李俊強(qiáng)，呂艷妮

(1.煙臺(tái)市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，煙臺(tái) 264000; 2.煙臺(tái)毓璜頂醫(yī)院，煙臺(tái) 264000)

天麻清腦膠囊由天麻、鉤藤、石決明、牛膝、首烏藤、杜仲、槲寄生等14味藥材組成，具有平肝潛陽，活血涼血之功效，臨床上用于治療中風(fēng)、高血壓、腦供血不足等引起的頭痛、頭脹、頭暈、失眠、口苦、心煩等癥狀。方中主藥天麻具有息風(fēng)、定驚之功效，臨床上主要用于治療眩暈、頭風(fēng)頭痛等癥[1-3]。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只有對(duì)天麻、黃芩、首烏藤等藥材的鑒別，為更有效地控制天麻清腦膠囊的質(zhì)量，本研究采用HPLC法對(duì)其天麻素[3]的含量進(jìn)行測定，對(duì)后續(xù)優(yōu)化藥品質(zhì)量指標(biāo)予以實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持。

1 儀器與試藥

1.1儀器 LC-2040高效液相色譜儀(日本島津公司)；AUW120D 分析天平(日本島津公司)；PURELAB Classic超純水機(jī)(英國ELGA LabWater公司)；數(shù)控超聲波清洗機(jī)(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2試藥 所用天麻清腦膠囊以及各陰性樣品均由煙臺(tái)天正藥業(yè)有限公司提供(批號(hào)160311、160312、130313、160314、160315、160316、160317、160318、160319)，規(guī)格是0.41 g/粒；天麻素對(duì)照品(批號(hào)110807-201608)購自中國食品藥品檢定研究院；乙腈為色譜純(美國天地試劑公司)；超純水(PURELAB Classic超純水機(jī)制得)；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱為：Thermo XDB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相為：乙腈-0.05%磷酸(3∶97)；紫外檢測器，檢測波長為：220 nm；柱溫：35 ℃，流速：1.0 ml/min；進(jìn)樣量：10 μl。理論塔板數(shù)按天麻素峰計(jì)算不得小于5 000[4]。

2.2溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液的制備 精密稱取天麻素對(duì)照品12.10 mg，加入100 ml具塞量瓶中，滴加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，混勻；精密量取上述溶液10 ml，至25 ml量瓶中，滴加流動(dòng)相至刻度，并混勻，即為對(duì)照品溶液(此溶液每1 ml中含有天麻素為48.4 μg)。

2.2.2供試品溶液的制備 取“裝量差異”項(xiàng)下的膠囊內(nèi)容物，混勻并研細(xì)，精密稱取2.0 g，將其置于具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml后密塞，測定其重量后實(shí)施超聲處置30 min，冷卻完全后繼續(xù)稱重，并添加50%甲醇來補(bǔ)足減失的重量，混勻并濾過,取續(xù)濾液2 ml用50%甲醇定容至5 ml量瓶，所得液體作為供試品溶液[5]。

2.2.3陰性對(duì)照溶液的制備 按照藥方組成說明制備沒有天麻存在的陰對(duì)照品，并按照“2.2.2”項(xiàng)下的方法制成沒有天麻的陰性對(duì)照溶液。

2.3專屬性試驗(yàn) 分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各10 μl，參照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定分析。結(jié)果供試品溶液與對(duì)照品溶液在相同位置都有色譜峰存在，而陰性對(duì)照溶液沒有相同的色譜峰，表明陰性對(duì)照對(duì)測定無干擾。色譜圖見圖1。

2.4線性關(guān)系考查 精密吸取天麻素對(duì)照品溶液(0.048 4 mg/ml)1、2、4、6和8 ml置10 ml量瓶中，加甲醇定容，搖勻，精密吸取20 μl，參照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定。以濃度(μg/ml)為橫坐標(biāo)，峰面積(A)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到天麻素線性回歸方程：Y=34 000X-3 545.3(r=0.999 6)，結(jié)果表明天麻素在4.84～38.72 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.天麻素

2.5精密度試驗(yàn) 精確吸取10 μl對(duì)照品溶液(濃度是48.4 μg/ml)，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)5次進(jìn)樣分析，測定峰面積，結(jié)果天麻素峰面積的RSD為0.6%，表明儀器的精密度符合要求。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 選取同一批號(hào)樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備得到溶液，每間隔2 h測定一次天麻素峰面積，共測定5次，其RSD值為0.4%，表明在8 h期間，溶液相對(duì)穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗(yàn) 選取5份同一批號(hào)的樣品，參照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定分析，結(jié)果5份樣品含量平均值是0.42 mg/粒，RSD值為1.2%，表明樣品的重現(xiàn)性良好。

2.8回收率試驗(yàn) 選取3批同一批號(hào)樣品，每份精密稱取2.0 g，將其置于具塞錐形瓶內(nèi)，分別精密加入天麻素對(duì)照品 1.728 88、2.161 10和2.593 32 mg(配成濃度為2.161 1 mg/ml的母液，精密加入0.8、1.0和1.2 ml)各3份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法配制供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定分析。結(jié)果平均回收率為96.84%，RSD為1.4%，見表1。

表1 回收率試驗(yàn)數(shù)據(jù)

2.9樣品測定 選用3批不同批號(hào)的天麻清腦膠囊，參照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測定分析，參照外標(biāo)法計(jì)算。結(jié)果3批樣品中天麻素的含量分別為0.30～0.44 mg/粒。3批樣品由9批天麻藥材制成，天麻中天麻素的含量為0.22%～0.32%，整體的轉(zhuǎn)移率都能夠超過80%。參照2015年版《中國藥典》一部中給出的要求，天麻素含量不能低于0.20%，用80.0%的轉(zhuǎn)移率來進(jìn)行分析可知，本品含天麻以天麻素計(jì)，應(yīng)不得少于0.26 mg/粒。測定結(jié)果見表2。

表2 樣品測定結(jié)果

3 討論

3.1流動(dòng)相的選擇 通過參考文獻(xiàn)的比較，試驗(yàn)了甲醇-冰醋酸-水[5]、乙腈-水[6]等多等種流動(dòng)相種類及流動(dòng)相比例，結(jié)果采用乙腈-0.05%磷酸(3∶97)作為流動(dòng)相具有更好的分離效果。

3.2提取方法的選擇 在天麻素的提取過程中，本試驗(yàn)考查了稀乙醇回流提取[4]等方法，發(fā)現(xiàn)回流提取相對(duì)超聲提取雜質(zhì)峰明顯增多，對(duì)天麻素的含量測定造成一定的干擾。此外，本試驗(yàn)還考查了不同提取時(shí)間對(duì)天麻素提取效果的影響，確定超聲提取30 min為本試驗(yàn)的提取方法。

本文建立的HPLC法可準(zhǔn)確測定出天麻清腦膠囊內(nèi)天麻素含量。此法測定操作便捷，重現(xiàn)效果極佳，可以作為天麻清腦膠囊中天麻素的含量測定方法。

1 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典(下冊(cè))[M].上海人民出版社,1977:315-317

2 楊世林,蘭進(jìn),徐錦堂. 天麻的研究進(jìn)展[J]. 中草藥,2000,31(1):66-69

3 杜偉鋒,陳琳,叢曉東,等.天麻化學(xué)成分及質(zhì)量控制研究進(jìn)展[J]. 中成藥,2011,33(10):1785-1787

4 中國藥典[S].一部.2015:58

5 章運(yùn)典,周里欣,陳洪英. RP-HPLC法同時(shí)測定天智顆粒中天麻素、梔子苷、蘆丁和黃芩苷[J]. 中成藥,2014,36(8):1670-1673

6 毛淑敏,閆永亮,王峰祥,等. 炮制對(duì)白花丹參飲片中丹參酮ⅡA和丹酚酸B的影響[J]. 山東科學(xué),2009,22(3):27-30