任宜家

（青海省海北州祁連縣畜牧獸醫(yī)站 青海海北 810499）

牛病毒性腹瀉病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）屬于黃病毒科瘟病毒屬成員，為牛病毒性腹瀉（Bovine viral diarrhea，BVD）的致病原。BVDV的感染非常普遍，可以感染黃牛、水牛、牦牛和豬、羊等動物，是當(dāng)前危害養(yǎng)牛業(yè)的重要病毒性傳染病之一?；疾游锖蛶Ф緞游餅橹饕獋魅驹?，病畜的分泌物和排泄物都含有病毒，病毒可通過接觸以及空氣水平傳播，還可以通過胎盤垂直傳播，致使新生犢牛發(fā)生流產(chǎn)或死胎。不同飼養(yǎng)方式、品種和年齡的牛均易感，但對犢牛的危害最為嚴重，一年四季都可發(fā)生，冬末和春季高發(fā)。牦牛是我國高原牧區(qū)特有的一個獨立物種，牦牛全身是寶，其奶和肉可食用，毛皮可以制作皮革和衣服，糞便可以作為燃料，既可以用來農(nóng)耕也可以作為高原地區(qū)的交通工具，是當(dāng)前青海省農(nóng)村飼養(yǎng)的主要家畜，而牛病是一直困擾著基層牦牛養(yǎng)殖戶的棘手問題，特別是BVDV感染常有發(fā)生。2018年3月，青海省西寧市某牧區(qū)的牦牛養(yǎng)殖場發(fā)生一起以消瘦、食欲下降、發(fā)熱、黏膜糜爛和腹瀉為主要特征的疫病，通過臨床癥狀初步懷疑為BVDV感染，通過實驗室PCR檢測最終確診了疫情，為采取積極的治療措施提供了參考依據(jù)?，F(xiàn)將發(fā)生這起牦牛感染BVDV病例的整個診斷情況匯報如下。

1 臨床診斷

1.1 發(fā)病情況

該牦牛場共飼養(yǎng)牦牛100余頭，2018年3月，陸續(xù)有牦犢牛發(fā)生高熱、咳嗽、腹瀉和死亡，就診時已死亡犢牛3頭，發(fā)病后養(yǎng)殖場曾利用青霉素等抗生素進行藥物治療，但效果不明顯。

1.2 臨床癥狀

發(fā)病牦牛表現(xiàn)食欲下降，被毛凌亂，發(fā)熱，體溫達42.0℃，咳嗽，眼鼻有漿液性分泌物，口腔黏膜糜爛，流涎，精神不振，發(fā)生嚴重腹瀉，糞便惡臭、含少量血絲或黏膜，消瘦、脫水最后死亡。

1.3 剖檢病變

對病死牦牛剖檢可見食道黏膜糜爛，瘤胃黏膜有出血和糜爛，腸內(nèi)容物稀薄，腸壁薄，水腫，腸黏膜出血，腸系膜淋巴結(jié)腫大，小腸、空腸和回腸都有炎性病變。根據(jù)發(fā)病情況、臨床癥狀和剖檢觀察結(jié)果初步懷疑為BVDV感染，無菌采集脾及腸系膜淋巴結(jié)送實驗室檢驗。

2 實驗室診斷

2.1 核酸提取

將病料樣品按1:3比例加生理鹽水，用研磨器研磨成組織勻漿，取上清液利用病毒基因組RNA提取試劑盒（購自北京百泰克生物技術(shù)有限公司）提取核酸RNA。

2.2 一步法RT-PCR擴增

以提取的RNA為模板，利用牛病毒性腹瀉病毒一步法RT-PCR診斷試劑盒（購自北京百奧萊博科技有限公司）進行一步法RT-PCR擴增，一步法RT-PCR反應(yīng)程序為：50℃反轉(zhuǎn)錄40min；94℃預(yù)變性3min；94℃變性30s，59℃退火30s，72℃延伸30s，30個循環(huán)；72℃延伸6min；4℃終止反應(yīng)。

2.3 電泳檢測

一步法RT-PCR擴增結(jié)束后，取擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后在紫外成像儀下觀察檢測結(jié)果，結(jié)果顯示在約258bp具有特異性核酸片段，說明檢測結(jié)果為BVDV陽性。

3 綜合診斷結(jié)果

根據(jù)疾病的臨床表現(xiàn)和實驗室PCR檢測結(jié)果，確診該牦牛養(yǎng)殖場發(fā)生了BVDV感染。

4 討論

近年來，隨著我國對特種動物養(yǎng)殖的不斷扶持，牦牛養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)得到了快速發(fā)展，但由于基層養(yǎng)殖單位疫病防控意識薄弱，致使牦牛疫病的流行率逐步增加，其中BVDV感染是危害當(dāng)前牦犢牛的主要疫病，給牦牛養(yǎng)殖經(jīng)濟效益帶來了嚴重損失，也制約著我國牦牛產(chǎn)業(yè)的進一步發(fā)展，加強牦牛BVDV的防控對保障牦牛養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展至關(guān)重要。BVDV感染可引起牦牛的發(fā)熱、咳嗽、腹瀉以及懷孕母牛流產(chǎn)等臨床表現(xiàn)，臨床中一般可以根據(jù)這些特征進行初步診斷，但在實際養(yǎng)殖生產(chǎn)中，由于牛的體質(zhì)和感染狀態(tài)不同，一般發(fā)病癥狀并不明顯，且臨床中BVDV引起的臨床表現(xiàn)與大腸桿菌、沙門氏菌引起的腹瀉極其相似，憑借肉眼觀察或者臨床經(jīng)驗只能進行初診，確診必須借助實驗室診斷。目前BVDV的實驗室檢測方法主要包括常規(guī)RT-PCR、一步法RT-PCR、熒光定量RT-PCR、病毒分離培養(yǎng)、病毒中和試驗、ELISA方法等，其中以RT-PCR檢測方法操作最簡單、檢測最快速，且RT-PCR方法可以檢測到不同病原體特定的核苷酸序列，大大提高了BVDV的檢出率和準(zhǔn)確率。而一步法RT-PCR檢測方法將反轉(zhuǎn)錄過程和PCR擴增過程簡化至一步反應(yīng)，解決了常規(guī)RT-PCR方法需要反轉(zhuǎn)錄和PCR擴增分開進行的缺陷，大大降低了檢測成本、減少了檢測操作、縮短了檢測時間，鑒于此，本研究利用一步法RTPCR檢測試劑盒對病例進行確診，為養(yǎng)殖場采取積極的治療措施贏得了時間。養(yǎng)殖場根據(jù)確診結(jié)果通過緊急采取隔離飼養(yǎng)、環(huán)境消毒、疫苗免疫接種、補液、對癥治療以及應(yīng)用磺胺類藥物防止繼發(fā)細菌感染等綜合性防控措施，養(yǎng)牛場病牛逐漸康復(fù)，此次疫情得到了有效控制。

BVDV通過侵入牛的呼吸道及消化道黏膜上皮細胞進行復(fù)制，病毒入血后可以形成病毒血癥，BVDV能通過胎盤屏障，妊娠母牛感染后會出現(xiàn)流產(chǎn)，或產(chǎn)下有先天性缺陷的犢牛，如小腦發(fā)育不全等。BVDV感染后會導(dǎo)致免疫抑制，本病可以在牛群中潛伏感染，當(dāng)機體抵抗力下降時發(fā)病。BVDV的垂直感染以及免疫抑制增加了BVDV防控的難度，且臨床中BVDV與各種細菌病混合感染的情況經(jīng)常發(fā)生，一旦發(fā)生混合感染將大大提高BVDV的致死率。對于BVDV的防控一般應(yīng)采取以預(yù)防為主的綜合性防控措施，要求養(yǎng)殖場一定要搞好環(huán)境衛(wèi)生，保持牛舍的空氣清潔，保證良好的通風(fēng)，牛糞便要及時清理，防止與其他病原菌混合感染，做好疫苗免疫接種和血清學(xué)監(jiān)測，一旦發(fā)現(xiàn)陽性牛要及時淘汰，做好牛群的凈化工作。發(fā)病牛要盡早隔離飼養(yǎng)，對癥治療，給予補液和止瀉處理，同時給予抗生素和抗病毒營養(yǎng)物質(zhì)，防止繼發(fā)感染和脫水死亡?！?/p>