黎明新，朱明艷，萬冰，王睿，馬佳

（沈陽醫(yī)學(xué)院附屬中心醫(yī)院檢驗科，遼寧 沈陽 110024）

不同方法篩查血液透析人群中丙型肝炎病毒感染結(jié)果的比較分析

黎明新，朱明艷*，萬冰，王睿，馬佳

（沈陽醫(yī)學(xué)院附屬中心醫(yī)院檢驗科，遼寧 沈陽 110024）

目的：探討在血液透析（HD）人群中采用不同方法對丙肝抗體（抗-HCV）檢測的靈敏度和特異性。方法：使用電化學(xué)發(fā)光法（ECLIA）和酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）篩查HD、非HD人群中丙型肝炎病毒（HCV）感染情況，用重組免疫印跡法（RIBA）對HCV感染進行確證試驗，評估上述方法的敏感性及特異性。并對82例選擇組（非HD患者，ECLIA檢測抗-HCV結(jié)果數(shù)值為30以下）進行相關(guān)檢測。結(jié)果：RIBA確認(rèn)HD組、非HD組陽性例數(shù)分別為23、46例。ECLIA檢測結(jié)果HD組為26例陽性、427例陰性，敏感性100%，特異性99.3%；非HD組53例陽性、3 320例陰性，敏感性100%，特異性99.8%；選擇組ECLIA檢測抗-HCV陽性82例，RIBA確認(rèn)結(jié)果63例陽性，19例陰性（假陽性），假陽性占總數(shù)的23.2%，無假陰性。ELISA方法檢測結(jié)果HD組為22例陽性、431例陰性，敏感性95.7%，特異性100%；非HD組為43例陽性、3 330例陰性，敏感性93.5%，特異性100%；選擇組ELISA法檢測抗-HCV陽性57例，陰性25例，RIBA確認(rèn)假陰性6例，假陽性1例，假陰性占總數(shù)的7.3%，假陽性占總數(shù)的1.2%。結(jié)論：在HD人群中進行HCV感染的篩查，ECLIA敏感性優(yōu)于ELISA，ECLIA用于透析患者抗-HCV初篩，可減少甚至杜絕交叉感染的機會。ELISA特異性優(yōu)于ECLIA，為提高HD人群HCV感染的診斷準(zhǔn)確性，特別是對于檢測結(jié)果在灰區(qū)范圍的患者，多種方法聯(lián)合檢測非常必要。

丙型肝炎病毒；血液透析；電化學(xué)發(fā)光法；酶聯(lián)免疫吸附試驗；重組免疫印跡法

臨床檢測方法，以期能明確檢出現(xiàn)有檢測條件下存在的大量隱性感染，從而減少或杜絕醫(yī)源性傳播。電化學(xué)發(fā)光法（electrochemiluminescence immunoassay，ECLIA）是一種將電化學(xué)發(fā)光與抗原抗體特異結(jié)合的免疫分析方法，目前臨床已廣泛用于HCV感染的篩查，對HD患者抗-HCV感染檢測的敏感性和特異性目前鮮見報道，本研究將在HD人群中對比評估ECLIA與酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）抗-HCV檢測的靈敏度和特異性，并結(jié)合重組免疫印跡（recombinant immunoblot assay，RIBA）方法對透析人群HCV感染狀況和檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性進行初步分析。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年8月至2014年9月遼寧省11家醫(yī)院血液凈化中心隨機收集的HD患者血清標(biāo)本共453例為透析組，其中男212例，女241例，平均年齡57.8歲；選擇隨機收集的2014年7月我院門診和住院治療的非HD患者血清標(biāo)本3 373例為非透析組，其中男1 708例，女1 665例，平均年齡56.2歲；并同時選擇2014年4月至8月我院門診和住院治療的非HD患者經(jīng)ECLIA法初篩抗-HCV陽性并且其抗-HCV ECLIA檢測結(jié)果數(shù)值在30以下的血清標(biāo)本82例為選擇組，并按檢測結(jié)果由低到高分成3組，a組S/CO 1.0～10為32例，b組S/CO 10.1～20為30例，c組S/CO 20.1～30為20例。

1.2 方法

1.2.1 儀器試劑 ELISA抗-HCV檢測試劑盒（北京現(xiàn)代高達(dá)生物制劑有限公司），E170全自動ECLIA分析儀及配套抗-HCV試劑盒（德國Roche公司），RIBA試劑盒（德國mikrogen公司），Lightcycler型PCR擴增儀（德國Roche公司），HCV-RNA檢測試劑盒（中山大學(xué)達(dá)安基因有限公司）。

1.2.2 方法 每例患者的血清標(biāo)本收集時均分成4份，-20℃冰凍保存。透析組和非透析組血清標(biāo)本均首先用ECLIA法進行抗-HCV檢測，結(jié)果判斷以S/CO（臨界值）≥1.0為陽性，S/CO＜1.0為陰性。選擇組經(jīng)ECLIA法初篩抗-HCV陽性并且S/CO檢測結(jié)果數(shù)值均在30以下。對上述各組標(biāo)本均再用ELISA（結(jié)果判斷S/CO≥1.0為陽性，S/CO＜1.0為陰性）和PCR（HCV-RNA＞1 000拷貝/ml判定為陽性）進行同步檢測，對ELISA和ECLIA檢測結(jié)果不一致的標(biāo)本用RIBA試驗（通過顯色帶判斷，可為陽性、臨界值或為陰性，對疑似病例或假陽性者多用此法做鑒別確診）進行確認(rèn)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 20.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，計數(shù)資料比較采用卡方檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 透析組、非透析組血清抗-HCV檢測結(jié)果 透析組和非透析組采用3種方法行血清抗-HCV檢測結(jié)果見表1。

表1 ECLIA和ELISA方法對透析組和非透析組抗-HCV檢測結(jié)果

2.2 ECLIA和ELISA法對透析組、非透析組血清抗-HCV檢測的靈敏度和特異性比較 透析組ECLIA和ELISA法間靈敏度、特異性比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=2.25，P＞0.05）；非透析組ECLIA和ELISA法間靈敏度、特異性比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=8.1，P＜0.05），見表2。

表2 2種方法對透析組和非透析組血清抗-HCV檢測的靈敏度和特異性

2.3 選擇組（非透析患者）各分組ECLIA和ELISA法對血清抗-HCV檢測結(jié)果 選擇組82例，ECLIA檢測抗-HCV陽性82例，RIBA確認(rèn)結(jié)果63例陽性，19例陰性（假陽性），假陽性占總數(shù)的23.2%，無假陰性；ELISA法檢測抗-HCV陽性57例，陰性25例，RIBA確認(rèn)假陰性6例，假陽性1例，假陰性占總數(shù)的7.3%，假陽性占總數(shù)的1.2%。見表3。

表3 選擇組各分組不同方法抗-HCV檢測結(jié)果

2.4 透析組、非透析組和選擇組血清PCR檢測結(jié)果 透析組、非透析組和選擇組PCR陽性結(jié)果顯著低于確認(rèn)的丙肝結(jié)果，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，見表4。

表4 透析組、非透析組和選擇組血清PCR檢測結(jié)果

3 討論

HCV是一種單鏈RNA病毒，主要通過血源性傳播（如輸血、血制品、注射、器官移植、血液透析傳播等）、性傳播以及母嬰傳播。自1989年人類首次識別HCV以來，全世界已有1.7億患者感染HCV，感染率約在3%左右，每年的新發(fā)病例也接近400萬。由于HCV感染率較高，早期又缺乏特異性的臨床癥狀，因此定期的實驗室檢查是及時發(fā)現(xiàn)HCV感染的主要方法。HD是維持腎衰等終末期腎臟疾病患者生命的重要治療方法。但是，由于長期的透析治療造成患者免疫力低下，使得HD患者成為丙肝的高發(fā)人群，在HD患者中，HCV感染的篩查尤其值得重視?？?HCV檢測被廣泛應(yīng)用于HCV感染的診斷，本文采用ECLIA和ELISA對非透析患者和透析患者樣本抗-HCV檢測結(jié)果進行對比分析，并結(jié)合RIBA和PCR的檢測結(jié)果對透析患者的HCV的感染情況和如何提高HCV診斷的準(zhǔn)確性作以探討。

3.1 透析組和非透析組丙肝患病率比較 透析組丙肝患病率為5.1%，非透析組為1.4%，透析組患病率比非透析組高，與其他學(xué)者的研究結(jié)果［4］一致，認(rèn)為由于維持性HD患者機體免疫力低下，并采取HD特殊治療方法，更易受到威脅有關(guān)［5］，據(jù)報道透析每增加100次，感染HCV的危險增加6.1%［2］。

3.2 ECLIA和ELISA方法對抗-HCV檢測的敏感度、特異性、預(yù)測值 本研究結(jié)果顯示透析組及非透析組ECLIA敏感度均為100%，ELISA為95.7%和93.4%。ECLIA的特異性分別為99.3%和99.8%，ELISA的特異性均為100%。ECLIA和ELISA兩種方法的敏感性和特異性采用配對資料的卡方檢驗，結(jié)果透析組在ECLIA和ELISA方法對抗-HCV檢測的預(yù)測敏感度、特異性比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），非透析組兩種方法比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。需要指出的是，配對四格表資料的卡方檢驗，當(dāng)樣本總數(shù)（n=3 373）很大且a（46）和d（3 320）數(shù)字很大，b（7）和c（0）數(shù)值相對較小時，即使檢驗結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義，其實際意義也不大，非透析組屬于此種情況，因此，非透析組ECLIA和ELISA兩種方法對于抗-HCV檢測敏感性和特異性的實際意義上，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。李濤等［6］用ELISA和ECLIA兩種方法對非透析丙肝患者抗-HCV檢測的敏感度和特異性進行對比研究，結(jié)論是差異無統(tǒng)計學(xué)意義，本研究與其結(jié)果相似。因此，對于抗-HCV檢測，ECLIA和ELISA均是一種具有較高檢出率的初篩實驗方法。

3.3 ECLIA用于透析患者抗-HCV初篩，可減少甚至杜絕了交叉感染的機會 雖然ECLIA和ELISA兩種方法差異在統(tǒng)計學(xué)上無意義，但從本研究結(jié)果可以看出，透析組和非透析組ECLIA對抗-HCV檢測的陰性預(yù)測值均為100%，即陰性者中真陰性的比例是100%，而ELISA仍有一定比例的假陰性（透析組和非透析組ELISA對抗-HCV檢測的陰性預(yù)測值分別為99.8%和99.9%），此種情況在選擇組（ECLIA檢測數(shù)值在30以下）中表現(xiàn)的更為明顯，選擇組假陰性例數(shù)占總例數(shù)的百分比是7.3%。

對于特殊群體透析患者來說，現(xiàn)有研究證實采取隔離措施治療可明顯降低HCV感染［7］，因此初篩抗-HCV陽性患者已不是交叉感染主要威脅，初篩抗-HCV陰性，實際是假陰性未采取隔離的透析患者才是最大隱患，ECLIA對抗-HCV檢測的敏感度高于ELISA，敏感度越高的篩查性試驗，漏診率越低，ECLIA用于透析患者抗-HCV初篩，可減少甚至杜絕了交叉感染的機會。因此，本研究結(jié)果表明ECLIA法敏感度高并結(jié)合其線性范圍寬、快速、試劑穩(wěn)定、自動化程度高等優(yōu)點更適合用于抗-HCV篩查，特別對于HD患者抗-HCV篩查應(yīng)為首選方法。

3.4 用ECLIA檢測抗-HCV，檢測結(jié)果在臨界值附近范圍需特別謹(jǐn)慎 本研究結(jié)果顯示，透析組和非透析組ECLIA對抗-HCV檢測的陽性預(yù)測值分別為88.5%和86.8%，因此說明本法的陽性者中真陽性的比例分別為88.5%和86.8%，還有一定比例的假陽性存在。實驗結(jié)果顯示，假陽性結(jié)果主要在低值范圍，特別是在20以內(nèi)特異性較差，由于透析組陽性病例收集較少，為此在我院門診和住院非透析患者中選擇收集用ECLIA初篩抗-HCV陽性，檢測結(jié)果在30以內(nèi)患者血清82例（即選擇組）。將選擇組經(jīng)RIBA試驗確認(rèn)，a、b、c組分別有15、3、1例確認(rèn)為陰性（假陽性），占各組總數(shù)的百分比為46.9%（15/32）、10%（3/30）、5%（1/20），很明顯ECLIA檢測結(jié)果數(shù)據(jù)處于低值時，值越低假陽性所占百分比越高。選擇組的總假陽性例數(shù)占總例數(shù)的百分比是23.2%（19/82）。因此用ECLIA方法檢測抗-HCV，檢測結(jié)果在臨界值附近范圍需特別謹(jǐn)慎對待，可以結(jié)合其它篩查方法綜合判斷避免假陽性的出現(xiàn)。

3.5 用ECLIA檢測抗-HCV結(jié)果很低時，仍存在真陽性的可能 選擇組的a組中有4例ECLIA檢測結(jié)果為極低值（2.34、2.45、1.23、4.34），ELISA和PCR結(jié)果均為陰性，但RIBA確認(rèn)結(jié)果為陽性，為此，又重復(fù)做了一次RIBA確認(rèn)試驗，結(jié)果和首次結(jié)果一致，這個結(jié)果提示我們ECLIA結(jié)果低值而且是特別低，存在真陽性的可能，雖然低值區(qū)域假陽性出現(xiàn)率較高，但不能誤認(rèn)為陰性，有必要采取結(jié)合RIBA試驗來確認(rèn)結(jié)果。在透析人群中誤診假陰性可能會帶來潛在的感染源。

3.6 提高HCV-RNA的檢出率對于丙肝的早期診斷非常重要 本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)3組抗-HCV陽性檢出率均高于HCV-RNA檢出率。國內(nèi)外相關(guān)報道［8-11］亦有相似的結(jié)論，其原因：維持性HD患者出現(xiàn)間歇性病毒血癥，透析過程導(dǎo)致病毒顆粒破壞；抗-HCV出現(xiàn)假陽性，特別是自身免疫性疾病或高免疫球蛋白血癥患者可出現(xiàn)抗-HCV的假陽性；維持性HD患者腎臟清除率高，導(dǎo)致病毒載量水平低于檢測限；試驗因素影響和方法學(xué)的局限等。提高HCV-RNA的檢出率對于丙肝的早期診斷也是非常重要的。Shahzamani等［8］報道嵌合熒光法實時PCR的最低檢測濃度低于50 U/ml，靈敏度較目前臨床常規(guī)使用的熒光定量PCR高，并且檢測結(jié)果在1～2 h即可得出，適用于臨床中HD患者合并HCV感染患者的常規(guī)檢測。

綜上所述，用ECLIA對于抗-HCV檢測具有良好的靈敏度和特異性，ECLIA敏感性優(yōu)于ELISA，ECLIA用于透析患者抗-HCV初篩，可減少甚至杜絕了交叉感染的機會。ELISA特異性優(yōu)于ECLIA，為提高HD人群HCV感染的診斷準(zhǔn)確性，特別是對于檢測結(jié)果在灰區(qū)范圍的患者，多種方法聯(lián)合檢測非常必要。

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ComparingThreeScreeningMethodsofHCVInfectioninHemodialysisPatients

LI Mingxin，ZHU Mingyan*，WAN Bing， WANG Rui， MA Jia
（Department of Clinical Laboratory，The Central Hospital Affiliated to Shenyang Medical College， Shenyang 110024，China）

Objective：To investigate the sensitivity and specificity of different methods for detection of hepatitis C antibody（anti-HCV）in hemodialysis（HD）patients.Methods：Using ECLIA，ELISA to screen hepatitis C virus in dialysis patients（n=453）and non-dialysis patients（n=3 373），then the positive samples by recombinant immunoblot assay（RIBA）were confirmed to evaluate the sensitivity and specificity of the three examinations.The samples in select group（82 non-dialysis patients whose anti-HCV were positive but lower than 30）were also detected.Results：There were 23，46 cases of positive samples in dialysis group and non-dialysis group confirmed with RIBA.By ECLIA，26 in dialysis group were positive，427 were negative，the sensitivity was 100%and the specificity was 99.3%，and 53 in non-dialysis group were positive， 3 320 were negative，the sensitivity was 100%and the specificity was 99.8%.And 63 were positive confirmed by RIBA in select group，19 were negative，false positive rate was 23.2%，false negative rate was 0%.By ELISA，22 in dialysis group were positive，431 were negative，the sensitivity was 95.7%and the specificity was 100%，and 43 in non-dialysis group were positive，3 330 were negative，the sensitivity was 93.5%and the specificity was 100%.And 57 were positive by ELISA in select group，25 were negative as well，6 were false negative by RIBA，1 was false positive，false negative rate was 7.3%，false positive rate was 1.2%.Conclusions：ECLIA is more sensitive and specific than ELISA in screening HCV infection in hemodialysis patients，as a preliminary screening test，ELISA can reduce or eradicate HCV cross infection.To increase the diagnostic accuracy，especially to patients whose results are in grey area，combined detection of several methods is very necessary.

HCV；hemodialysis；electrochemiluminescence immunoassay；ELISA；recombinant immunoblot assay

R511.7

A

1008-2344（2017）06-0469-04

10.16753/j.cnki.1008-2344.2017.06.003

朱明艷（1970—），女（漢），主任檢驗技師，碩士，副教授，研究方向：病毒免疫和出凝血疾病檢驗與診斷.E-mail：zmy448800@163.com

2017-06-02

（文敏編輯）