答：(1)定期將未分化的細(xì)胞集落從已分化的細(xì)胞中分離出來(lái)并接種到新的培養(yǎng)基上。

(2)轉(zhuǎn)移細(xì)胞時(shí)盡量快，以免細(xì)胞發(fā)生解離和死亡。

(3)分離細(xì)胞集落時(shí)使每個(gè)部分含5～10個(gè)細(xì)胞，否則細(xì)胞過(guò)多將導(dǎo)致分化，細(xì)胞過(guò)少則克隆的效率低。

(4)由于ESCs是對(duì)各種內(nèi)毒素最為敏感的細(xì)胞，故要重視培養(yǎng)液和血清的質(zhì)量。

(5)重視原始飼養(yǎng)層細(xì)胞的質(zhì)量，沒有原始飼養(yǎng)層細(xì)胞所在的胚胎干細(xì)胞將在7～10 d內(nèi)分化或死亡，若原始飼養(yǎng)層細(xì)胞質(zhì)量差，則不能有效地抑制ESCs的分化而導(dǎo)致培養(yǎng)增殖失敗。