□ 葉 一 成都市食品藥品檢驗研究院

1 實驗材料與方法

1.1 實驗儀器與試劑

超高效液相色譜-串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜儀；瑞寧微量移液器；VDRTEX-5-H106漩渦混合器；GL-20G-II高速冷凍離心機(jī)；TTL-DCI氮吹儀（北京同泰聯(lián)）；超純水儀（MILLIPORE Synergy）。應(yīng)用的試劑主要有甲醇、甲酸、污水硫酸鈉、氫氧化銨等，符合實驗研究純度。

1.2 液相色譜與質(zhì)譜條件

液相條件：色譜柱，Hypersil Gold—C18，1.9 μm，2.1 mm×100 mm。流動相：甲醇—水。流速0.3 mL/min；進(jìn)樣量10 μL；流動相比例見表1。

質(zhì)譜條件：采用負(fù)離子進(jìn)行樣品的掃描，多反應(yīng)監(jiān)測進(jìn)行樣品的檢測，電噴霧電壓-2 500 V；采用高達(dá)350℃的霧化溫度；輔助氣流速和鞘氣流速為3 arb、35 arb；采用350 ℃毛細(xì)血管溫度。詳見表2。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

稱取標(biāo)準(zhǔn)品氯霉素10 mg，加入甲醇至100 mL，制定成為100 μg/mL氯霉素溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)品儲備液使用，并儲存在零下20 ℃的冰箱。用甲醛將儲備液稀釋成10 ng/mL，用作對照液。

1.4 樣品前處理

1.4.1 雞肉樣品前處理

稱取5 g雞肉樣品，準(zhǔn)確到小數(shù)點后兩位，并將其放置在50 mL具塞聚四氟乙烯離心管中，向管內(nèi)加入3 mL 0.1%三氯乙酸，持續(xù)1 min的玻璃棒混勻，并加入乙酸乙酯20 mL和氫氧化銨0.5 mL，繼續(xù)使用玻璃棒進(jìn)行5 min的混勻均質(zhì)，開始進(jìn)行離心10 min，使用5 000 r/min離心速度，然后吸取離心管內(nèi)的上清液。在另一個離心管中加入氫氧化銨0.5 mL和乙酸乙酯20 mL，將玻璃棒清洗干凈。將清洗液倒入第一個離心管中，重復(fù)提取，并將兩次提取液合并，并用玻璃棒進(jìn)行混勻。

1.4.2 雞蛋樣品前處理

稱取5 g雞蛋打散樣品，精度精確到小數(shù)點后兩位，并將其放置在50 mL具塞聚四氟乙烯離心管，并按照乙酸乙酯20 mL、氫氧化銨0.5 mL、無水硫酸鈉5 g的順序依次加入，持續(xù)5 min的玻璃棒混勻均質(zhì)提取，離心10 min，使用5 000 r/min離心速度，將離心管內(nèi)的上清液進(jìn)行吸取。在另一個離心管中加入0.5 mL氫氧化銨、20 mL乙酸乙酯，清洗玻璃棒，洗液倒入第一個使用的離心管中并連續(xù)二次提取雞肉，合并兩次提取液并渦旋混勻。

1.4.3 液凈化操作

量出8 mL雞蛋和雞肉提取液，采用氮吹方法在55 ℃環(huán)境下吹干，并用2 mL甲醇10%溶液溶解，然后加入1 mL 10%的甲醇飽和的正己烷渦旋混合30 s，然后離心5 min，采用8 000 r/min的轉(zhuǎn)速，將上清液清除。沿用上述方法再重新凈化兩到三次，當(dāng)下層呈現(xiàn)透明清亮的狀態(tài)就可以，采用0.2 μm濾膜進(jìn)行過濾，待檢測。

2 試驗結(jié)果和分析

2.1 提取溶劑

對氯霉素的提取，筆者采用乙酸乙酯，經(jīng)過兩步的提取后，可以將雞蛋和雞肉中的氯霉素藥物殘留最大限度地提取，雞肉和雞蛋的提取率為92.1%和95.6%。

2.2 流動相

經(jīng)過試驗表明，甲醇-水為流動相時，信號較強(qiáng)，沒有出現(xiàn)拖尾問題，且無分叉，還可以有效避免溶劑效應(yīng)。所以，最終的流動相為甲醛-水。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性考察

取適量標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用甲醇稀釋成 0.1、0.5、1、2、5、10 ng/mL濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，并按照從低到高的濃度進(jìn)行測定，每一種濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)樣3針，并繪制標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度和峰面積的曲線。

2.4 添加回收和精密度試驗

準(zhǔn)確量取500、300、100 μL的氯霉素對照工作液加入到5 g樣品中，每個濃度制備3份平行樣，且每份樣品進(jìn)樣3次，取數(shù)據(jù)的平均值。經(jīng)過相關(guān)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計可知，雞肉和雞蛋內(nèi)添加的樣品回收率在70%～100%和80%～110%。不同批次變異系數(shù)都小于10%。據(jù)試驗數(shù)據(jù)確定本方法的檢測底限（LOQ）為0.1 μg/mL。

3 結(jié)語

通過對雞肉和雞蛋的氯霉素藥品殘留的檢測發(fā)現(xiàn)，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法具有精度較高的測量結(jié)果。本方法的檢測底限（LOQ）為0.1 μg/mL，且該方法居民明顯的優(yōu)勢，簡單、快速、回收率高，在雞肉和雞蛋的氯霉素檢測中可以采用。