程瑋

多發(fā)性骨髓瘤是臨床最為常見的惡性漿細(xì)胞疾病, 主要是由單克隆漿細(xì)胞增生異常所致, 大量單克隆免疫球蛋白(M蛋白)被釋放, 導(dǎo)致患者產(chǎn)生腎功能損傷、感染等癥狀表現(xiàn), 嚴(yán)重危害患者身體健康［1］。為探討安全高效的診斷方式, 本院對(duì)收治的多發(fā)性骨髓瘤患者分別采用血清蛋白電泳和免疫固定電泳兩種診斷方式, 具體內(nèi)容報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2015年1月～2017年12月收治的45例多發(fā)性骨髓瘤患者為研究對(duì)象, 年齡38～76歲, 平均年齡(57.2±8.5)歲；患者臨床癥狀符合多發(fā)性骨髓瘤診斷標(biāo)準(zhǔn), 自愿參與本次研究。

1.2 方法 本組45例患者均分別進(jìn)行血清蛋白電泳與免疫固定電泳診斷, 具體如下。

1.2.1 血清蛋白電泳 在電泳槽內(nèi)放入緩沖液, 適當(dāng)調(diào)整,確保兩側(cè)位于同一水平面；制備醋酸纖維素薄膜, 于毛面負(fù)極側(cè)1.5 cm作記號(hào), 標(biāo)出正負(fù)極；在巴比妥鈉緩沖液中充分浸泡薄膜后取出, 吸去多余緩沖液；保持薄膜毛面朝上貼于電泳槽支架, 用醫(yī)用無菌吸管取3 μl血清于標(biāo)記處, 血樣與薄膜邊緣不完全接觸, 觀察到血清滲入薄膜, 將薄膜反轉(zhuǎn), 拉直貼于電泳槽支架, 連通緩沖液和薄膜兩端, 靜待片刻；正確接通電源, 電壓120 V, 電流0.5 mA/cm, 通電時(shí)長(zhǎng)50 min。通電結(jié)束后, 放入氨基黑10 B染色液中, 染色時(shí)間為10 min, 將多余染料用漂洗液除去, 直至背景無色。定量方法為比色法,吸干薄膜, 剪下染色部分置入相應(yīng)試管, 放入6 ml 0.4 mol/L氫氧化鈉于白蛋白管, 其他管內(nèi)加入3 ml, 置入溫度37℃的冰箱內(nèi), 停留20 min；用分光光度計(jì)在620 nm處讀取吸光度(結(jié)果×2), 計(jì)算各管血清蛋白電泳水平。

1.2.2 免疫固定電泳 將含有抗原的血清蛋白質(zhì)置于瓊脂凝膠介質(zhì)區(qū)帶電泳, 使不同蛋白質(zhì)因凈電荷不同, 帶電微粒因電泳遷移率的差別而分離；在凝膠表面的泳道上加入免疫球蛋白、固定劑和輕鏈抗血清, 確?？寡搴凸潭▌B入凝膠并擴(kuò)散, 若存在抗原, 可形成相應(yīng)抗體復(fù)合物；使用氨基黑著色染色后的蛋白質(zhì)電泳道和抗原抗體沉淀區(qū), 分離單克隆組分, 分型免疫球蛋白及其輕鏈。

1.3 觀察指標(biāo) 比較兩種診斷方式對(duì)多發(fā)性骨髓瘤的檢出率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

血清蛋白電泳檢出多發(fā)性骨髓瘤患者35例(77.8%), 免疫固定電泳檢出多發(fā)性骨髓瘤患者45例(100.0%)；兩種方式的多發(fā)性骨髓瘤檢出率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=11.250,P=0.001＜0.05)。

3 討論

多發(fā)性骨髓瘤也被稱為漿細(xì)胞瘤, 由漿細(xì)胞異常增生所致, 可破壞患者骨骼, 同時(shí)使得免疫功能下降、腎功能異常、出現(xiàn)貧血癥狀, 主要特征表現(xiàn)為M蛋白生成過度, 個(gè)別患者可能是未分泌型多發(fā)性骨髓瘤, 以中老年群體為主要發(fā)病對(duì)象 , 男性稍高于女性［2］。

目前臨床尚未明確多發(fā)性骨髓瘤發(fā)病機(jī)制, 但都認(rèn)為與患者自身免疫性疾病、病毒感染、化學(xué)品接觸、電離輻射和遺傳等因素有關(guān)。生化常規(guī)檢測(cè)、骨髓檢查、染色體檢查和血清游離輕鏈檢查是比較常用的檢查方式, 血清異常球蛋白增多, 白蛋白數(shù)目減少或漿細(xì)胞數(shù)目異常增加或骨髓染色體17p13缺失或血清游離輕鏈顯示未陽性均可用于檢測(cè)多發(fā)性骨髓瘤。免疫球蛋白是機(jī)體重要組成部分, 在機(jī)體內(nèi)保持固定水平, 一旦免疫球蛋白水平出現(xiàn)異常變化, 便意味著有免疫缺陷病或免疫增殖病產(chǎn)生［3］。電泳通常被用于核酸、蛋白質(zhì)等生物分子的研究, 操作簡(jiǎn)便、選擇性高、分辨率高。血清蛋白電泳往往以醋酸纖維素制成薄膜, 應(yīng)用原理為：蛋白質(zhì)分子形狀、大小不同, 等電點(diǎn)存在差別, 不同環(huán)境中, 血清蛋白移動(dòng)方向各不相同。需要注意的是, 通電時(shí)應(yīng)避免接觸薄膜或緩沖液, 血清標(biāo)本應(yīng)為現(xiàn)場(chǎng)采取, 無溶血, 盡量選用水溶性好、吸光度敏感、對(duì)不同蛋白質(zhì)親和力無明顯差別, 形成的蛋白質(zhì)復(fù)合物穩(wěn)定性高且脫色方便的染料。血清蛋白電泳標(biāo)本用量少、靈敏度和分辨率較高, 所用時(shí)間短,不吸附染料, 區(qū)帶均勻, 便于比色定量和光度掃描, 但此方案可能出現(xiàn)輕微電滲現(xiàn)象, 薄膜吸水性一般, 電阻變大幾率高, 選擇過大電流時(shí), 蛋白質(zhì)分子可能因水分蒸發(fā)而變性破壞。免疫固定電泳是將免疫特異性和電泳分離效果相結(jié)合的特殊診斷方式, 于上世紀(jì)70年代中期用于免疫球蛋白研究［4］。與免疫電泳不同的是, 其可以將抗血清直接置于蛋白質(zhì)區(qū)帶表面, 使得凝膠表面的抗原抗體能出現(xiàn)直接性沉淀反應(yīng), 形成相應(yīng)復(fù)合物, 便于不同球蛋白和輕鏈的鑒別。瓊脂是目前免疫固定電泳中比較常用的電泳支持物, 檢測(cè)靈敏性明顯高于免疫電泳, M蛋白區(qū)帶狹窄而界限明確, 正常血清γ球蛋白或多克隆增殖蛋白區(qū)帶較為彌散［5-8］。免疫固定電泳最常用來鑒定分型M蛋白, 也是檢測(cè)與分型本周氏蛋白質(zhì)和寡克隆蛋白的主要手段, 具有敏感度高、分辨率明顯、操作簡(jiǎn)便、易于分析等優(yōu)勢(shì)［9,10］。本次研究結(jié)果顯示, 血清蛋白電泳檢出多發(fā)性骨髓瘤患者35例(77.8%), 免疫固定電泳檢出多發(fā)性骨髓瘤患者45例(100.0%)；兩種方式的多發(fā)性骨髓瘤檢出率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=11.250,P=0.001＜0.05)。表明免疫固定電泳檢測(cè)多發(fā)性骨髓瘤準(zhǔn)確性高。

綜上所述, 給予多發(fā)性骨髓瘤患者免疫固定電泳檢測(cè),有利于提高檢測(cè)結(jié)果和疾病分型的準(zhǔn)確程度, 推廣應(yīng)用價(jià)值高。