馬艷云 王春霞

（甘肅省蘭州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 甘肅 蘭州 730050）

宮頸癌是常見的女性惡性腫瘤，病因明確，持續(xù)感染高危型人乳頭瘤病毒（HR -HPV）是其主要致病因素[1]，可以通過預(yù)防性HPV疫苗進(jìn)行預(yù)防，但高危型HPV亞型多且分布具有明顯的地域性差異[2-3]，甘肅省地處西北偏遠(yuǎn)地區(qū)，經(jīng)濟(jì)水平落后，衛(wèi)生資源匱乏，是宮頸癌的高發(fā)地區(qū)。而目前的HPV疫苗只覆蓋HPV-16和HPV-18兩種高危亞型，防御能力有限。本研究旨在對(duì)甘肅地區(qū)HPV感染做出客觀的評(píng)估，為甘肅地區(qū)HPV疫苗的研發(fā)和其他相關(guān)研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1.材料與方法

1.1 一般資料

樣本源自2014年9月—2017年3月于我院婦科就診的宮頸HPV感染篩查患者。

1.2 儀器和試劑

試劑盒：《人乳頭瘤病毒基因分型檢測(cè)試劑盒（PCR-反向點(diǎn)雜交法）》（廣州安必平醫(yī)藥科技股份有限公司），可檢測(cè)28種HPV亞型，是目前分型較多的一款試劑，它可以檢測(cè)出15種高危型：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73和82型，3種中危型：26、53和66型，10種低危型：6、11、40、42、43、44、54、61、81、和83型；實(shí)時(shí)熒光PCR儀Rotor-Gene Q（德國(guó)QIAGEN）；核酸分子雜交水浴搖床（上海精宏）；生物安全柜Hfsafe-1200B2（上海力申）；臺(tái)式冷凍高速離心機(jī)H1850R(長(zhǎng)沙湘儀)；移液器（德國(guó)eppendorf）。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集 用陰道張開器暴露宮頸，棉拭子拭去宮頸口分泌物，將宮頸刷置于宮頸口，順時(shí)針旋轉(zhuǎn)5周，取得足夠的移行區(qū)上皮細(xì)胞，取出宮頸刷置于放入2ml生理鹽水的無菌小試管中，立即送檢驗(yàn)科檢測(cè)，不能立即檢測(cè)者于-20℃保存，一周內(nèi)檢測(cè)。

1.3.2 PCR擴(kuò)增 將樣本提取DNA并行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增條件為：50℃3分鐘，95℃預(yù)變性15分鐘，然后按94℃40秒→55℃40秒→72℃40秒擴(kuò)增40個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸7分鐘。

1.3.3 雜交染色，分析結(jié)果。

2.結(jié)果

被檢患者例數(shù)1584，其中陽(yáng)性367例，陽(yáng)性率23.17%（367/1584）；單一感染281例，占總感染例數(shù)的76.57%，多重感染86例，占感染例數(shù)的23.43%（見表1）；單一感染中高危型198例，占70.46%(198/281)，主要以HPV-16、52和58為主，中危型16例，占5.69%(16/281)，26型未檢出；低危型67例，占18.26%（67/281）(見表2、表3)；HPV-73和-83（MM7）型未檢出。多重感染中以雙重感染居多，占70.93%（61/86），雙重感染中最多見的型別組合為16+52型，占9.83%（6/61）；86例多重感染中出現(xiàn)頻次最多的亞型為52（25次）、16型（15次）和58（13次）。

3.討論

甘肅地處偏遠(yuǎn)地區(qū)，經(jīng)濟(jì)水平落后，衛(wèi)生條件差，衛(wèi)生資源匱乏，宮頸癌篩查工作起步晚于發(fā)達(dá)地區(qū)，人們對(duì)HPV與宮頸癌的相關(guān)性認(rèn)知程度不高，宮頸癌患病率居高不下。上世紀(jì)70年代和90年代腫瘤流行病學(xué)調(diào)查顯示，甘肅省武都區(qū)等地的宮頸癌死亡率在全國(guó)處于較高水平；2010年—2013年，甘肅隴南市作為全國(guó)重大公共衛(wèi)生服務(wù)項(xiàng)目農(nóng)村婦女宮頸癌篩查項(xiàng)目試點(diǎn)，有9萬名35～59歲農(nóng)村婦女免費(fèi)接受宮頸癌篩查，共檢出宮頸癌147例，患病率為163/10萬；而肅州區(qū)7402名35～59歲城鎮(zhèn)婦女中，篩查出5例宮頸癌，患病率為67.5/10萬,省內(nèi)各地宮頸癌患病率有差異,城鎮(zhèn)低于農(nóng)村，但均高于全國(guó)平均水平14.9/10萬。不足之處是這些大規(guī)模篩查工作采用巴氏涂片細(xì)胞學(xué)檢測(cè)方法，并未行HPV檢測(cè)，不能為HPV疫苗的研發(fā)提供數(shù)據(jù)支持。

HPV28種分型是目前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)較全面的HPV分型模式，本文旨在統(tǒng)計(jì)分析用該分型模式檢測(cè)的我院就診女性HPV感染情況及各亞型的分布情況，為宮頸癌的防治提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

表1 各感染類型構(gòu)成比

表2 單一感染病例不同亞型分組的構(gòu)成比

表3 單一感染高危型HPV各亞型感染例數(shù)及比值

[1]zur Hausen H.Papillomaviruses and cancer: from basic study to clinical application [J].Nature Reviews Cancer.2002.

[2]Guan P,Howell-Jones R,Li N,Bruni L,de Sanjosé S,Franceschi S,Clifford GM. Human papillomavirus types in 115,789 HPV-positive women:a meta-analysis from cervical infection to cancer [J]. Int J Cancer. 2012 Nov 15；131(10):2349-59.

[3]Li N,Franceschi S, Howell-Jones R, Snijders PJ,Clifford GM. Human papillomavirus type distribution in 30,848 invasive cervical cancers worldwide:Variation by geographical region, histological type and year of publication [J].Int J Cancer. 2011 Feb 15；128(4):927-35.