陳倩娟

（譜尼測試（天津）科技有限公司，天津 300000）

丙硫菌唑是一種新型三唑硫酮類殺菌劑，主要用于防治由子囊菌、擔子菌以及半知菌引起的病害。近年來，丙硫菌唑在谷物、油菜籽和花生等農(nóng)產(chǎn)品中廣泛應(yīng)用。隨著丙硫菌唑的使用和推廣，國際食品法典委員會（CAC）、美國、歐盟、日本均規(guī)定了其在糧谷等作物中的限量。2017年6月18日實施的GB 2763—2016《食品安全國家標準 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》規(guī)定丙硫菌唑在大豆中最高殘留限量為1 mg/kg。甲氧咪草煙屬咪唑啉酮類高效除草劑，主要用于大豆田及花生田苗后除草，可有效除去大多數(shù)一年生禾本科雜草及闊葉雜草。GB 2763—2016規(guī)定甲氧咪草煙在大豆中最高殘留限量為0.1 mg/kg。目前關(guān)于丙硫菌唑和甲氧咪草煙還沒有統(tǒng)一的測定標準，本文建立了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）同時檢測黃豆中丙硫菌唑及甲氧咪草煙的方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

超高效液相色譜-串聯(lián)四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（Waters TQD），配有電噴霧離子源；電子天平，感量0.1mg；均質(zhì)器；高速離心機；水浴超聲提取器；XW-80A渦旋器；TG18-WS臺式離心機。

丙硫菌唑標準品(CAS：178928-70-6)；甲氧咪草煙標準品（CAS：178928-70-6）；乙腈、甲醇，均勻色譜純；氯化鈉、甲酸，均為優(yōu)級純；0.1%二甘醇（DEG）；水，符合GB/T6682規(guī)定的一級水。

1.2 樣品處理

取20 g粉碎后的黃豆試樣，按1:1比例加水，加入60 mL乙腈，9 500 r/min均質(zhì)2 min，抽濾后將濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗，分液漏斗內(nèi)加入7 g氯化鈉和10 mL 0.1 mol/L磷酸緩沖鹽溶液，充分混合后放置10 min，將下層水放出。將鹽析后的提取液加入0.1%DEG于40℃旋蒸濃縮至近干，用20%甲醇/丙酮定容至10 mL，用Envi-Carb/DSC-SAX柱凈化，凈化液加入1 mL 0.1%的DEG，40℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，2 mL甲醇定容，LC-MS/MS測定。

1.3 色譜質(zhì)譜條件

1.3.1 色譜條件

Waters BEH-C18柱（100 mm×2.1 mm×1.7 μm）；流動相：A液為乙腈，B液為0.1%甲酸溶液，梯度洗脫，洗脫程序見表1；柱溫：40℃;進樣量：10 μL，流速：0.2 mL/min。

表1 液相色譜梯度洗脫程序

1.3.2 質(zhì)譜條件

ESI源；多反應(yīng)監(jiān)測；毛細管電壓：3.5 kV；離子源溫度：150℃；脫溶劑氣及錐孔氣：N2；脫溶劑氣溫度：400℃；脫溶劑氣流量：800 L/h；錐孔氣流量：150 L/h；碰撞氣：高純氬氣；保留時間、監(jiān)測離子對、錐孔電壓及碰撞能量見表2。

表2 甲氧咪草煙和苯硫菌唑質(zhì)譜采集參數(shù)

1.4 定性測定

試樣中目標化合物色譜峰的保留時間與相應(yīng)標準色譜峰的保留時間相比較，變化范圍應(yīng)在±2.5%之內(nèi)。待測化合物的質(zhì)譜定性離子必須出現(xiàn)，至少應(yīng)包括1個母離子和2個子離子，且樣品中目標化合物的2個子離子的相對豐度比應(yīng)符合表3。

表3 定性時相對離子豐度的最大允許偏差

2 結(jié)果與分析

2.1 母離子和子離子的選擇

采用針泵流動注射進樣，離子源為電噴霧電離源（ESI源），在多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM）下對甲氧咪草煙及丙硫菌唑的質(zhì)譜條件進行優(yōu)化，錐孔電壓及碰撞能量的優(yōu)化結(jié)果見表2。甲氧咪草煙在進入一級質(zhì)譜后，在正離子掃描模式下，產(chǎn)生穩(wěn)定的［M]+分子離子峰，即質(zhì)荷比（m/z）為 306.14，［M]+離子作為甲氧咪草煙的母離子產(chǎn)生有顯著豐度的m/z為69.07及86.12碎片離子。丙硫菌唑在負離子掃描模式下，產(chǎn)生穩(wěn)定的［M－H]-準分子離子峰，即m/z為342.04；丙硫菌唑在碎片離子掃描方式下，以［M－H]-負離子作為丙硫菌唑的母離子，產(chǎn)生m/z為99.91、125.034、264.2等碎片離子。甲氧咪草煙和丙硫菌唑多反應(yīng)監(jiān)測色譜圖分別見圖1、圖2。

圖1 甲氧咪草煙多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）色譜圖

圖2 丙硫菌唑多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）色譜圖

圖3 甲氧咪草煙和丙硫菌唑標準曲線

2.2 提取條件的選擇

甲氧咪草煙和丙硫菌唑都易溶于乙腈、丙酮、乙酸乙酯等有機試劑，通過試驗發(fā)現(xiàn)乙腈提取后峰形及回收率均較好，因此在提取過程中使用乙腈作為提取液，再采用氯化鈉鹽析除蛋白，用Envi-Carb/DSC-SAX柱凈化，將流動相按不同比例在色譜柱上進行試驗，最終確定采用梯度洗脫方式可有效分離待測物，洗脫程序見上頁表1。在此條件下測得的待測物的峰形對稱，基線平穩(wěn)，并且分析時間較短。

2.3 分析方法的線性范圍

將甲氧咪草煙和丙硫菌唑標準溶液在上述色譜操作條件下進行分析，進樣液質(zhì)量濃度分別為20 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L、400 μg/L，分別以甲氧咪草煙和丙硫菌唑質(zhì)量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，分別得甲氧咪草煙的線性方程為y=1 129x-1 521，相關(guān)系數(shù)為0.999 9；丙硫菌唑的線性方程為y=3.09 9x-12.30，相關(guān)系數(shù)為0.999 8。甲氧咪草煙和丙硫菌唑標準曲線見圖3，線性相關(guān)結(jié)果見表4。

表4 甲氧咪草煙和丙硫菌唑的線性相關(guān)結(jié)果

2.4 定量限

以空白樣品基質(zhì)稀釋標準曲線上的最低濃度出峰時，取信噪比S/N=10和樣品處理過程的稀釋倍數(shù)計算得出定量限（LOQ）。稱樣量為20 g，最后定容體積為2 mL時所對應(yīng)的定量限分別為0.1 mg/kg、1.0 mg/kg。

2.5 精密度和準確度試驗

在陰性黃豆樣品中添加2個濃度水平的甲氧咪草煙和丙硫菌唑標準液，按上述前處理方法進行處理，做回收試驗，每個水平重復(fù)6次，精密度結(jié)果見第49頁表5。甲氧咪草煙和丙硫菌唑在黃豆中添加回收率在77.3%～84.7%之間，相對標準偏差（RSD）均小于1.0%。

3 結(jié)論

本方法可對黃豆中甲氧咪草煙和丙硫菌唑殘留量在定性測定的同時進行定量測定。試驗結(jié)果表明，本方法前處理操作簡便、精密度和準確度較高，分析時間短、線性關(guān)系良好，具有簡便、快速、準確及分離效果好的優(yōu)點。

表5 黃豆中甲氧咪草煙和丙硫菌唑殘留量回收率和精密度試驗結(jié)果

［1］白雪，周成合，米佳麗.三唑類化合物研究與應(yīng)用［J］.化學研究與應(yīng)用，2007，19（7）：721-729.

［3］劉長令.世界農(nóng)藥大全:殺菌劑卷［M］.北京:化學工業(yè)出版社，2006.