□ 田 蕓 杜明花 殷東東 山東天音生物科技有限公司

葉黃素又被稱為植物黃體素，是一種經(jīng)溶劑萃取等工藝制得的黃色至暗黃色的浸膏，目前尚未有人工合成單一異構(gòu)體的葉黃素成功的報告，大多數(shù)葉黃素均是從萬壽菊花朵等天然植物中提取獲得，因此，其具有良好的抗氧化作用，然后將其作為飼料著色劑和添加劑添加到蛋雞、肉雞、鴨、魚飼料中，不僅能使蛋心變紅、動物皮膚脂肪變黃，還能提升商品肉蛋品質(zhì)和促進(jìn)其營養(yǎng)含量增加[1]。本文主要是采用紫外分光光度法對飼料添加劑中的葉黃素含量進(jìn)行測定，現(xiàn)報告如下。

1 實驗材料及方法

1.1 實驗材料

紫外可見分光光度計、超聲波清洗器、、石英比色皿（1 cm）。

葉黃素浸膏、甲醇、正己烷、無水乙醇、甲苯、丙酮、萃取劑HEAT（無水乙醇+甲苯+丙酮+正己烷=6∶7∶7 ∶10）、10%硫酸鈉水溶液（取100 g無水硫酸鈉，加純凈水溶解，再移入100 mL容量瓶中）、40%氫氧化鉀-甲醇溶液（取40 g純氫氧化鉀，加入20 mL純凈水迅速攪拌溶解，再加入50 mL甲醇，攪拌至澄清，再移入100 mL容量瓶中）。

1.2 方法

將樣品用56 ℃的水浴加熱，保持樣品全部溶解，混合均勻樣品準(zhǔn)確稱取約0.03 g（準(zhǔn)確到0.1 mg）于100 mL容量瓶中。移取30 mL萃取劑HEAT入容量瓶中。塞上塞子，平搖1 min，超聲溶解。然后，在容量瓶中加入40%氫氧化鉀-甲醇溶液2 mL加蓋搖勻，置入（56±1）℃水浴上加熱皂化，取出容量瓶置于冷水中冷卻，待液溫與室溫相同時，將30 mL正己烷溶劑加入到容量瓶中輕搖1 min，然后加入10%硫酸鈉水溶液定容猛烈振搖2 min，完成上述操作后，將容量瓶存儲在避光處1 h，進(jìn)行色層分離，上層液體積為50 mL（在整個色層分離期間，刻度線會下降，這是正常的，不必調(diào)整）。靜置完畢后，用移液管吸取1 mL上層清液至50 mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，搖勻、待測。采用紫外可見分光光度計進(jìn)行測定。在波長（445±1）nm、（474±1）nm處，葉黃素有最大吸收峰，?。?74±1）nm測定吸光度，并根據(jù)此處波長對葉黃素的吸收度和含量進(jìn)行測定。

葉黃素含量X=A474×K/（M×236）

其中，X表示試樣中葉黃素含量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（g/kg），A474表示吸光度，K表示樣品稀釋倍數(shù)，M表示樣品質(zhì)量（g）。為保證測定結(jié)果的準(zhǔn)確性，稱取5份試樣制備試樣溶液，再計算。另外，再按照上述方法，取測定準(zhǔn)確度試驗的溶液連續(xù)測定6次，測定葉黃素含量精密度。

2 結(jié)果

通過測定5份試樣的葉黃素含量，測得葉黃素含量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為 154.7、152.7、153.1、151.5、154.9、150.6、150.1、148.1、154.4 g/kg和152.1 g/kg，平均值為152.2 g/kg，RSD為1.4%；通過測定6份準(zhǔn)確度試驗的溶液，測得葉黃素精密度含量分別為152.7、153.7、153.4、152.7、152.4 g/kg和152.7 g/kg，平均值為152.9 g/kg，RSD為0.3%。

3 討論

葉黃素別名萬壽菊花素及植物葉黃素、核黃體、類胡蘿卜素等，是一種不溶于水，溶于己烷等有機溶劑的橙黃色粉末或漿狀浸膏，分子式為C40H56O2，相對分子量568.85。葉黃素本身屬于抗氧化物，對人體和動物均有一定的益處，如改善老年人群的眼視網(wǎng)膜、消化系統(tǒng)功能，改善動物皮膚脂肪外形和肉蛋品質(zhì)等，其中，葉黃素作為飼料添加劑的應(yīng)用最為廣泛[2]。然而，仍有不少飼養(yǎng)人員采用工業(yè)色素（一般為黃色化學(xué)合成染料）代替葉黃素添加到飼料中，從而易對人體產(chǎn)生一定的危害，為此，為保證食品安全，就需采取有效的方法對葉黃素的含量進(jìn)行測定。

本次研究通過采用紫外可見分光光度計對飼料添加劑葉黃素含量進(jìn)行測定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，5個葉黃素樣品含量平均值為152.2 g/kg，平行測定同一樣品平均值為152.9 g/kg，這些測定結(jié)果與國家規(guī)定的飼料添加劑葉黃素標(biāo)示含量150 g/kg均較為接近，說明該樣品的準(zhǔn)確度和精密度均良好。另外，準(zhǔn)確度及精密度試驗測定結(jié)果RSD也均在國家規(guī)定的范圍內(nèi)。

綜上所述，紫外可見分光光度計在測定飼料添加劑中葉黃素含量的準(zhǔn)確性良好，能有效確保最終產(chǎn)品質(zhì)量合格。