李雪慧 丁現(xiàn)帥

(陜西漢江藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，陜西 漢中 723000)

烏洛托品，一種治療細(xì)菌性尿路感染用的藥物。烏洛托品本身無(wú)抗菌作用?？诜蘸蠼?jīng)腎排出，在酸性尿液中會(huì)分解為氨和甲醛，后者能有效地抑制G-細(xì)菌，特別是對(duì)大腸埃希氏菌(Escherichia coli)、產(chǎn)氣腸桿菌(Enterobacter aerogenes)和銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)有強(qiáng)大的抗菌作用。烏洛托品的合成過(guò)程，甲醛(37%水溶液)和過(guò)量的氨水，在38 ℃反應(yīng)3 h。反應(yīng)結(jié)束后，經(jīng)澄清，過(guò)濾，膜式蒸發(fā)(壓力9.806～9.866 kPa)兩次，濃縮液冷卻結(jié)晶，過(guò)濾，在150 ℃下干燥得成品。其中合成烏洛托品的主要原料甲醛為基因毒性物質(zhì)和致癌物。依據(jù)歐洲藥物管理局(EMA)和美國(guó)食品藥品管理局(FDA)相繼頒布了基因毒性物質(zhì)研究相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則，要求單個(gè)結(jié)構(gòu)不相關(guān)的基因毒性雜質(zhì)TTC為1.5 μg/d，烏洛托品最大日服用劑量為1 g，按照TTC和最大服用劑量計(jì)算出氯化芐限度應(yīng)為≤1.5×10-6。

圖1 烏洛托品反應(yīng)路線圖Fig 1 Synthetic route of Urotropine

1研究方案

參考HJ 601-2011《甲醛的測(cè)定，乙酰丙酮分光光度法》，配制一系列不同濃度的甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)定其吸光度，建立吸光度和甲醛濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

準(zhǔn)確稱取10 g烏洛托品加入115 mL的純化水，然后常壓蒸餾，蒸餾至100mL停止蒸餾，測(cè)定蒸餾出的水樣的吸光度，然后把吸光度的值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，得到樣品中甲醛的濃度，依據(jù)公式計(jì)算樣品中甲醛的含量。

2實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器

EV300 UV-Visible Spectrophotometer

2.2 溶液的配制

2.2.1甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

甲醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液S配制：吸取2.8 mL甲醛溶液(內(nèi)含甲醛36%～38%)，用水稀釋至1000 mL，搖勻。此溶液每毫升含1mg甲醛。

甲醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液S1配制：精密吸取1.0 mL甲醛標(biāo)準(zhǔn) 儲(chǔ)備液S1至100 mL容量瓶中，并用水稀釋至刻度(濃度10μg/mL)。

甲醛空白溶液：吸取甲醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液S1 0 mL用水稀釋至25 mL；

甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液1：吸取甲醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液S1 0.5 mL至100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度。(濃度為0.05μg/mL)

甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液2：吸取甲醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液S1 0.5 mL至25 mL容量瓶中,用水稀釋至刻度。(濃度為0.2μg/mL)；

甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液3：吸取甲醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液S1 1 mL至25 mL容量瓶中,用水稀釋至刻度。(濃度為0.4μg/mL)；

甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液4：吸取甲醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液S1 3 mL至25 mL容量瓶中,用水稀釋至刻度。(濃度為1.2μg/mL)；

甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液5：吸取甲醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液S1 5 mL至25 mL容量瓶中,用水稀釋至刻度。(濃度為2.0μg/mL)；

甲醛標(biāo)準(zhǔn)溶液6：吸取甲醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液S1 8 mL至25 mL容量瓶中,用水稀釋至刻度。(濃度為3.2μg/mL)；

2.2.2乙酰丙酮溶液配制

將50 g乙酸銨、6 mL 冰乙酸及0.5 mL 乙酰丙酮試劑溶于100 mL 水中。

2.2.3測(cè)試溶液配制

準(zhǔn)確稱取烏洛托品樣品10 g于蒸餾瓶中，加入115 mL純化水，常壓蒸餾，蒸餾出100 mL溶液后停止蒸餾。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

溶液顯色：上述溶液分別加入2.5 mL乙酰丙酮溶液，搖勻。于60 ℃水浴中加熱15 min，取出放置至常溫。用紫外分光光度計(jì)在414 nm處，以甲醛空白溶液為參比測(cè)量吸光度。

以測(cè)得扣除空白溶液的標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)液溶液的甲醛濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

y=ax+b

式中：

y---標(biāo)準(zhǔn)溶液的校正吸光度；

x---標(biāo)準(zhǔn)溶液的甲醛濃度，μg/mL；

2.4 樣品溶液的吸光度測(cè)定

同法測(cè)定樣品溶液的吸光度。

2.5 樣品溶液中甲醛含量的計(jì)算

式中： X—樣品中甲醛含量，×10-6；

C—標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算的甲醛對(duì)應(yīng)濃度，μg/mL；

V—蒸餾液總體積， mL；

m—樣品稱樣量， g；

3研究數(shù)據(jù)

3.1 甲醛標(biāo)準(zhǔn)曲線

表1 甲醛濃度和吸光度關(guān)系Table 1 Formaldehyde concentration and absorbance

圖2 標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig 2 Standard curve

3.2 烏洛托品樣品中甲醛的檢測(cè)結(jié)果

表2 樣品吸光度和甲醛含量Tab.2 Sample absorbance and formaldehyde content

4研究結(jié)論

通過(guò)以上研究，6批烏洛托品樣品中甲醛均小于0.5×10-6。應(yīng)用本方法測(cè)定藥品或化工原料中的甲醛含量需要滿足以下2個(gè)條件：(1)被測(cè)物品沸點(diǎn)高于150 ℃；(2)被測(cè)物品的懸濁液在100 ℃蒸餾時(shí)，被測(cè)物不與水、甲醛反應(yīng)，不會(huì)衍生化。

[1] HJ 601-2011 水質(zhì) 甲醛的測(cè)定 乙酰丙酮分光光度法