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中醫(yī)證候模型是1960年的鄺安堃等在試驗中偶然發(fā)現(xiàn)大劑量皮質(zhì)激素能誘發(fā)小鼠出現(xiàn)相似于人體陽虛證的征象。直至20世紀90年代，隨著醫(yī)學的發(fā)展及現(xiàn)代科學技術(shù)的應(yīng)用，血瘀證動物模型的研究出現(xiàn)井噴式發(fā)展，但彼時的動物模型只是單一因素造模，且缺乏診斷標準。2006年田金洲等提出了從“因”“脈”“證”“治”4個思路作為建立血瘀證動物模型的依據(jù)，為模型研究提供了新的思路與方法[1]。近年來隨著病證結(jié)合研究的深入，相繼涌現(xiàn)出一批血瘀病證結(jié)合模型，為中藥藥理研究和血瘀證機制研究奠定了實驗基礎(chǔ)?，F(xiàn)對近10年關(guān)于血瘀證動物模型的研究概況綜述如下。

1 血瘀證模型制備方法

1.1 依據(jù)病因制備動物模型

1.1.1 氣虛血瘀 《讀醫(yī)隨筆》曰：“氣虛不足以推動，則血必有瘀。”氣帥血行，血瘀多由氣虛日久而至。多數(shù)學者根據(jù)中醫(yī)“久行耗氣、勞則耗氣”的原理造成氣虛。如黃爍等[2]提出大鼠疲勞跑步運動結(jié)合左冠狀動脈前降支高位結(jié)扎，結(jié)果主癥、兼癥、舌象、脈象、血液流變學、凝血功能等均符合氣虛血瘀證候表現(xiàn)，成功建立大鼠氣虛血瘀證模型。蔡光先等[3]采取力竭游泳加皮下注射腎上腺素復(fù)制氣虛血瘀模型，該類模型動物表征符合氣虛血瘀證的表現(xiàn)，可見到血液流變學紊亂、凝血指標異常。也有學者采用睡眠剝奪、飲食攝入不足造成氣虛。苗蘭等[4]采用不可預(yù)知的慢性睡眠剝奪復(fù)合半高脂高糖飲食成功建立了氣虛血瘀中醫(yī)證候動物模型，模型的血脂代謝紊亂、血液流變學、血管活性分子、心功能等指標符合氣虛血瘀證的病機特點。廖慧玲等[5]采取饑餓、高脂飲食、寒濕或驚恐也建立了氣虛血瘀證模型，并發(fā)現(xiàn)該模型動物血液黏度異常增高，符合血瘀證的病理生理學表現(xiàn)。

1.1.2 寒凝血瘀 《素問·調(diào)經(jīng)論》曰：“血氣者，喜溫而惡寒，寒則泣不能流”。寒性凝滯，血行不暢而至血瘀。謝波等[6]將大鼠浸泡于冰水環(huán)境中，冰水持續(xù)刺激15 min～20 min，直至大鼠出現(xiàn)呼吸微弱、腿部僵直、反應(yīng)遲鈍欲沉時取出，每日1次，連續(xù)刺激15 d，最后觀察血常規(guī)、血液流變學、卵巢和子宮指數(shù)等指標的變化，建立了寒凝血瘀證動物模型。趙珊珊等[7]采用全身冷凍法造模，將各大鼠獨自放置于鐵網(wǎng)罩的瓷盤上，置于-20 ℃的低溫冰柜中持續(xù)受凍1 h，待大鼠出現(xiàn)喜扎堆、反應(yīng)遲鈍、呼吸弱、爪尾部紫暗、唇周發(fā)黑等癥狀時取出，每日1次，最后通過血液流變學、血漿內(nèi)皮素、一氧化氮、血清促甲狀腺素、腎上腺素等指標的變化，證明14 d為寒凝血瘀證大鼠模型最佳冷凍時間。周華妙等[8]采取冰浴法加腎上腺素皮下注射造模。該類動物模型可出現(xiàn)活動減少、進食下降、毛發(fā)變黃無光澤、大便溏稀或干結(jié)臭穢、體質(zhì)量增加緩慢、舌質(zhì)紫暗或有瘀斑等寒凝血瘀表征，也伴有血液流變學、耳溫、形態(tài)學、凝血系統(tǒng)等指標變化。

1.1.3 氣滯血瘀 《血證論·吐血》曰：“氣結(jié)則血凝”。情志不舒，所欲不遂至肝氣郁結(jié)，氣為血之帥，氣滯則血停。梁耀月等[9]采用慢性不可預(yù)知性刺激如夾尾、噪聲、電刺激、禁食水、晝夜顛倒等建立氣滯血瘀模型，大鼠出現(xiàn)血脂水平下降，情志異常，紅細胞變形性、心功能均發(fā)生異常。任建勛等[10]采用模擬飲食失調(diào)結(jié)合電刺激、噪聲、光建立模型，通過對病因病機的變化以及血管活性分子、血脂、血液流變學等指標的分析，成功復(fù)制了氣滯血瘀中醫(yī)證候模型。和嵐等[11]注射腎上腺素模擬氣滯血瘀大鼠模型，并應(yīng)用川芎、丹參等藥物治療干預(yù)，其結(jié)果成功反證建立氣滯血瘀證動物模型。

1.1.4 陽虛血瘀 《讀醫(yī)隨筆》曰：“陽虛必血凝”。陽氣溫通血脈，陽氣虛則生內(nèi)寒，內(nèi)寒則使血液凝滯而血瘀。鄭小偉等[12]將大鼠置于瓷盤上，放于-15 ℃的低溫冷柜中，持續(xù)受凍4 h，至大鼠出現(xiàn)畏寒喜暖、寒戰(zhàn)停止、少動、昏昏欲睡、無神、反應(yīng)遲緩、呼吸微弱、皮毛無光澤、唇黑舌暗、心率減慢時立即脫離冷環(huán)境，并通過病理形態(tài)學檢查成功建立了陽虛血瘀大鼠模型。

1.1.5 痰濁血瘀 若過食肥膩，或情志不暢，致脾失健運而痰濁內(nèi)生，痰阻血瘀，痰瘀互結(jié)。趙玲等[13]給大鼠喂養(yǎng)高脂飲食，采用終點取齊法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)高脂飼養(yǎng)第8周開始，三酰甘油和總膽固醇均升高，紅細胞變形系數(shù)顯著下降，血液呈“黏”“濃”“凝”“聚”狀態(tài)。

1.1.6 外傷血瘀 《黃帝內(nèi)經(jīng)》云：“若有所墮墜，惡疝，惡血，在內(nèi)而不去，……則氣血凝結(jié)”。外傷可致血脈受損，血液溢于脈外而為血瘀。華興邦等[14]將雄性家兔固定在兔臺上，用杠桿壓力器在右后肢體大腿內(nèi)側(cè)肌肉加壓75 kg，持續(xù)1.5 h，然后通過測定肌溫、腿徑、血流量、血液流變學、病理學檢查成功復(fù)制了外傷血瘀證動物模型。

1.1.7 熱毒血瘀 《讀醫(yī)隨筆》云：“血猶舟也，津液者水也?！睙嵝耙讉蛞?，致津液不足不能載血運行；另血受熏蒸，易瘀塞凝結(jié)而致血瘀。卞慧敏等[15]分別采用金黃色葡萄球菌、大腸桿菌內(nèi)毒素、地塞米松加內(nèi)毒素3種方法復(fù)制“熱毒血瘀”證候模型，3種方法在血凝學指標中均表現(xiàn)為凝血酶原時間(PT)、部分激活的凝血活酶時間(KPTT)顯著縮短，但在血液流變學指標中則各有不同。

1.1.8 血虛血瘀(脾虛血瘀) 《景岳全書》云：“凡人之氣血猶源原也，盛則流暢，少則雍滯?！薄皻鉃檠畮洠獮闅庵?。”血虛可致氣虛，氣虛又可致血瘀。常復(fù)蓉等[16]將家兔股動脈放血造成急性失血，放血后24 h、72 h、120 h，3次復(fù)測血常規(guī)及凝血、血液流變學、球結(jié)膜微循環(huán)、股動脈血流量、光電容積圖波幅、阻抗血流圖波幅、超氧化物歧化酶(SOD)、去甲腎上腺素(NE)、血栓素B2(TXB2)、病理形態(tài)學等指標，成功復(fù)制血虛血瘀模型。

1.1.9 陰虛血瘀 《醫(yī)學衷中參西錄》：“陰虛之甚者，其周身血脈津液，皆就黏稠?！标幗蚝膫?，血化無源，脈道空虛，血行不利而生瘀；陰虛生內(nèi)熱，血熱則聚而成瘀。葉宏軍等[17]采取氫化可的松聯(lián)合腎上腺素建立陰虛血瘀大鼠模型，并予六味地黃湯灌胃，末次給藥后1.5 h頸動脈放血檢測血液流變學的改變，成功建立了陰虛血瘀證動物模型。

1.1.10 自然衰老血瘀證 《黃帝內(nèi)經(jīng)》云：“六十歲，心氣始衰，苦憂悲，血氣懈惰?！彪S著年齡增長，機體老化，血液運行遲緩。趙瑛等[18]通過觀察對比老年雄性大鼠與對照組在體重、體溫、疲勞時間、自主活動、血液流變學等指標上的差異，結(jié)果顯示，老年雄性大鼠可以作為慢性天然氣虛血瘀模型。

1.2 依據(jù)病理制備動物模型 近年來，隨著中醫(yī)藥“活血化瘀”熱，在實驗研究過程中發(fā)現(xiàn)某些病理狀態(tài)有典型的血瘀證的癥狀和體征，目前常用的血瘀證動物模型主要依據(jù)血流動力學的障礙、微循環(huán)障礙、血液流變異常、血管灌注區(qū)缺血和血栓形成以及血管壁損傷等。梁愛華等[19]通過將細菌內(nèi)毒素(LPS)與角叉菜膠(Ca)復(fù)合因素制備模型，造模后24 h觀察血栓形成，并于造模后多個時間點分批觀察血液流變學指標、微循環(huán)變化、凝血及炎癥反應(yīng)指標的變化，成功建立血瘀證動物模型。卞慧敏等[20]將大鼠每日皮下注射D -半乳糖48 mg/kg，第32天開始再予地塞米松1.5 mg/kg肌肉注射，第40天腹腔注射呋塞米1.8 mg/kg。并觀察六味地黃湯對血液流變學的影響復(fù)制了衰老加陰虛血瘀證動物模型。張允嶺等[21]予改良Z -longa線栓法復(fù)合多因素刺激復(fù)制氣滯血瘀證模型，觀察模型在表征、舌象、腦組織形態(tài)學及血液流變學等指標的變化，建立了氣虛血瘀證模型的評價體系。王婷婷等[22]采用注射腎上腺素加聲光電、冰水浴、束縛、夾尾的方法復(fù)制氣虛血瘀證大鼠模型，并采用MOTO壓力傳感技術(shù)檢測血液流變學，采取凝固法檢測凝血四項。王洪復(fù)等[23]將家兔接受丙線照射后出現(xiàn)微循環(huán)障礙，并采用芪甲丹注射液反治能改善微循環(huán)。王健等[24]于家兔耳緣靜脈注射10%高分子右旋糖酐，每周2次，連續(xù)10周復(fù)制血瘀證動物模型，引起家兔血流速度增快，部分血流停止，眼球結(jié)膜微循環(huán)變化，微小靜脈擴張，微血管周圍滲出，血液流變學明顯改變等變化。

1.3 病證結(jié)合模型 病證結(jié)合模型有西醫(yī)疾患的病理生理特點，同時又有中醫(yī)證候的癥狀和表征，是微觀和宏觀的結(jié)合，是實驗研究及臨床實驗的重要載體。谷萬里等[25]將大鼠置于籠內(nèi)，放置于-5 ℃±1 ℃的可調(diào)溫冰箱中，連續(xù)3 h，使大鼠充分暴露于低溫環(huán)境中，再恢復(fù)20 ℃±1 ℃室溫，并腹腔注射垂體后葉素20 U/(kg·d)，連續(xù)3 d，通過對比造模前后的外觀、肛溫、耳溫、心電圖、心臟病理學檢查以及血清游離三碘甲狀腺原氨酸(FT3)、游離甲狀腺素(FT4)、促甲狀腺激素(TSH)、內(nèi)皮素(ET)、一氧化氮(NO)等指標的變化成功建立了寒凝血瘀心肌缺血病證結(jié)合模型。周海哲等[26]采用高脂乳劑1 mL/100 g灌胃，并地塞米松1.5 mg/kg后肢外側(cè)肌注，持續(xù)10 d，隨即行雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎術(shù)，通過對比大鼠行為學、大腦組織中生長抑素(SS)含量，復(fù)制了痰瘀互結(jié)血管性癡呆模型。劉丹彤等[27]通過自體內(nèi)膜移植法建立了子宮內(nèi)膜異位癥模型，然后予情志刺激、食用油1 mL/100 g灌胃，并腎上腺素皮下注射，每只0.2 mL，每周1次。隨后觀察模型行為學表現(xiàn)及外部體征、組織形態(tài)學、單胺類神經(jīng)遞質(zhì)、血管內(nèi)皮因子的變化，證明通過多因素整合成功建立了子宮內(nèi)膜異位癥氣滯血瘀證模型。張明雪等[28]采用高脂飲食、皮下注射垂體后葉素以及寒冷刺激多因素造模，然后進行心電圖、心臟彩超、心肌酶、血小板、血脂等檢查，成功復(fù)制冠心病(心)陽虛血瘀證候模型。聶金濤[29]采取將SD大鼠術(shù)前禁食24 h，麻醉后頸部正中切口，分離肌肉和組織后將雙側(cè)頸總動脈用4號絲線結(jié)扎，縫合后傷口局部注射慶大霉素2 000 U預(yù)防感染，并用補腎活血方反證，成功建立血管性癡呆血瘀證大鼠模型。李海霖等[30]將大鼠放置于真空干燥箱內(nèi)，模擬高原低壓缺氧狀態(tài)，每日3.5 h，此后放置于冰箱中予寒冷刺激3.5 h，共35 d。在此過程中一次性腹腔注射50 mg/kg體重的鏈脲佐菌素。成模后定時檢測血糖，并比較大鼠飲水量、進食量、體重、糖化血紅蛋白、血糖、尿微量白蛋白、肌酐、尿素氮、腎臟肥大指數(shù)的差別，成功建立了高原陽虛血瘀證糖尿病腎病動物模型。

2 存在問題及思考

當前中醫(yī)證候模型制備的主要思路包括病因、病理、病因病理結(jié)合模型和病證結(jié)合模型，而病證結(jié)合模型最具實用價值。近年來隨著研究的逐步深入，血瘀證動物模型不斷充實和改進，但同時也暴露出一些問題。

2.1 優(yōu)化造模因素，多因素復(fù)合造模 中醫(yī)學的辨證綱領(lǐng)、論治原則、治法、方劑共同構(gòu)成了中醫(yī)臨床實踐的辨證論治體系。而“證候”則是這個體系中的關(guān)鍵。依據(jù)中醫(yī)學“有諸內(nèi)必行諸于外”的整體觀念，證候模型是利用動物某些生物表征來模擬人體證候特征的一類生物表征模型。目前，模型評價指標有以病因為認定依據(jù)，有以體征或行為作為評判指標，有學者強調(diào)以類血瘀的病理生理指標為依據(jù)，也有以方藥的反證為依據(jù)。成功建立動物模型應(yīng)滿足3個條件：①模型與原型有相似關(guān)系；②模型在致病機制、病理表現(xiàn)方面能替代原型；③模型的研究應(yīng)能得出原型的信息。多因素復(fù)合造模，由于既符合血瘀證的診斷標準，也有公認的病理生理指標來支持，應(yīng)成為制備血瘀證候模型的重要研究方向。

2.2 完善血瘀證模型判斷標準 血瘀證覆蓋范圍很廣，內(nèi)科、外科、婦科、五官科、骨傷科各科疾病都可出現(xiàn)血瘀的病理改變，2011年中國中西醫(yī)結(jié)合學會活血化瘀專業(yè)委員會制定《血瘀證中西醫(yī)結(jié)合診療指南》。但在造模過程中，因為動物種屬差別、制作技術(shù)水平的差異、氣候環(huán)境等主客觀因素的影響，目前血瘀證模型制備缺乏規(guī)范化、標準化標準。隨著動物模型表征的研究，急需完善科學統(tǒng)一的血瘀證模型判斷標準。

2.3 深化病證結(jié)合模型研究 血瘀證動物模型的研究目的是為臨床或藥物開發(fā)提供支持。多數(shù)血瘀證模型是依據(jù)中醫(yī)血瘀證的病因病機或西醫(yī)的病理生理而建立的，模型的實用性、針對性不足。而病證結(jié)合綜合考慮了中醫(yī)病機特點和西醫(yī)病理特點，符合病證結(jié)合研究趨勢，臨床意義更大。但當前血瘀證病證結(jié)合模型研制緩慢，尚需深入研究。

2.4 重視對自發(fā)性血瘀證模型的研制 病理性或藥物干預(yù)性血瘀證候模型雖然部分可模擬中醫(yī)血瘀特點，但是在形成機制、動物表征方面，與人類血瘀證形成差距較大。隨著實驗技術(shù)的不斷發(fā)展，充分利用實驗動物的特點，通過合理的培育手段，可嘗試建立自發(fā)性血瘀證動物模型，對血瘀證研究具有較大價值。