羅霜 劉進(jìn) 趙強(qiáng) 程書文

(成都市第五人民醫(yī)院腦外科，四川 成都 611130)

白細(xì)胞介素-33(interleukin-33, IL-33)屬于IL-1家族成員，由多種細(xì)胞分泌，包括成纖維細(xì)胞、肥大細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、成骨細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞等。通過與其受體白介素1受體樣1(interleukin-1 receptor like-1, ST2)結(jié)合，在多種疾病，包括腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用[1-2]。研究顯示，腦膠質(zhì)瘤中IL-33 mRNA和蛋白高表達(dá)，高表達(dá)IL-33的患者更易發(fā)展為Ⅲ～Ⅳ級腦膠質(zhì)瘤并具有更短的生存期[3-4]。誘導(dǎo)IL-33的表達(dá)可促進(jìn)大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長、遷移，并調(diào)節(jié)一系列膠質(zhì)瘤相關(guān)的生長因子和趨化因子的表達(dá)[5]。然而，關(guān)于ST2 mRNA在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)變化，迄今未見文獻(xiàn)報道。本研究運(yùn)用實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction, PCR)檢測腦膠質(zhì)瘤中ST2 mRNA表達(dá)水平，并分析其與臨床病理分級的相關(guān)性。

一、材料與方法

1.組織標(biāo)本: 收集我院腦外科手術(shù)切除腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本54例，所有樣本均經(jīng)組織病理學(xué)確診。其中男32例，女22例，平均年齡(43.4±15.7)歲；臨床病理分級：Ⅰ～Ⅱ級29例，Ⅲ～Ⅳ級25例。同時期收集到我院腦外科就診的腦外傷患者手術(shù)切除樣本作為對照，共28例，男17例，女11例，平均年齡(42.4±11.4)歲。

2.主要試劑和儀器: TRNzol總RNA提取試劑、cDNA第一鏈合成試劑盒和SYBR Green均購自天根生化科技(北京)有限公司。ABI 7500實(shí)時熒光定量PCR儀為美國ABI公司產(chǎn)品。

3.實(shí)時熒光定量PCR檢測ST2 mRNA表達(dá)：參照文獻(xiàn)[6-7]進(jìn)行定量PCR分析。采用TRNzol法提取腦膠質(zhì)瘤組及對照組中總RNA，按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書操作，獲得cDNA。參照文獻(xiàn)[8]合成下列引物：ST2，上游：5'-GGCACA CCGTAAGACTAAGTAG-3'，下游：5'-CAATTTAAGCAGCA GAGAAGCTCC-3'； β-actin，上游：5'-CCCAGCCATGTACGTTGC TAT-3'，下游：5'-TCACCGGAGTCCA TCACGAT-3'。反應(yīng)體系如下：SYBR Green (2×) 5 μL，上、下游引物(10 μM)各0.1 μL，cDNA模板1.0 μL，無RNA酶水補(bǔ)足體積10 μL。反應(yīng)條件如下：95 ℃ 1 min，95 ℃ 5 s，60 ℃ 34 s，共40個循環(huán)，最后95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 15 s收集熒光信號進(jìn)行熔解曲線分析。每個樣本設(shè)3個復(fù)孔，以β-actin作為內(nèi)對照，采用2-ΔCt法進(jìn)行相對定量。

4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析: 數(shù)據(jù)采用中位數(shù)(最小值～最大值)表示，運(yùn)用SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)軟件包處理數(shù)據(jù)，腦膠質(zhì)瘤組織和對照組ST2 mRNA表達(dá)變化比較采用秩和檢驗(yàn)。以P<0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

腦膠質(zhì)瘤組和對照組中ST2 mRNA表達(dá)變化：腦膠質(zhì)瘤組中ST2 mRNA表達(dá)量中位數(shù)為[中位數(shù)為0.77(0.01～4.80)]，明顯高于在對照組中的表達(dá) [中位數(shù)為0.13(0.01～3.98)]，由于數(shù)據(jù)呈非正態(tài)分布，采用秩和檢驗(yàn)，結(jié)果顯示兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.02<0.05)。不同臨床病理分級腦膠質(zhì)瘤組織中ST2 mRNA表達(dá)變化。III～I(xiàn)V級腦膠質(zhì)瘤組織中ST2 mRNA表達(dá)中位數(shù)為[n=25，1.03(0.02～4.80)]，明顯高于I～I(xiàn)I級中的表達(dá) [n=25，0.34(0.01～3.51)]，兩組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.02<0.05)。

三、討論

ST2是IL-1受體(IL-1R)超家族成員之一，與其它IL-1R結(jié)構(gòu)類似，具有toll樣結(jié)構(gòu)域，主要表達(dá)于淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、心肌細(xì)胞和腦膠質(zhì)細(xì)胞等。ST2以兩種存在形式：可溶型和跨模型，參與炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)及腫瘤等多種病理學(xué)進(jìn)程。

關(guān)于ST2在腫瘤中的表達(dá)情況，文獻(xiàn)報道并不一致。白芳蕓等[9]運(yùn)用免疫組化和免疫印跡技術(shù)發(fā)現(xiàn)，胃癌中ST2蛋白表達(dá)明顯降低；臨床特征相關(guān)性分析顯示，分化程度越低、組織類型越晚的患者中ST2表達(dá)越低；有趣的是，與無轉(zhuǎn)移者相比，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者中ST2反而升高。然而，Bergis等[10]報道胃癌患者血清中可溶型ST2顯著增高，并與分化程度、臨床分期、組織分級和轉(zhuǎn)移狀態(tài)等有關(guān)。O'Donnell等[11]報道結(jié)腸癌患者中跨模型ST2表達(dá)明顯降低，結(jié)腸癌病理分級越高，跨模型ST2表達(dá)越低。最近，Zhang等[12]運(yùn)用免疫熒光技術(shù)發(fā)現(xiàn)，腦膠質(zhì)瘤組織中ST2蛋白表達(dá)明顯增加，敲低ST2的表達(dá)可減弱IL-33誘導(dǎo)的細(xì)胞侵襲和遷移作用。然而，ST2 mRNA在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)變化尚未見文獻(xiàn)報道。本研究采用實(shí)時熒光定量PCR定量檢測腦膠質(zhì)瘤中ST2 mRNA的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)ST2 mRNA在膠質(zhì)瘤組中的表達(dá)顯著高于對照組，并且，在病理III～I(xiàn)V級患者中的表達(dá)顯著高于I～I(xiàn)I級，提示ST2在腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展中扮演著較為重要的角色。本研究結(jié)果對腦膠質(zhì)瘤的惡性程度和預(yù)后評估具有一定的指導(dǎo)意義。

由于不同腫瘤中ST2表達(dá)差異，發(fā)揮的作用亦不相同。結(jié)腸癌中ST2表達(dá)下調(diào)，表現(xiàn)為抑癌基因的作用。體外體內(nèi)實(shí)驗(yàn)均證實(shí)，低表達(dá)ST2可促進(jìn)結(jié)腸癌生長、轉(zhuǎn)移和血管形成，而過表達(dá)ST2可抑制此過程，這一現(xiàn)象是ST2通過抑制IL-33誘導(dǎo)的血管發(fā)生、Th1和Th2反應(yīng)、巨噬細(xì)胞浸潤和M2a極化實(shí)現(xiàn)的[11,13]。相反，乳腺癌、胃癌和肝癌等腫瘤中ST2表達(dá)上調(diào)，表現(xiàn)為癌基因的作用[10,14-15]。有文獻(xiàn)顯示，腦膠質(zhì)瘤中ST2在翻譯水平上高表達(dá)[12]，本研究從轉(zhuǎn)錄層面上證實(shí)，ST2 mRNA在腦膠質(zhì)瘤中表達(dá)增高，并與腫瘤分級有關(guān)。該研究結(jié)果提示，ST2可能在腦膠質(zhì)瘤的發(fā)病中發(fā)揮一定的免疫調(diào)節(jié)作用，為明確IL-33/ST2軸在腦膠質(zhì)瘤發(fā)病中的作用提供了理論基礎(chǔ)。至于其分子機(jī)制，有待進(jìn)一步探討。