李琳琳

（山東省濰坊市昌樂縣畜牧獸醫(yī)局 242600）

熒光定量PCR技術(shù)可以通過在PCR整體反應(yīng)體系增加熒光基團，應(yīng)用熒光獨有的信號積累實施監(jiān)測整個PCR的進程情況，最后可以通過標(biāo)準(zhǔn)化的曲線進行對相關(guān)未知的板塊進行定量分析。不僅可以實現(xiàn)PCR從定量監(jiān)測到定性的飛躍，還可以根據(jù)常規(guī)的PCR相對比，具備比較有差異性的靈活性更加強、無任何污染、自動性靈敏度較高、反應(yīng)多重性等優(yōu)點。目前現(xiàn)階段已經(jīng)廣泛應(yīng)用基因表達研究等很多核心領(lǐng)域。

1 動物檢疫中熒光定量PCR技術(shù)的應(yīng)用

我國實時熒光定量PCR技術(shù)是根據(jù)上世紀90年代所面世的，短短的經(jīng)歷了幾年的時間，已經(jīng)被逐漸的廣泛應(yīng)用在各大生物學(xué)的領(lǐng)域當(dāng)中。Taq Man、Lightcycler、Amplisensor和分子信標(biāo)熒光探針也是目前我國用于熒光定量PCR檢測的重要來源[1]。

1.1 應(yīng)用炭疽桿菌的檢測

炭疽桿菌的檢測是一種面對重要性的人畜共患病的原理，具備很高的致病性效果，并且還是重要的生物領(lǐng)域戰(zhàn)劑基礎(chǔ)之一，因此，打造一種簡單性快速的炭疽桿菌的檢測方法是非常有必要的操作。我國的相關(guān)科學(xué)調(diào)查表明，炭疽桿菌的檢測編碼存在熱毒素的PXO1質(zhì)梨上的基因以及編碼莢膜的PXO2質(zhì)粒為基礎(chǔ)的靶，打造了一種簡單化并且便捷的定量檢測形式。該檢測方法的靈敏度需要達到103拷貝體系，還能夠區(qū)分出炭疽桿菌的檢測與其他炭疽桿菌的檢測情況[2]，方便快捷并且準(zhǔn)確的對炭疽桿菌進行定量監(jiān)測分析。

1.2 大腸桿菌的定量檢測情況

大腸桿菌通常都是人類腹瀉或者是出血性腸炎及溶血性尿毒癥所導(dǎo)致的重要發(fā)病原因，也是我國現(xiàn)階段比較流行性的疾病。通過相關(guān)的科學(xué)調(diào)查研究表明，我國流行病學(xué)對其他的感染技能比較低，因此，對低劑量的大腸桿菌的檢測就比較極為重要。由于以往我國傳統(tǒng)的醫(yī)學(xué)分離培養(yǎng)檢測技術(shù)存在著檢測靈敏度比較低的情況，并且大腸桿菌的血清學(xué)鑒定情況也不太穩(wěn)定，可能會出現(xiàn)一些遺漏的情況[3]。根據(jù)大腸桿菌O157∶H7 rfb E基因作為合適的待檢測靶基因，根據(jù)復(fù)合性的熒光定量原理進行分析檢測，建立一個檢測大腸桿菌 O157∶H7 rfb E基因的重要方法。該情況檢測的靈敏度可以比以往傳統(tǒng)的檢測靈敏度高達一倍之多，定量檢測的漏洞也會隨之減少一大半。能夠快速并且方便準(zhǔn)確的對大腸桿菌O157∶H7 rfb E進行定量分析，也算是為大腸桿菌定量檢測情況提供了良好的新型解決辦法。

1.3 單獨的李斯特菌檢測情況

單獨的李斯特菌被WHO譽為4種主要的食物源性疾病致病菌基礎(chǔ)之一，目前現(xiàn)階段該菌已經(jīng)被國家質(zhì)檢總局列為進出口食品必須檢查的菌或者是監(jiān)控病原菌。此外，其他方法的檢測情況消耗的時間都比較長，檢定員也需要的多并且步驟也是相當(dāng)?shù)膹?fù)雜，不利于對該菌進行快速診斷。通過該菌的重要毒素基因的ly A基因作為靶序列設(shè)計一對引物，打造了快速檢測單獨李斯特菌的檢測方法，在單獨李斯特菌的檢測當(dāng)中具備很重要的位置價值。與此同時，由于瘋牛病或者是綿羊癢病也已經(jīng)被國家證實同人的克雅氏病存在著直接性的關(guān)聯(lián)，F(xiàn)Q-PCR技術(shù)還可以采用動物源飼料或者是食品日常用品成分的定量實時檢測功能。

2 總結(jié)

根據(jù)目前的FQ-PCR在動物檢疫中的使用主要是根據(jù)病原體檢測的情況下。今后隨著我國的FQ-PCR技術(shù)在不斷的完善創(chuàng)新，可以將FQ-PCR與生物當(dāng)中所產(chǎn)生的芯片等在應(yīng)用其他的信息技術(shù)進行相結(jié)合應(yīng)用，日后將會大大的提升該技術(shù)自身在動物檢疫相關(guān)領(lǐng)域的應(yīng)用以及推廣。