李文強(qiáng) 梁成

【摘要】 目的：探討血清水通道蛋白4（AQP-4）抗體檢測(cè)在視神經(jīng)脊髓炎患者中的應(yīng)用價(jià)值。方法：選取2016年8月-2017年8月本院收治的視神經(jīng)脊髓炎患者84例為研究A組、多發(fā)性硬化患者84例為研究B組、體檢正常人84例為對(duì)照組。三組均進(jìn)行血清AQP-4抗體水平檢測(cè)。比較三組AQP-4陽(yáng)性率，比較研究組首發(fā)受累部位、不同性別患者AQP-4抗體陽(yáng)性率。結(jié)果：研究組AQP-4陽(yáng)性率高于對(duì)照組，且研究A組高于研究B組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；研究A組各首發(fā)受累部位例數(shù)均多于研究B組（P<0.05）；女性AQP-4抗體陽(yáng)性率高于男性（P<0.05）。結(jié)論：血清AQP-4抗體水平與視神經(jīng)脊髓炎緊密相關(guān)，是區(qū)分神經(jīng)脊髓炎與多發(fā)性硬化的重要物質(zhì)，臨床利用價(jià)值與推廣價(jià)值較高。

【關(guān)鍵詞】 視神經(jīng)脊髓炎； 血清水通道蛋白4抗體； 應(yīng)用價(jià)值

【Abstract】 Objective：To explore the application value of serum aquaporin-4 antibody（AQP-4） in patients with neuromyelitis optica.Method：A total of 84 patients with neuromyelitis optica admitted to our hospital from August 2016 to August 2017 were selected as study A group，84 patients with multiple sclerosis as study B group and 84 healthy persons as control group.Serum AQP-4 antibody levels were detected in three groups.The positive rate of AQP-4 was compared between three groups，the first involvement site in study group were compared，the positive rate of AQP-4 antibody of different sex patients in study group was compared.Result：The positive rate of AQP-4 in study group was higher than that of control group，and that in study A group was higher than that of study B group，the differences were statistically significant（P<0.05）.The number of first involvement site in study A group was more than those of study B group（P<0.05）.The positive rate of AQP-4 antibody in females was higher than that of males（P<0.05）.Conclusion：Serum AQP-4 antibody level is closely related to neuromyelitis optica，it is an important substance to distinguish neuromyelitis from multiple sclerosis，has high clinical value and promotion value.

【Key words】 Neuromyelitis optica； Serum aquaporin-4 antibody； Application value

First-authors address：Second Hospital of Lanzhou University，Lanzhou 730030，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.33.032

視神經(jīng)脊髓炎屬于中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的一種，主要會(huì)對(duì)患者的脊髓、視神經(jīng)造成一定的影響，其癥狀主要為有選擇性地累及人體脊髓與神經(jīng)，引發(fā)神經(jīng)炎癥與脊髓炎癥，引發(fā)的病理因素主要是形成了壞死空洞、硬化斑、脫髓鞘等，同時(shí)伴有血管附近炎性細(xì)胞被浸潤(rùn)的現(xiàn)象[1]。血清水通道蛋白4（AQP-4）抗體在視神經(jīng)脊髓炎患者體內(nèi)的水平較高，在大部分視神經(jīng)脊髓炎患者體內(nèi)均能檢測(cè)到[2]。AQP-4抗體的高度特異性為臨床診斷視神經(jīng)脊髓炎提供了一定的線索。本院在視神經(jīng)脊髓炎患者AQP-4抗體水平與臨床特征的相關(guān)性研究過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)患者病情越嚴(yán)重，AQP-4抗體水平越高，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年8月-2017年8月本院收治的視神經(jīng)脊髓炎患者84例為研究A組、多發(fā)性硬化患者84例為研究B組，本院體檢正常人84例為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者均符合其診斷標(biāo)準(zhǔn)，且為首次發(fā)病；臨床資料均比較完整；研究對(duì)象均知曉同意此次研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴隨有其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病的患者；有脊髓外傷、腦部手術(shù)史的患者；心肝腎功能不全的患者。本研究通過(guò)了醫(yī)院倫理委員會(huì)審核。

1.2 方法

1.2.1 血液采集 研究對(duì)象均在入院后的第2天清晨空腹抽取靜脈血2 mL，離心后提取上清液，將其保存在-80 ℃的冰箱中備用[3]。

1.2.2 材料準(zhǔn)備 增強(qiáng)綠色熒光蛋白（EGFP）標(biāo)記的人AQP-4（EGFP-AQP-4）M23質(zhì)粒來(lái)源于牛津大學(xué)，DMEM培養(yǎng)基由Solarbia公司提供，瓊脂糖凝膠4B蛋白A（proteinA-sepharose 4B）、去蛋白酶抑制劑（PIC）、聚乙烯亞胺（PEI）均由Sigma公司提供，超低IgG胎牛血清、小牛血清均由GIBCO公司提供。SYNGERY2酶標(biāo)儀由美國(guó)Bio-teck公司提供，顯微鏡由日本奧林巴斯公司提供[4]。

1.2.3 血清AQP-4抗體檢測(cè)方法 首先將人胚腎293（HEK293）細(xì)胞用175 cm2培養(yǎng)瓶進(jìn)行培養(yǎng)，等到細(xì)胞貼合程度達(dá)到50%后應(yīng)用PEI介導(dǎo)EGFP-AQP-4M23cDNA質(zhì)粒對(duì)HEK293細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染[5]，轉(zhuǎn)染率>70%后應(yīng)用細(xì)胞裂解液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行裂解，后對(duì)其進(jìn)行離心分取上清液，其中必然含有EGFP-AQP-4蛋白，對(duì)其進(jìn)行熒光值（FU）測(cè)定，F(xiàn)U值保持在（500～600）/200 μL；對(duì)待測(cè)血清進(jìn)行解凍，離心分取血清20 μL，后將EGFP-AQP-4 200 μL加入離心血清中，將其維持在4 ℃進(jìn)行輪轉(zhuǎn)并過(guò)夜，后在混合液中加上提前經(jīng)過(guò)超低IgG胎牛血清處理的ProteinA-Sepharose 4B 75 μL，之后在室溫下輪轉(zhuǎn)2 h，離心分取血清[6]。在分取出的血清液中加入1 mL細(xì)胞裂解液進(jìn)行漂洗沉淀，連續(xù)進(jìn)行3次，后將150 μL漂洗沉淀復(fù)合物加入其中，再將其加入96孔酶標(biāo)板中，通過(guò)酶標(biāo)儀獲得FU值，設(shè)定激發(fā)波長(zhǎng)488 nm，發(fā)射波長(zhǎng)507 nm[7]。標(biāo)準(zhǔn)值為健康人群的平均FU+3s值，高于標(biāo)準(zhǔn)值即為陽(yáng)性，以上的血清進(jìn)行3次檢測(cè)取平均值。

1.3 觀察指標(biāo) 比較三組AQP-4陽(yáng)性率；比較研究A、B組首發(fā)受累部位，主要包括腦內(nèi)病灶、胸髓、腦干、長(zhǎng)脊髓、頸髓、雙側(cè)、單側(cè)視神經(jīng)[8]；比較研究組不同性別患者AQP-4抗體陽(yáng)性率[9]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 18.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組基線資料比較 研究A組男2例，女82例；年齡22～68歲，平均（42.5±3.5）歲；病程3個(gè)月～14年，平均（8.8±3.3）年。研究B組男3例，女81例；年齡21～69歲，平均（43.1±4.2）歲；病程2個(gè)月～13年，平均（9.1±3.4）年。對(duì)照組男4例，女80例；年齡23～68歲，平均（42.8±3.2）歲。三組一般資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 三組AQP-4陽(yáng)性率比較 研究組AQP-4陽(yáng)性率高于對(duì)照組（字2=7.670，P<0.05），且研究A組高于研究B組（字2=4.421，P<0.05），見(jiàn)表1。

2.3 研究A、B組首發(fā)受累部位例數(shù)比較 研究A組各首發(fā)受累部位例數(shù)均多于研究B組（P<0.05），見(jiàn)表2。

2.4 研究組不同性別患者AQP-4抗體陽(yáng)性率比較 女性AQP-4抗體陽(yáng)性率高于男性（字2=14.207，P<0.05），見(jiàn)表3。

3 討論

視神經(jīng)脊髓炎屬于一種自身免疫疾病，引發(fā)的原因可能主要與病菌感染、病毒感染、肺炎等有關(guān)[10]。通過(guò)對(duì)患者進(jìn)行免疫病理檢查，發(fā)現(xiàn)早期具有活動(dòng)能力病灶血管附近存在補(bǔ)體活化、免疫球蛋白沉積物，這就說(shuō)明體液在視神經(jīng)脊髓炎發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮了一定的作用。

視神經(jīng)脊髓炎與多發(fā)性硬化患者在免疫病理、血清學(xué)、神經(jīng)影像學(xué)、發(fā)病過(guò)程等方面均存在不同[11]。在視神經(jīng)脊髓炎患者的血清、腦脊液中可以檢測(cè)到其他抗體，其在疾病的復(fù)發(fā)與超敏反應(yīng)過(guò)程中均發(fā)揮了一定的作用[12]。AQP家族是近幾年新發(fā)現(xiàn)的一類具有特異性的膜內(nèi)在蛋白，可以通過(guò)多種途徑在動(dòng)植物體內(nèi)分布。當(dāng)前在臨床上發(fā)現(xiàn)的主要有7種，分別為AQP-1、AQP-3、AQP-4、AQP-5、AQP-8、AQP-9、AQP-11[13]。AQP-4是存在于腦組織中進(jìn)行表達(dá)的水通道蛋白，在腦水腫、腦缺血的病理發(fā)生過(guò)程中起到了很大的作用。在人體中樞神經(jīng)系統(tǒng)中首先發(fā)現(xiàn)的是AQP-4，主要存在于腦微血管細(xì)胞表面、海馬齒狀回細(xì)胞表面、中樞膠質(zhì)界膜細(xì)胞表面、小腦浦肯野細(xì)胞表面[14]。由于其存在極性分布的特點(diǎn)，充分說(shuō)明AQP-4在保持大腦水平恒定、穩(wěn)定方面具有重要的意義，同時(shí)AQP-4可以參與血管間的水調(diào)節(jié)、膠質(zhì)細(xì)胞間的水調(diào)節(jié)。AQP-4可以有選擇性地與視神經(jīng)脊髓炎標(biāo)志物NMO-IgG抗體結(jié)合。

NMO-IgG抗體是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中存在的血清AQP-4抗體。引發(fā)視神經(jīng)脊髓炎的主要原因就在于血清AQP-4抗體自身發(fā)生了抗體反應(yīng)[15]。血清AQP-4抗體具有很高的特異度與靈敏度，因此在臨床上對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)有利于診斷視神經(jīng)脊髓炎。本研究結(jié)果顯示，研究組AQP-4陽(yáng)性率高于對(duì)照組（P<0.05），且研究A組高于研究B組（P<0.05）；研究A組各首發(fā)受累部位例數(shù)均多于研究B組（P<0.05）。這就充分說(shuō)明，通過(guò)血清AQP-4抗體水平可以有效地區(qū)分視神經(jīng)脊髓炎患者與多發(fā)性硬化患者，可以將其作為臨床上檢查視神經(jīng)脊髓炎的重要指標(biāo)之一。當(dāng)前臨床上多認(rèn)為節(jié)段較長(zhǎng)脊髓炎的發(fā)生與血清AQP-4抗體水平存在緊密的聯(lián)系，這就說(shuō)明，如果在為患者進(jìn)行檢查的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)節(jié)段較長(zhǎng)脊髓病灶>3個(gè)，則需要對(duì)患者的血清AQP-4抗體水平進(jìn)行檢測(cè)，以便盡早明確病情發(fā)展進(jìn)程，為早期治療奠定基礎(chǔ)。

通過(guò)對(duì)血清AQP-4抗體水平的滴度進(jìn)行檢測(cè)可以發(fā)現(xiàn)脊髓節(jié)段的長(zhǎng)度與血清AQP-4抗體水平成正比，同時(shí)血清AQP-4抗體水平與復(fù)發(fā)率成正相關(guān)[16]。血清AQP-4抗體呈現(xiàn)陽(yáng)性的患者視力都較差，且容易發(fā)生神經(jīng)炎。在當(dāng)前臨床上通過(guò)檢測(cè)血清AQP-4抗體判斷患者的病情嚴(yán)重程度已經(jīng)應(yīng)用的越來(lái)越廣泛[17]。

本研究顯示，女性患者AQP-4抗體陽(yáng)性率高于男性患者（P<0.05），說(shuō)明女性患有視神經(jīng)脊髓炎、多發(fā)性硬化的概率更高。臨床上通常是對(duì)患者體內(nèi)的血清AQP-4抗體水平進(jìn)行檢測(cè)并觀察是否有高度表達(dá)等情況來(lái)判斷視神經(jīng)脊髓炎的發(fā)生情況[18]。根據(jù)血清AQP-4抗體陽(yáng)性情況，可以發(fā)現(xiàn)視神經(jīng)脊髓炎患者體內(nèi)的血清AQP-4抗體越高，患者的陽(yáng)性率越高，這就說(shuō)明，通過(guò)血清AQP-4抗體水平可以鑒別是否發(fā)生了視神經(jīng)脊髓炎，且通過(guò)血清AQP-4抗體水平可以預(yù)測(cè)患者的病情發(fā)展進(jìn)程及預(yù)后狀況，為患者早期接受臨床治療提供依據(jù)，并預(yù)測(cè)患者發(fā)生殘疾的危險(xiǎn)程度[19]。因此，視神經(jīng)脊髓炎患者一定要進(jìn)行血清AQP-4抗體水平檢測(cè)，觀察其表達(dá)情況，并給予相應(yīng)的治療措施，以便及時(shí)控制疾病發(fā)展進(jìn)程，改善患者預(yù)后[20]。

綜上所述，血清AQP-4抗體水平與視神經(jīng)脊髓炎緊密相關(guān)，是區(qū)分神經(jīng)脊髓炎與多發(fā)性硬化的重要物質(zhì)，臨床利用價(jià)值與推廣價(jià)值較高。

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（收稿日期：2018-09-27） （本文編輯：董悅）