毛 紅

（重慶市藥品技術(shù)審評認(rèn)證中心，重慶 401120）

《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010年修訂）》[1]（以下簡稱GMP）及《無菌藥品附錄》[2]要求，非最終滅菌藥品的無菌工藝驗證應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗。該試驗是指采用微生物培養(yǎng)基替代產(chǎn)品（無菌粉末分裝的培養(yǎng)基模擬灌裝試驗是將產(chǎn)品替代品溶于培養(yǎng)基中）對無菌工藝進(jìn)行評估的驗證技術(shù)，它解決了無菌檢查不能復(fù)檢的問題，灌裝批量即為無菌檢查取樣量，更能體現(xiàn)污染率問題[3－4]。該試驗是非最終滅菌藥品GMP管理中一項重要的驗證工作。2014年至2015年，國家食品藥品監(jiān)督管理總局食品藥品審核查驗中心在組織的無菌藥品生產(chǎn)企業(yè)的GMP認(rèn)證檢查缺陷中，共發(fā)現(xiàn)與培養(yǎng)基模擬灌裝相關(guān)的缺陷項378條。本研究中對這些缺陷項進(jìn)行了分類匯總和梳理，現(xiàn)報道如下。

1 缺陷項目分類及分析

選取近年來收集的與培養(yǎng)基模擬灌裝試驗相關(guān)的378條認(rèn)證檢查缺陷，出現(xiàn)頻次較高的缺陷分為人員與培訓(xùn)、方案設(shè)計、培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件、記錄缺失、最差條件、干擾設(shè)計、偏差調(diào)查7個方面。

人員與培訓(xùn)：無菌藥品生產(chǎn)中，人是最大的污染源，操作人員應(yīng)始終按無菌技術(shù)操作，并在日常操作中努力降低風(fēng)險[5－6]。檢查中人員與培訓(xùn)缺陷主要為試驗中未包括所有日常生產(chǎn)人員；模擬灌裝前未對人員無菌更衣效果進(jìn)行確認(rèn)，人員更衣不規(guī)范；無菌更衣培訓(xùn)記錄過于簡單，無視頻資料；未對進(jìn)入灌裝區(qū)域的維修人員、環(huán)境監(jiān)測人員進(jìn)行表面微生物監(jiān)測；模擬灌裝后培養(yǎng)基的培養(yǎng)結(jié)果由灌裝車間燈檢崗位人員執(zhí)行，但未對該崗位人員進(jìn)行微生物學(xué)知識和檢查技能的培訓(xùn)。人員方面的缺陷對無菌藥品最終質(zhì)量的影響最大。

方案設(shè)計：培養(yǎng)基模擬灌裝試驗要求盡可能模擬整個工藝過程，但也要考慮到培養(yǎng)基的生長條件，避免某些工藝抑制微生物的生長。檢查中方案設(shè)計缺陷主要為，試驗時按照正常生產(chǎn)工藝充氮氣保護(hù)，未考慮氮氣可能對需氧菌的抑菌效果；凍干時真空度過低造成培養(yǎng)基中的水分減少；培養(yǎng)基在凍干箱中溫度降低導(dǎo)致微生物生長抑制，未同步進(jìn)行促生長試驗；試驗中模擬了開門、停電、停風(fēng)等會帶來污染風(fēng)險的操作。試驗應(yīng)當(dāng)經(jīng)過詳細(xì)的計劃和良好的組織，以保證真實反映工藝中的污染風(fēng)險[7]。

培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件：培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的選擇對于培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的成敗至關(guān)重要。檢查中此類缺陷主要為，未對試驗用培養(yǎng)基進(jìn)行靈敏度試驗；培養(yǎng)結(jié)束后，未進(jìn)行培養(yǎng)基促生長能力試驗；培養(yǎng)條件未嚴(yán)格按照微生物的繁殖規(guī)律，先低溫、后高溫進(jìn)行培養(yǎng)，如驗證方案規(guī)定“灌裝后的培養(yǎng)基一半置23～28℃的溫度條件下培養(yǎng)7 d，另一半置30～35℃培養(yǎng)7 d，7 d后交換培養(yǎng)”；培養(yǎng)之前未對已灌裝好的瓶子進(jìn)行倒置和旋轉(zhuǎn)操作，而是直接采用將瓶子一半正立一半倒置的裝載方式培養(yǎng)，未能確保所有瓶子內(nèi)的培養(yǎng)基在培養(yǎng)之前均能與瓶壁和膠塞充分接觸；培養(yǎng)室設(shè)置的溫控探頭位置與溫度分布試驗結(jié)果無對應(yīng)關(guān)系，設(shè)置的溫度超標(biāo)報警系統(tǒng)未進(jìn)行確認(rèn)。

記錄缺失：GMP要求，所有與質(zhì)量相關(guān)的活動均應(yīng)當(dāng)有記錄，記錄缺失是GMP檢查中普遍存在的問題。常見記錄缺失缺陷主要為，缺少在線懸浮粒子的監(jiān)測數(shù)據(jù)和B級背景沉降菌／浮游菌的數(shù)據(jù)；未記錄操作人員進(jìn)出潔凈區(qū)時間和表面微生物的監(jiān)測情況；未記錄維修工模擬了哪些操作，帶入了什么工具等；未記錄滅菌后的配液系統(tǒng)、工作服、容器具、西林瓶、膠塞等放置多長時間后使用；對灌裝過程中模擬干預(yù)的動作、頻次等的記錄不具體；未記錄報廢品的原因及數(shù)量；未記錄針頭更換、設(shè)備維修與停機(jī)的時間；未記錄所用培養(yǎng)箱的設(shè)備編號、培養(yǎng)溫度、放入時間、培養(yǎng)數(shù)量等信息；未記錄模擬產(chǎn)品在凍干機(jī)中的裝載方式；缺少培養(yǎng)基的批號、配制過程、靈敏度試驗及促生長試驗記錄；操作人員無菌性檢查未記錄取樣時間。

最差條件選擇：最差條件是指與正常生產(chǎn)條件相比，更有可能造成工藝或生產(chǎn)失敗的條件[7]。企業(yè)在培養(yǎng)基模擬灌裝試驗中對最差條件常常選擇不當(dāng)，主要存在的缺陷為，沒有挑戰(zhàn)灌裝器具（包含玻瓶、膠塞、工作服、工器具）滅菌后存放的最長時間；未對實際生產(chǎn)時多臺分裝機(jī)同時分裝時的情景進(jìn)行模擬；未根據(jù)企業(yè)生產(chǎn)實際情況模擬同一品種同一天內(nèi)更換批號的操作；試驗前對環(huán)境分別進(jìn)行了乳酸和甲醛的熏蒸，人為制造了良好的生產(chǎn)環(huán)境，導(dǎo)致評估結(jié)論不準(zhǔn)確。

干擾設(shè)計：培養(yǎng)基模擬灌裝試驗必須模擬所有正常生產(chǎn)中的活動，如取樣、加塞等，但生產(chǎn)中還有一些意外情況，如倒瓶、卡瓶、故障維修等，所以應(yīng)按常規(guī)生產(chǎn)情況模擬影響無菌的關(guān)鍵操作和可能出現(xiàn)的各種干預(yù)。檢查中常見干擾設(shè)計缺陷主要為，未考慮理瓶期間分裝機(jī)隔離門開關(guān)次數(shù)、裝量檢查、卡塞，班次更替、維修人員進(jìn)入等干預(yù)；缺少更換軌道和更換灌裝頭的模擬；實施干預(yù)的次數(shù)不能反映正常生產(chǎn)狀況（如正常生產(chǎn)時，每批加膠塞的次數(shù)約為30次，但模擬灌裝只設(shè)計了12次加塞操作；正常生產(chǎn)時每批產(chǎn)品灌裝過程中會有約16次檢查裝量，但模擬灌裝試驗只設(shè)計了12次）；干擾試驗中未包括A級區(qū)沉降菌更碟等操作；未模擬設(shè)備維修、停機(jī)等狀況。

偏差調(diào)查：試驗過程中應(yīng)詳細(xì)記錄出現(xiàn)的偏差，并進(jìn)行調(diào)查，但在檢查過程中，常常發(fā)現(xiàn)企業(yè)缺少偏差調(diào)查或偏差調(diào)查不充分的情況。常見的此類缺陷問題包括，對試驗中樣品染菌情況的調(diào)查不充分，不能確認(rèn)調(diào)查結(jié)果與染菌的相關(guān)性；試驗中所使用的膠塞與實際生產(chǎn)用膠塞供應(yīng)商不一致，未按偏差進(jìn)行處理；試驗完成后未立即進(jìn)入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，而是存放在常溫留樣室數(shù)日，對此偏差未開展評估；動態(tài)監(jiān)測懸浮粒子超過警戒限時未進(jìn)行調(diào)查和處理。

2 改進(jìn)建議與措施

為指導(dǎo)和規(guī)范無菌藥品生產(chǎn)企業(yè)開展無菌工藝模擬試驗，國家食品藥品監(jiān)管管理總局食品藥品審核查驗中心2016年1月組織啟動了《無菌工藝模擬試驗指南（無菌原料藥）》和《無菌工藝模擬試驗指南（無菌制劑）》，并于2016年12月向社會公開征求意見，目前尚未正式頒布。GMP的認(rèn)證實施，使大部分藥品生產(chǎn)企業(yè)的管理水平得到了提升，特別是硬件設(shè)施的保證有了很大提高。GMP要求企業(yè)進(jìn)行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗，以確保無菌生產(chǎn)過程的可靠性，為企業(yè)及時識別風(fēng)險和改進(jìn)無菌控制措施提供數(shù)據(jù)支持[8－10]。

針對培養(yǎng)基模擬灌裝試驗相關(guān)認(rèn)證缺陷發(fā)生比例較高的7個方面，擬訂具體改進(jìn)措施如下。

人員與培訓(xùn)方面：試驗的參與人員應(yīng)包括日常參與到無菌生產(chǎn)的全部人員，如生產(chǎn)操作、取樣、環(huán)境監(jiān)測和設(shè)備設(shè)施維護(hù)人員，且還需通過文件或其他方式確認(rèn)各人員可以進(jìn)入的區(qū)域和允許的無菌操作項目。只有經(jīng)過專門培訓(xùn)并經(jīng)批準(zhǔn)的人員方可進(jìn)入無菌生產(chǎn)潔凈區(qū)內(nèi)，只有按照要求參加過培養(yǎng)基模擬灌裝試驗的人員才能直接參與實際生產(chǎn)，并且無菌生產(chǎn)的培訓(xùn)、人員考核等原則也同樣適用于無菌取樣、微生物分析人員。

試驗方案設(shè)計：企業(yè)應(yīng)對無菌生產(chǎn)過程開展系統(tǒng)性風(fēng)險評估，以充分識別無菌生產(chǎn)過程中潛在的風(fēng)險點，重點關(guān)注操作時限和“開放”操作[11]。

培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件：要注意培養(yǎng)基類型的合理選擇及工藝過程中微生物生長的影響，避免出現(xiàn)假陰性結(jié)果。培養(yǎng)基一般選用廣譜培養(yǎng)基，如果在環(huán)境監(jiān)控中或在成品的無菌檢查中發(fā)現(xiàn)厭氧微生物，則需要評估增加厭氧培養(yǎng)基，為避免培養(yǎng)基因過度滅菌或其他工藝條件造成促生長性能的降低，均應(yīng)進(jìn)行促生長能力試驗，試驗用菌應(yīng)包含藥典要求的6種試驗菌[12]。

記錄缺失：企業(yè)應(yīng)采取上下聯(lián)動的方式，首先制訂出合理的操作性強(qiáng)的試驗方案和操作規(guī)程，還要同時設(shè)計出合理的記錄表格，便于操作人員填寫。完整和準(zhǔn)確的記錄能保證藥品放行責(zé)任人完全掌握藥品是否能放行的所有信息，便于出現(xiàn)偏差和失敗結(jié)果時進(jìn)行事后調(diào)查分析和原因查找[13－14]。

最差條件選擇：值得注意的是，最差條件并不是指人為創(chuàng)造的超出允許范圍的生產(chǎn)狀況和環(huán)境，而是可以考慮選擇單批產(chǎn)品無菌生產(chǎn)周期末端、間歇式生產(chǎn)的空調(diào)系統(tǒng)重新開啟后或連續(xù)生產(chǎn)期間周期性滅菌最長的時間間隔，設(shè)備、工器具、無菌器具滅菌后最長的放置時間，培養(yǎng)基在灌裝前保存在儲罐中的最長工藝允許時間，試驗時間涵蓋最長實際生產(chǎn)時間、生產(chǎn)過程人數(shù)允許最多等最差條件。并結(jié)合生產(chǎn)實際操作過程中出現(xiàn)的各種狀況進(jìn)行模擬，盡量選擇極端的條件。

干擾設(shè)計：干擾措施應(yīng)模擬實際運(yùn)行時可能發(fā)生的情況，應(yīng)詳細(xì)記錄所有發(fā)生的干預(yù)措施，但不得挑戰(zhàn)不合理的干預(yù)，如模擬停電等情況。

偏差調(diào)查：特別是對于發(fā)現(xiàn)污染瓶的調(diào)查應(yīng)從人、機(jī)、料、法、環(huán)各個方面開展，可以借助各種分析工具，以保證調(diào)查的全面性和科學(xué)性，所有調(diào)查均需要詳細(xì)記錄，并根據(jù)調(diào)查結(jié)果采取針對性的措施，然后重新進(jìn)行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗。此外，對于污染的調(diào)查應(yīng)將發(fā)現(xiàn)的污染微生物進(jìn)行鑒別，并對上一次培養(yǎng)基模擬灌裝試驗后生產(chǎn)的產(chǎn)品進(jìn)行充分評估。影響產(chǎn)品無菌的因素相當(dāng)多，試驗結(jié)果的分析和調(diào)查是整個試驗的重點與難點，即使結(jié)果不合格，仍需進(jìn)行大量的調(diào)查，并采取有效的糾偏措施，不能簡單斷定試驗無效[15]。