馬鴻杰　劉傳靈　黃秋茹　毛新

【摘要】 目的 研究分析注射用重組人干擾素α1 b（賽若金）溶解后生物學(xué)活性的穩(wěn)定性。方法 按

照《中國(guó)藥典》2015年版干擾素活性檢測(cè)第一法， 采用細(xì)胞病變抑制法（CPE）檢測(cè)溶解后的賽若金分別在4℃及25℃條件下放置不同時(shí)段的生物活性， 與標(biāo)準(zhǔn)品比較， 評(píng)估其溶解后的穩(wěn)定性。結(jié)果 4批次不同規(guī)格的賽若金經(jīng)4℃存放12、24、36、48 h后生物學(xué)活性相當(dāng)于0 h活性的93.93%～100.31%， 生物活性無(wú)明顯的下降， 相對(duì)穩(wěn)定。4批次不同規(guī)格的賽若金經(jīng)25℃存放12、24、36、48 h后生物學(xué)活性相當(dāng)于0 h活性的81.90%～100.46%， 生物活性有所波動(dòng)， 依舊在合格范圍內(nèi)。結(jié)論 賽若金溶解后性質(zhì)穩(wěn)定， 使用本品除了現(xiàn)配現(xiàn)用， 還可以提前溶解配制， 適當(dāng)條件下保存使用。

【關(guān)鍵詞】 注射用重組人干擾素；生物學(xué)活性；細(xì)胞病變抑制法；穩(wěn)定性

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.35.113

【Abstract】 Objective To study and analyze the activity stability of recombinant human interferon α1b for injection（Sinogen） after dissolution. Methods According to the first edition of Chinese Pharmacopoeia （2015 Edition） Interferon Activity Test， cytopathogenic effect （CPE） was used to detect the biological activity of Sinogen in different periods after being dissolved at 4 ℃ and 25 ℃ respectively， and they were compared with the standard， so as to assess its stability after dissolution. Results 4 batches of different specifications of Sinogen at 4 ℃ for 12， 24， 36， 48 h had biological activity equivalent to 93.93% ～ 100.31% at 0 h， no significant decrease in biological activity， and it is relatively stable. 4 batches of different specifications of Sinogen at 25 ℃ for 12， 24， 36， 48 h had biological activity equivalent to 81.90%～100.46% at 0 h， the biological activity fluctuates， but still in the qualified range. Conclusion After dissolution， Sinogen has stable properties， in addition to current use of this product， it can also be dissolved in advance， and stored under proper conditions.

【Key words】 Recombinant human interferon； Biological activity； Cytopathogenic effect； Stability

干擾素具有廣譜的抗病毒、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)活性， 賽若金是中國(guó)第一個(gè)采用中國(guó)人基因克隆和表達(dá)的干擾素[1-3]。α1b型基因工程干擾素廣泛應(yīng)用于治療病毒性感染的疾病以及腫瘤的生物治療， 該藥已被廣大的醫(yī)患人員所熟知[4， 5]。賽若金是深圳正中醫(yī)藥集團(tuán)深圳科興生物工程有限公司主要產(chǎn)品， 現(xiàn)有6種規(guī)格， 目前是全國(guó)規(guī)格最齊全的干擾素產(chǎn)品。本文就其溶解后在4℃ 和25℃存放不同時(shí)間后的活性加以檢測(cè)并對(duì)其穩(wěn)定性分析討論， 為醫(yī)護(hù)人臨床使用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料 干擾素：賽若金， 批號(hào)及規(guī)格（μg/支， 10 μg相當(dāng)于10萬(wàn) IU）：201703010（10 μg）、201703005（20 μg）、201703007（30 μg）、

201703006（40 μg）， 抽取量：8支/批（采用4批次不同規(guī)格的賽若金， 深圳科興生物工程有限公司）。

標(biāo)準(zhǔn)參考品：IFNα1b生物學(xué)活性測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品（購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院）， 批號(hào)為97/01。病毒株和細(xì)胞株：水泡性口炎病毒（VSV）（由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供）。細(xì)胞：人羊膜細(xì)胞（WISH）（購(gòu)自上海細(xì)胞研究所）。血清：胎牛血清（購(gòu)自IMMUNO PROBE）。培養(yǎng)基：RPMI Medium l640培養(yǎng)基（購(gòu)自GIBCO）。染色液：自配。細(xì)胞消化液：自配。脫色液：自配。穩(wěn)定性試驗(yàn)設(shè)備：2～8℃冰箱 ，（25±1）℃、CO2恒溫培養(yǎng)箱， 酶標(biāo)儀[6]。

1. 2 方法 本方法按照《中華人民共和國(guó)藥典》（2015版）三部3523干擾素生物活性測(cè)定法第一法：細(xì)胞病變抑制法測(cè)定（CPE）。

1. 2. 1 供試品溶液的制備 將批號(hào)為201703010（10 μg）、201703005（20 μg）、201703007（30 μg）、201703006（40 μg）4批樣品（8支/批）的供試品按照標(biāo)示量用無(wú)菌注射用水溶解， 用測(cè)定培養(yǎng)液稀釋成105 IU/ml。在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中， 每個(gè)稀釋度做2孔。在無(wú)菌條件下操作[7]。endprint

將批號(hào)為201703010（10 μg）、201703005（20 μg）、201703007

（30 μg）、201703006（40 μg）4批樣品（8支/批）無(wú)菌注射用水溶解， 混勻后分裝至小離心管， 分別在4℃ 條件下存放0、12、24、36、48 h；25℃條件下存放0、12、24、36、48 h。各取以上不同條件存放樣品一支， 用同樣的方法測(cè)定其生物活性。

1. 2. 2 生物活性檢測(cè) 根據(jù)干擾素可以保護(hù)人羊膜細(xì)胞免受水泡性口炎病毒破壞的作用， 賽若金采用CPE法分別測(cè)定， 用結(jié)晶紫對(duì)活細(xì)胞WISH細(xì)胞染色， 脫色后在波長(zhǎng)570 mm處測(cè)定其吸光度， 得到干擾素對(duì)WISH細(xì)胞的保護(hù)曲線[8， 9]。然后根據(jù)待測(cè)樣品不同稀釋度的保護(hù)能力， 計(jì)算干擾素活性。

主要步驟為：培養(yǎng)細(xì)胞-細(xì)胞傳代-鋪板（96孔細(xì)胞培養(yǎng)板）-加樣-攻擊病毒-染色-脫色-比色-結(jié)果計(jì)算[10]。

2 結(jié)果

4批次不同規(guī)格的賽若金經(jīng)4℃存放12、24、36、48 h后生物學(xué)活性相當(dāng)于0 h活性的93.93%～100.31%， 生物活性無(wú)明顯的下降， 相對(duì)穩(wěn)定。見表1。

4批次不同規(guī)格的賽若金經(jīng)25℃存放12、24、36、48 h后生物學(xué)活性相當(dāng)于0 h活性的81.90%～100.46%， 生物活性有所波動(dòng)， 依舊在合格范圍內(nèi)。見表2。

3 小結(jié)

將結(jié)果與溶解0 h（4℃和25℃）的比較， 對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。4批次不同規(guī)格的樣品經(jīng)4℃存放12、24、36、48 h后生物學(xué)活性相當(dāng)于0 h活性的93.93%～100.31%， 生物活性無(wú)明顯的下降， 相對(duì)穩(wěn)定。4批次不同規(guī)格的樣品經(jīng)25℃存放12、24、36、48 h后生物學(xué)活性相當(dāng)于0 h活性的81.90%～100.46%， 生物活性有所波動(dòng)， 依舊在合格范圍內(nèi)。

綜上所述， 4批次不同規(guī)格的樣品溶解后， 在同一存放條件下活性穩(wěn)定性基本相同。故初步認(rèn)為賽若金按照說(shuō)明書用注射用水溶解后， 在4℃或者25℃保存≤48 h可放心使用。

參考文獻(xiàn)

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[收稿日期：2017-08-30]endprint