnimaldander31.7,<0.0514.9,<0.0510.2,>0.0511.6,>0.0528.1,<0.05MouldvsPollen19.2,<0.054.7,>0.0534.5,<0.0529.1,<0.0532.1,<0.05MouldvsOther21.3,<0.0515.3,<0.0537.1,<0.0526.3,<0.0510.4,>0.05AnimaldandervsPollen18.7,<0.0516.4,<0.0538.0,<0.0522.5,<0.0533.5,<0.05AnimaldandervsOther8.3,>0.0515.2,<0.059.1,>0.0524.1,<0.0531.5,<0.05PollenvsOther17.4,<0.0513.4,<0.057.8,>0.057.9,>0.0527.6,<0.05

3 討論

支氣管哮喘是一種常見的氣道變態(tài)反應(yīng)性(過敏)疾病，主要特征是可逆性氣道阻塞、氣道高反應(yīng)性及氣道慢性炎癥，其發(fā)病本質(zhì)屬于Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)，主要包括“致敏- 激發(fā)- 效應(yīng)”三階段，即變應(yīng)原物質(zhì)進入機體后引起由IgE介導的速發(fā)型變態(tài)反應(yīng)[9,10]。其中，變應(yīng)原(也稱為過敏原)致敏是引發(fā)變態(tài)反應(yīng)發(fā)生的關(guān)鍵起始步驟。美國的一項研究報道顯示3歲以上罹患過敏性哮喘的兒童中80%都是由于對室內(nèi)環(huán)境過敏引發(fā)的[11,12]。不僅如此，來自國外的多項出生隊列研究結(jié)果證實出生后早期多種變應(yīng)原致敏是未來發(fā)生過敏性疾病的獨立風險因素[13,14]。一直以來，哮喘、過敏性鼻炎等氣道變態(tài)反應(yīng)性疾病的發(fā)生被認為是與機體Th1/Th2免疫失衡相關(guān)，表現(xiàn)為Th2的優(yōu)勢反應(yīng)狀態(tài)，易于對過敏原產(chǎn)生超常的免疫應(yīng)答。然而隨著近年來“免疫組學(Immunomics)”概念的提出[15]，為疾病免疫病理學機制開拓了新的視野，特別強調(diào)應(yīng)將免疫系統(tǒng)看作是一個整體，重視“系統(tǒng)免疫學(System immunology)”的研究。因此，人們逐漸發(fā)現(xiàn)這種以Th1/Th2平衡理論來解釋疾病的發(fā)生過于簡單化，不夠全面?；诖?，本研究對于哮喘患者的致敏模式進行細化，并分析各組間細胞免疫應(yīng)答狀態(tài)的差異，希望能夠為進一步理解哮喘疾病的發(fā)病機制及制定針對性治療方法提供新的思路。

在本研究中，與健康兒童相比，哮喘患者外周血T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD4/CD8比值、Th1細胞、Th2細胞、Th1/Th2比值、Th17細胞等效應(yīng)性T細胞亞群數(shù)目均存在統(tǒng)計學差異。T細胞是免疫系統(tǒng)最主要的效應(yīng)細胞，在細胞免疫應(yīng)答的發(fā)揮中處于核心地位。T細胞活化后除了表達細胞表面活化抗原外，主要釋放特征性細胞因子發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能，不同細胞因子間功能相互拮抗，從而保證機體免疫自穩(wěn)狀態(tài)的維持。例如，IFN- γ(Th1細胞來源)與IL- 4(Th2細胞來源)二者間功能相互抑制，IFN- γ主要由活化的T細胞及吞噬細胞產(chǎn)生，具有免疫調(diào)節(jié)作用，可誘導幼稚型T細胞向Th1細胞轉(zhuǎn)化，抑制Th2細胞生成；而Th2細胞功能亢進可刺激IL- 4、IL- 10等細胞因子生成過多，從而抑制Th1細胞因子功能可導致IL- 2、IFN- γ水平下降[16,17]。然而在變態(tài)反應(yīng)性疾病等病理條件下，外周血中Th1/Th2細胞比例失衡，Th1細胞減低及其細胞因子功能被抑制，都進一步促進了偏向Th2細胞介導的氣道變態(tài)反應(yīng)的發(fā)生，這一現(xiàn)象在本研究中也同樣被觀察到。Th17細胞是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種新的活化的CD4+T細胞亞群，Th17細胞的主要效應(yīng)因子IL- 17，本身不僅是強大中性粒細胞的趨化劑，同時還可以促進支氣管纖維母細胞、上皮細胞和平滑肌細胞的活化，使這些細胞高表達IL- 6、IL- 8、粒細胞集落刺激因子(Granulocytecolony stimulated factor，G- CSF)等因子，促使中性粒細胞在氣道局部浸潤增殖，加重氣道炎癥反應(yīng)[18]。早期多項動物實驗和臨床研究均表明Th17細胞及細胞因子IL- 17能加重過敏性哮喘的氣道炎癥和氣道高反應(yīng)，且其水平與哮喘患者病情活動狀態(tài)、控制水平密切相關(guān)[19]。調(diào)節(jié)性T細胞(regulatory T cells,Treg)是近年來發(fā)現(xiàn)的一群具有免疫抑制效應(yīng)的T細胞，可通過分泌細胞因子(IL- 10和/或TGF- β)或者細胞間的直接接觸等方式，降低抗原特異性免疫應(yīng)答，誘導機體產(chǎn)生免疫耐受。雖然Th17細胞與Treg細胞之間在功能上互相拮抗，但是由于二者在分化途徑中均共用誘導因子TGF- β[20]，因此有學者提出：機體內(nèi)除了Th1/Th2平衡外，Th17細胞與Treg之間亦存在動態(tài)交互平衡關(guān)系。本研究中亦發(fā)現(xiàn)哮喘患者同時存在Th17細胞應(yīng)答增加和Treg細胞減少的現(xiàn)象，因此再次提示：哮喘患者機體存在免疫激活和免疫失衡狀態(tài)，不同T細胞亞群之間的失衡引起細胞因子產(chǎn)生的異常是導致疾病發(fā)生的重要作用機制之一，除了Th1/Th2平衡之外，哮喘患者體內(nèi)亦存在的Th17/Treg失衡現(xiàn)象同樣值得關(guān)注。

根據(jù)SPT陽性檢出過敏原數(shù)量，將哮喘患者分為未致敏哮喘組、單一致敏哮喘組以及多重致敏哮喘三組，并就三組間上述參數(shù)進行組間比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Tregs、Th17細胞以及Tregs/Th17比值三項指標間存在組間差異。進一步根據(jù)SPT陽性檢出過敏原種類，將入組哮喘患者致敏譜主要分為塵螨組、霉菌組、動物皮屑組、花粉組以及其他組，同樣發(fā)現(xiàn)五組研究對象間Th2細胞(CD4+IL- 4+T)、Th1/Th2比值、Tregs(CD4+CD25+FOXP3+T)、Th17細胞(CD4+IL- 17A+T)以及Tregs/Th17比值等指標存在差異。曾有學者就喘息性支氣管炎患者按照不同類型過敏原分組，分析不同組內(nèi)細胞免疫和體液免疫的功能變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：吸入性過敏原更易誘發(fā)喘息性支氣管炎患者細胞免疫應(yīng)答功能的改變[21]。變應(yīng)原是一組具有致敏原性的抗原物質(zhì)，當特應(yīng)性個體(Atopy)吸入變應(yīng)原后，變應(yīng)原物質(zhì)可以沉積于氣道黏膜表面，引發(fā)局部黏膜免疫系統(tǒng)甚至全身免疫反應(yīng)的發(fā)生，最終誘發(fā)以氣道慢性炎癥和氣道高反應(yīng)性為特征的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)性疾病的出現(xiàn)。最新研究表明反復過敏原暴露引發(fā)的氣道上皮細胞損傷對于決定下游免疫應(yīng)答方向起到了重要的免疫調(diào)節(jié)作用。以塵螨變應(yīng)原(House dust mite)為例，其內(nèi)源性的蛋白酶活性可以直接裂解上皮細胞間緊密聯(lián)接，增加支氣管上皮細胞通透性，促進上皮細胞凋亡，最終造成氣道上皮屏障功能損傷促進過敏原穿越上皮細胞屏障[22,23]。破損的氣道上皮細胞可以進一步分泌大量內(nèi)源性危險信號分子,又稱為“警報素”(Alarmin)，如：IL- 25、TSLP等，這些物質(zhì)可以快速活化動員黏膜下的固有淋巴樣細胞亞群(Group 2 innate lymphoid cells,ILC2s)，活化后的ILC2可以繼而分泌大量Th2型細胞因子，促進炎癥反應(yīng)的發(fā)生與進展[23]。國內(nèi)孟文霞等[24]學者就塵螨、花粉、真菌三類過敏原引起上下氣道變應(yīng)性疾病的發(fā)生率進行比較，結(jié)果顯示：易引起鼻炎的變應(yīng)原由高到低依次是花粉、塵螨、真菌，易引起哮喘的變應(yīng)原依次是真菌、塵螨、花粉，即花粉最易引起鼻炎，真菌最易引起哮喘。綜上所述，筆者認為具有不同免疫原性差異的過敏原物質(zhì)與氣道上皮屏障之間的相互作用可能對于決定機體細胞免疫應(yīng)答狀態(tài)十分關(guān)鍵，下一步需要開展進一步機制研究予以明確。

總之，不同致敏模式的哮喘患者外周血T淋巴細胞亞群分布狀態(tài)存在差異，對于哮喘這一類復雜的異質(zhì)性疾病而言，了解患者致敏模式情況下機體細胞免疫應(yīng)答水平差異，不僅可以尋找到能反映哮喘異質(zhì)性、指導哮喘個體化治療的內(nèi)因型分類，也為未來針對不同哮喘內(nèi)因型嘗試更多嶄新的個體化治療手段提供一定依據(jù)。

[1] Mims JW.Asthma:definitions and pathophysiology[J].Int Forum Allergy Rhinol,2015,5(Suppl 1):S2- S6.

[2] Shi YH,Shi GC,Wan HY,etal.Coexistence of Th1/Th2 and Th17/Treg imbalances in patients with allergic asthma[J].Chin Med J(Engl),2011,124(13):1951- 1956.

[3] Kim Y,Lee S,Kim YS,etal.Regulation of Th1/Th2 cells in asthma development:a mathematical model[J].Math Biosci Eng,2013,10(4):1095- 1133.

[4] Qing M,Wei X,Zhen L,etal.Influence of sensitization patterns on fractional exhaled nitric oxide in asthmatic children[J].Iran J Allergy Asthma Immunol,2017，16(1):53- 59.

[5] 苗 青,關(guān) 輝,許 巍,等.過敏原及致敏模式對支氣管哮喘患兒氣道炎癥狀態(tài)及肺功能的影響[J].山東醫(yī)藥,2016,56(20):1- 4.

Miao Q,Guan H,Xu W,etal.Effects of sensitization pattern and sensitized allergen types on the state of airway inflammation and lung function in asthmatic children [J]. Shandong Med J,2016,56(20):1- 4.

[6] Patelis A,Gunnbj?rnsdottir M,Malinovschi A,etal.Population- based study of multiplexed IgE sensitization in relation to asthma,exhaled nitric oxide,and bronchial responsiveness[J]. J Allergy Clin Immunol，2012，130(2):397- 402.

[7] 中華醫(yī)學會兒科學分會呼吸學組,《中華兒科雜志》編輯委員會.兒童支氣管哮喘診斷與防治指南(2016年版)[J]. 中華兒科雜志,2016,54(3):167- 181.

The Subspecialty Group of Respiratory Diseases,The Editorial Board,Chinese Journal of Pediatrtics.Chinese Medical Association.Guideline for the diagnosis and optimal management of asthma in children [J]. Chin J Pediatr,2016,54 (3): 167- 181.

[8] 陳嘯洪,李華浚,姚歡銀,等.外周血Th17和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞變化與患兒支氣管哮喘活動狀態(tài)的相關(guān)性研究[J].中國全科醫(yī)學,2015,(8):969- 971.

Chen XH,Li HJ,Yao HY,etal.Correlation between state of bronchial asthma children and peripheral blood Th17 and CD4+CD25+regulatory T cells changes[J]. Chin General Pract,2015,(8):969- 971.

[9] Liu L,Jarjour NN,Busse WW,etal.Enhanced generation of helper T type 1 and 2 chemokines in allergen- induced asthma[J]. Am J Respir Crit Care Med,2004,169(10):1118- 1124.

[10] Willis CR,Siegel L,Leith A,etal.IL- 17RA Signaling in Airway Inflammation and Bronchial Hyperreactivity in Allergic Asthma[J]. Am J Respir Cell Mol Biol,2015,53(6):810- 821.

[11] Wilson J,Dixon SL,B reysse P,etal.Housing and allergens: a pooled analysis of nine US studies[J].Environ Res,2010,110(2):189- 198.

[12] Kim J,Lee S,Woo SY,etal.The indoor level of house dust mite allergen is associated with severity of atopic dermatitis in children[J]. J Korean Med Sci,2013,28(1):74- 79.

[13] Hose AJ,Depner M,Illi S,etal.Latent class analysis reveals clinically relevant atopy phenotypes in 2 birth cohorts[J]. J Allergy Clin Immunol,2017,139(6):1935- 1945.

[14] Alduraywish SA,Standl M,Lodge CJ,etal.Is there a march from early food sensitization to later childhood allergic airway disease? Results from two prospective birth cohort studies[J]. Pediatr Allergy Immunol,2017,28(1):30- 37.

[15] De Groot AS.Immunomics: discovering new targets for vaccines and therapeutics[J]. Drug Discov Today,2006,11(5- 6):203- 209.

[16] Singh VK,Mehrotra S,Agarwal SS.The paradigm of Th1 and Th2 cytokines: its relevance to autoimmunity and allergy[J]. Immunol Res,1999,20(2):147- 161.

[17] Bellinghausen I,Klostermann B,Knop J,etal.Human CD4+CD25+T cells derived from the majority of atopic donors are able to suppress TH1 and TH2 cytokine production[J]. J Allergy Clin Immunol,2003,111(4):862- 868.

[18] Wilson RH,Whitehead GS,Nakano H,etal.Allergic sensitization through the airway primes Th17- dependent neutrophilia and airway hyperresponsiveness[J]. Am J Respir Crit Care Med,2009,180(8):720- 730.

[19] Fujiwara M,Hirose K,Kagami S,etal.T- bet inhibits both TH2 cell- mediated eosinophil recruitment and TH17 cell- mediated neutrophil recruitment into the airways[J]. J Allergy Clin Immunol,2007,119(3):662- 670.

[20] Estelle Bettelli,Thomas Korn,Mohamed Oukka,etal.Induction and effector function of TH17 cells[J]. Nature,2008,453(1):1051- 1057.

[21] 繆美華,朱 宏,季正華,等.不同類型過敏原陽性喘息性支氣管炎患兒免疫功能分析[J].中華檢驗醫(yī)學雜志,2013,36(5):446- 448.

Miu MH,Zhu H,Ji ZH,etal.An analysis of immune function in children with different types of sensitized allergens[J]. Chin J Lab Med,2013,36(5):446- 448.

[22] Thomas WR.House dust mite allergens: new discoveries and relevance to the allergic patient[J]. Curr Allergy Asthma Rep，2016，16(9):69.

[23] Li BW,de Bruijn MJ,Tindemans I,etal.T cells are necessary for ILC2 activation in house dust mite- induced allergic airway inflammation in mice[J]. Eur J Immunol，2016，46(6):1392- 1403.

[24] 孟文霞,劉艷梅,李曉鸞,等.不同變應(yīng)原對上下氣道變應(yīng)性疾病的影響[J].河北醫(yī)藥,2010,32(7):824- 825.

Meng WX,Liu YM,Li XL,etal.The effect of allergens on airway allergic diseases[J]. Hebei Medical J,2010,32(7):824- 825.