莊夕棟

（諸城市畜牧獸醫(yī)管理局，山東 諸城 262200）

豬腸道杯狀病毒（Porcine enteric caliciviruses，PECV）是引起豬病毒性腹瀉的病原之一，它屬于杯狀病毒科，包括豬諾如病毒（norovirus，NoV）和豬札幌病毒（sapovirus，SaV）。豬NoV只感染成年豬，且無臨床癥狀；豬SaV可感染各年齡的豬，以2～8周齡仔豬感染率最高，并引起仔豬腹瀉[1]。PECV廣泛分布于世界各地，給世界范圍內(nèi)的養(yǎng)豬業(yè)帶來了一定的損失。

1 病毒的病原學(xué)特征

杯狀病毒科（Caliciviridae）的病毒為無囊膜的單股正鏈的RNA病毒。病毒粒子直徑為27～35 nm，含有長度為7～8 kb的基因組[2]。在通常情況下，杯狀病毒在環(huán)境中較為穩(wěn)定，病毒在高溫下和某些化學(xué)物質(zhì)（乙醚、氯仿等）作用下失活，PECV在pH 4.5～5.0的酸性條件下結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。豬SaV可在豬腎傳代細(xì)胞系（LLC-PK）和豬腎原代細(xì)胞中進(jìn)行培養(yǎng)，該病毒是唯一能細(xì)胞培養(yǎng)的腸道杯狀病毒[3]。豬NoV由于尚未找到合適繁殖的細(xì)胞系，對其理化性質(zhì)和生物性能的研究還尚屬空白。PECV能夠體外培養(yǎng)，但必須在培養(yǎng)基里添加無菌豬腸道內(nèi)容物或膽酸鹽。后來研究證實(shí)，腸道培養(yǎng)物中的膽汁酸是病毒復(fù)制的活性因子，為豬腸道病毒在豬腎成纖維細(xì)胞系中復(fù)制所必需[4]。

2 病毒的分類地位

最新的病毒學(xué)分類將杯狀病毒分為五個屬，分別是諾如病毒屬（Norovirus，NoV）、 札 幌 病 毒 屬（Sapovirus，SaV）、水皰疹病毒屬（Vesivirus）、兔病毒屬（Lagovirus）和Nebovirus屬[5]。屬于水皰疹病毒屬的豬水皰疹病毒（Vesi cular exanthema of swine virus，VESV）能夠引起豬水皰疹，屬于兔病毒屬的兔出血癥病毒（Rabbit hemorrhagic diseas e virus，RHDV）能夠引起兔子致命的出血性疾病。

3 病毒的流行病學(xué)與致病性

豬NoV已經(jīng)先后在日本、荷蘭、美國、匈牙利、比利時、中國、韓國等國家檢測出來。對NoV的流行有一項(xiàng)研究，調(diào)查了美國3個州（俄亥俄、密歇根和北卡羅來納）的7個豬場和1個屠宰場不同日齡豬的NoV流行情況。這項(xiàng)研究共采集了621份糞便樣品，RT-PCR檢測的結(jié)果顯示，這些豬場以及屠宰場中存在豬NoV的3種基因型，分別是GII-11、18和19。豬GII NoV只從育成豬（20～24周齡）豬群中檢測到，總的流行率在20%左右[6]。不同豬場的流行率差異很大，流行率最高的豬場達(dá)70%。保育豬以及斷乳仔豬（20周齡以下）未能檢測到NoV，可能的原因是幼齡仔豬對NoV不易感，這同人類NoV感染類似。也有人指出，檢測豬NoV的PCR引物是根據(jù)人NoV設(shè)計的，其靈敏性和特異性不高，在選擇樣品上也不夠全面，未參考斷奶前后的腹瀉仔豬，因此NoV的流行情況和發(fā)病率可能比實(shí)際情況更高。

豬SaV廣泛分布于世界各地。根據(jù)美國、荷蘭等國家的研究都顯示了各年齡段的豬群SaV的感染率和血清陽性率均明顯高于NoV，且在不同國家的感染率不同，但通常是2～8周齡仔豬感染率最高。各種豬SaV分離毒株中，最常見的是屬于GⅢ的SaV[7]。豬群中存在NoV和SaV共同感染的現(xiàn)象，發(fā)生腹瀉的仔豬也可能與多種其他腸道病原體（冠狀病毒、輪狀病毒、星狀病毒、嵴病毒和腺病毒等）混合感染，混合感染是否有協(xié)同作用而加劇腹瀉還有待進(jìn)一步的研究。由于存在隱形排毒以及母豬通過初乳中的母源抗體保護(hù)新生仔豬感染和發(fā)病，因此，環(huán)境中可能長期存在病原，病豬經(jīng)糞-口傳播途徑可能是病毒傳播的重要方式。

4 病毒的檢測技術(shù)研究進(jìn)展

4.1 直接電鏡觀察

病毒電鏡（EM）觀察可以直接觀察到病毒粒子，但杯狀病毒科包含的多種病毒在形態(tài)上差異不大，也很難將杯狀病毒和其他腸道病毒如星狀病毒、小核糖核酸病毒相鑒別[9]，因此對檢測人員電鏡觀察的技術(shù)水平要求較高，電鏡觀察并不是一種常用的方法。

4.2 ELISA檢測

ELISA可用于檢測血清中的抗體水平，由于SaV病毒樣顆粒（VLP）具有與真病毒相似的形態(tài)和抗原性，而絕大多數(shù)SaV缺乏細(xì)胞培養(yǎng)體系，因此重組VLP已被廣泛用作抗體ELISA檢測血清抗體的包被抗原。黃澤彬等[10]（2009）建立了PECV抗體檢測的間接ELISA方法。用該法對湖南省各地區(qū)收集到的42份母豬和96份仔豬血清樣品進(jìn)行檢測，PECV陽性率分別為83.33%（35/42）和 68.75%（66/96）。表明其所建立的間接ELISA方法適于大規(guī)模的PECV血清流行病學(xué)調(diào)查。

4.3 RT-PCR檢測

目前RT-PCR是檢測SaV的首選方法。Jiang等[11]（1999）基于RdRp基因設(shè)計一對引物：建立RTPCR方法，廣泛應(yīng)用于人和多種動物糞便或組織中NoV和SaV的檢測。Martinez等[12]（2004）對委內(nèi)瑞拉7個豬場204份0～9周齡的仔豬糞便樣品進(jìn)行RT-PCR檢測，發(fā)現(xiàn)SaV 感 染 率 達(dá) 18%（36/204）。Jeong等[13]（2007）對韓國6個地區(qū)78個豬場的糞便樣品進(jìn)行RT-PCR和套式RT-PCR檢測，SaV陽性率達(dá)29.1%（69/237）。黃澤彬等[10]（2009）對湖南地區(qū)多個豬場SaV感染進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果顯示腹瀉糞便樣品中SaV陽 性 率 達(dá) 12.7%（24/189）。Valente等[14]（2015）用RT-PCR對巴西169份哺乳母豬、斷奶仔豬、成年豬糞便樣品進(jìn)行了SaV檢測，陽性率為23.7%（40/169）。陳燕君等（2016）根據(jù)豬NoV保守的RNA依賴性RNA聚合酶（RNA Dependent RNA Polymerase，RDRP）基因序列設(shè)計了一套巢式RTPCR引物，建立了檢測豬NoV的巢式RT-PCR檢測方法。應(yīng)用該方法檢測某豬場健康育肥豬糞便樣品，陽性率為54.5%。RT-PCR為PECV的診斷與監(jiān)測提供了可供借鑒的方法，但上述報道的專門用于檢測豬NoV和SaV的RTPCR方法，特異性和敏感性差別較大。

5 小結(jié)

目前對本病尚無特效治療藥物，主要靠加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和衛(wèi)生措施進(jìn)行預(yù)防?？山o發(fā)病豬口服葡萄糖鹽水或復(fù)方葡萄糖溶液進(jìn)行對癥治療。PECV感染將在今后很長一段時間內(nèi)繼續(xù)影響全球的養(yǎng)豬生產(chǎn)，而且該病毒為RNA病毒，具很大的變異潛力，易使病毒毒力增強(qiáng)，從而對養(yǎng)豬業(yè)和人們的健康造成更大的威脅，因而有必要做更深入的研究，以全面了解該病毒的流行病學(xué)和生物學(xué)特性，從而評價該病毒在引起仔豬尤其是斷奶仔豬腹瀉中所起的作用，進(jìn)而合理地研制疫苗及制定疾病防控措施。綜上所述，目前PECV的研究主要集中在流行病學(xué)方面。人們對PECV的入侵與感染、變異與遷移、免疫與致病、跨物種間感染與傳播、暴發(fā)與流行等病原與宿主互作關(guān)系，以及病毒感染宿主的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸等規(guī)律的研究尚不深入。豬是PECV最主要的動物宿主，常以亞臨床或隱性感染形式存在于健康豬群。此外，作為導(dǎo)致人與多種動物急性胃腸炎的主要病原體，動物源與人源PECV表現(xiàn)為遺傳上高度同源性，不斷有來源于人和豬的SaV重組新毒株被發(fā)現(xiàn)，均暗示豬可能具備“儲存和整合”SaV的功能，具備潛在的跨物種間感染及傳播給人的威脅，進(jìn)而引發(fā)人獸共患病及相應(yīng)的食品安全和公共衛(wèi)生等問題，應(yīng)引起足夠重視。由于NoV和SaV的高度遺傳變異特性和多樣性及樣品的質(zhì)量和特異性擴(kuò)增的條件和方法的限制，目前還沒有一種方法能完全準(zhǔn)確地檢測到所有型別的PECV。當(dāng)前，國內(nèi)豬病流行形式十分復(fù)雜，各類新老疫病反復(fù)出現(xiàn)，有多種新出現(xiàn)的病毒從豬群中分離到。加強(qiáng)對豬NoV和SaV等新出現(xiàn)病毒的研究任重而道遠(yuǎn)。