蔡創(chuàng)威，黃曉月，聶芳紅,*，徐德峰,2,3,*，郝江偉

（1.廣東海洋大學(xué)食品科技學(xué)院，廣東省水產(chǎn)品加工與安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東省海洋食品工程技術(shù)研究中心，水產(chǎn)品深加工廣東普通高等學(xué)校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 湛江 524088；2.華南理工大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，廣東 廣州 510640；3.無限極（中國）有限公司技術(shù)中心，廣東 廣州 510665）

液態(tài)發(fā)酵多糖對小鼠若干行為學(xué)指標(biāo)及免疫器官指數(shù)的影響

蔡創(chuàng)威1，黃曉月1，聶芳紅1,*，徐德峰1,2,3,*，郝江偉1

（1.廣東海洋大學(xué)食品科技學(xué)院，廣東省水產(chǎn)品加工與安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東省海洋食品工程技術(shù)研究中心，水產(chǎn)品深加工廣東普通高等學(xué)校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 湛江 524088；2.華南理工大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，廣東 廣州 510640；3.無限極（中國）有限公司技術(shù)中心，廣東 廣州 510665）

為評價蟲草菌（Cordyceps sinensis）CAMT 63341液態(tài)發(fā)酵多糖對小鼠生長、情緒、認(rèn)知和免疫的影響，將60 只健康雄性昆明小鼠隨機(jī)分成空白對照、靈芝多糖對照和Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵多糖高、中、低劑量飼喂組連續(xù)喂養(yǎng)30 d，然后行高架十字迷宮、穿梭箱、遲發(fā)型超敏反應(yīng)實(shí)驗(yàn)，并記錄小鼠體質(zhì)量和免疫器官指數(shù)。結(jié)果表明：與空白對照組相比，Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵多糖可劑量依賴性促進(jìn)小鼠生長，增加高架迷宮開放臂次數(shù)和延長停留時間，增強(qiáng)穿梭箱實(shí)驗(yàn)中主動回避能力和縮短被動回避潛伏期，提升胸腺和脾臟器官指數(shù)，其中，高劑量組達(dá)到顯著（P＜0.05）或極顯著水平（P＜0.01），接近靈芝多糖對照組，提示Cordyceps sinensis CAMT 63341液態(tài)發(fā)酵多糖具有一定的促進(jìn)生長、改善情緒、增強(qiáng)認(rèn)知和提升免疫功能。

Cordyceps sinensis CAMT 63341；液態(tài)發(fā)酵；多糖；情緒；認(rèn)知；免疫

冬蟲夏草是由麥角科真菌冬蟲夏草菌（Cordyceps sinensis（Berk.）Sacc.）侵染蝙蝠蛾科昆蟲幼蟲而形成的僵蟲與子座的結(jié)合體。作為我國傳統(tǒng)的滋補(bǔ)性中藥材，冬蟲夏草具有多種藥理功效，《中華人民共和國藥典》中指出冬蟲夏草性平、味甘，歸肺、腎經(jīng)，具補(bǔ)肺益腎、止血化痰功能，主治久咳虛喘、勞嗽咯血、陽痿遺精、腰膝酸痛[1]。除此之外，現(xiàn)代研究證明冬蟲夏草還具有抗腫瘤、抗細(xì)菌、抗病毒、抗炎、抗纖維化、護(hù)肝、調(diào)節(jié)免疫和內(nèi)分泌等多種藥理作用[2-4]。鑒于冬蟲夏草對人體獨(dú)特的生理活性，國內(nèi)外需求量不斷增加，但冬蟲夏草多分布在我國西藏、青海、云南、四川等海拔3 500 m以上的高寒地帶，受生長環(huán)境的制約，天然蟲草產(chǎn)量有限，加之過度采挖，導(dǎo)致其產(chǎn)量逐年銳減，遠(yuǎn)低于市場需求，因此培育開發(fā)功效顯著的冬蟲夏草代用品既是保護(hù)野生蟲草資源，又是科學(xué)開發(fā)利用功效組分的必然選擇。目前，在分離天然蟲草內(nèi)生優(yōu)良菌株的基礎(chǔ)上，采用仿生手段人工接種柞蠶、工廠化栽培和菌絲體液態(tài)發(fā)酵是大規(guī)模獲取蟲草活性物質(zhì)的主要方式，且多項(xiàng)研究證實(shí)，人工蟲草在化學(xué)成分、功效價值等方面與天然蟲草無顯著差異。錢正明等[5]建立了冬蟲夏草中7 類主要化學(xué)成分的分析方法，比較分析了培植冬蟲夏草和野生冬蟲夏草的化學(xué)成分，結(jié)果顯示兩者小分子化合物種類一致，多糖分子質(zhì)量分布一致。

從本質(zhì)上講，冬蟲夏草的功效歸因于體內(nèi)寄生菌的代謝產(chǎn)物?，F(xiàn)代分析表明，冬蟲夏草主要含有多糖、核苷、蛋白質(zhì)、肽、甾醇、酶等化學(xué)成分，而多糖作為生物活性成分之一，具有調(diào)節(jié)免疫、增強(qiáng)記憶、抗腫瘤、抗黏附、抗氧化、降血糖等活性[6-12]。液態(tài)發(fā)酵作為現(xiàn)代生物技術(shù)的重要組成部分，是將生物科技轉(zhuǎn)化為生物經(jīng)濟(jì)的重要手段，目前通過液態(tài)發(fā)酵制備蛹蟲草活性物質(zhì)已有較多報道，且證實(shí)發(fā)酵蛹蟲草菌絲體的有效成分、藥理作用及臨床效果與冬蟲夏草相似[13-17]。冬蟲夏草區(qū)系中的真菌物種是一類非常重要的生物資源，具有重要的開發(fā)潛力。本課題組前期從藏區(qū)冬蟲夏草中分離出一株真菌，經(jīng)形態(tài)、生理生化及分子鑒定為蟲草菌，本研究在Cordyceps sinensis CAMT 63341液態(tài)發(fā)酵制備生物多糖的基礎(chǔ)上，以小鼠為實(shí)驗(yàn)對象，通過經(jīng)典行為學(xué)實(shí)驗(yàn)，初步評估該菌株對小鼠生長、免疫、認(rèn)知和情緒的影響，為Cordyceps sinensis CAMT 63341菌種資源的開發(fā)利用提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 菌株與實(shí)驗(yàn)動物

Cordyceps sinensis CAMT 63341菌株分離自西藏天然蟲草子座；SPF級健康雌性昆明小鼠，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，動物合格證號：SCXK（粵）2013-0020。

1.2 材料與試劑

靈芝多糖（多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)3 3.2 5%） 杭州眾藝康菇生物技術(shù)有限公司；2,4-二硝基氯苯（2,4-dinitrofluorobenzene，DNFB） 北京索萊寶科技有限公司。

1.3 儀器與設(shè)備

小鼠穿梭箱 上海多毅實(shí)業(yè)有限公司；THZ-82型水浴恒溫振蕩器 江蘇金壇市榮華儀器制造有限公司；BS224S電子天平 賽多利斯（北京）科學(xué)儀器有限公司；4120型手握打孔器 無錫亞美科技有限公司。

1.4 方法

1.4.1 Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵粗多糖的提取

Cordyceps sinensis CAMT 63341保存于PDA斜面培養(yǎng)基，常規(guī)PDA轉(zhuǎn)接活化后，以馬鈴薯汁作為培養(yǎng)基[16-17]，28 ℃、150 r/min培養(yǎng)72 h制得發(fā)酵液，發(fā)酵液經(jīng)5 000 r/min離心10 min取上清液，之后按體積比1∶3加入預(yù)冷至4 ℃的95%乙醇靜置12 h，8 000 r/min離心10 min取沉淀作為發(fā)酵粗多糖，苯酚-硫酸法測定多糖含量為30.23%。

1.4.2 動物分組及給藥

動物飼養(yǎng)條件：室溫（22±2）℃，相對濕度40%～60%，自然晝夜交替，飼料來源于廣州中醫(yī)藥大學(xué)，適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，選取體質(zhì)量（22±2）g小鼠60 只進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)，分為5 個實(shí)驗(yàn)組，每組12 只，空白對照組用蒸餾水作為飲用水；高、中、低劑量組分別自由飲用1.0、0.5、0.1 g/mL 1.4.1節(jié)所述粗多糖溶液，靈芝多糖對照組飲用1 g/mL靈芝多糖溶液，連續(xù)喂養(yǎng)小鼠30 d，對飲水量進(jìn)行量取記錄，統(tǒng)計每日每只小鼠的平均飲水量，換算成平均每只小鼠多糖攝入量。

1.4.3 動物行為學(xué)指標(biāo)測定

1.4.3.1 一般狀態(tài)觀察及體質(zhì)量變化

一般狀態(tài)觀察于每日飼喂多糖溶液前，仔細(xì)觀察小鼠的精神狀態(tài)、皮毛色澤、活動度及糞便情況，每隔10 d稱體質(zhì)量1 次并記錄數(shù)據(jù)，比較各組體質(zhì)量變化。

1.4.3.2 抗抑郁效果評價

采用經(jīng)典高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)方法[19-21]評價多糖對實(shí)驗(yàn)小鼠情緒的影響，小鼠高架十字迷宮由2 個相對的開放臂（45 cm×10 cm）、2 個相對閉合臂（45 cm×10 cm×50 cm）、一個連接4 只臂的中央平臺（10 cm×10 cm）組成，此二者互相垂直成為“十”形狀，迷宮離地面50 cm；人工記錄小鼠進(jìn)入開放臂次數(shù)、閉合臂次數(shù)和小鼠滯留在開放臂的時間、閉合臂的時間及小鼠進(jìn)入中央開闊平臺的次數(shù)、中央?yún)^(qū)停留時間。計算小鼠進(jìn)入開放臂的次數(shù)占進(jìn)入兩臂次數(shù)總和的比例和開放臂滯留總時間占在兩臂停留時間總和的比例。

1.4.3.3 認(rèn)知能力影響的評價

采用經(jīng)典小鼠穿梭箱實(shí)驗(yàn)考察多糖對小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響，將小鼠放入穿梭箱，根據(jù)參考文獻(xiàn)[22-23]和儀器說明書設(shè)定追蹤參數(shù)：適應(yīng)時間5 s、訓(xùn)練次數(shù)10 次、間隔時間3 s、聲光刺激5 s、電擊時間10 s。全部訓(xùn)練結(jié)束，對小鼠在穿梭箱內(nèi)的活動軌跡進(jìn)行分析，求得小鼠穿梭箱主動逃避次數(shù)、被動逃避次數(shù)、主動逃避時間、被動逃避時間。連續(xù)進(jìn)行5 d穿梭箱實(shí)驗(yàn)，記錄分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1.4.3.4 對免疫器官影響的評價

采用遲發(fā)性免疫反應(yīng)和測定免疫器官指數(shù)，考察多糖對小鼠免疫器官的影響。遲發(fā)型超敏反應(yīng)參照文獻(xiàn)[24-27]進(jìn)行，用電動剃毛器對喂養(yǎng)了一個月后的小鼠背部進(jìn)行除毛，1% DNFB丙酮溶液作為致敏劑均勻涂抹于脫毛部位，每日1 次，連續(xù)4 d，之后致敏劑10 μL均勻涂于左耳，24 h后處死小鼠，剪取左右兩只耳朵，用2 mm打孔器對兩耳朵的相同部位各取一耳片，稱質(zhì)量并計算兩耳片質(zhì)量的差值。免疫器官臟器指數(shù)測定參照文獻(xiàn)[25]進(jìn)行，解剖小鼠，取出其胸腺脾臟，分別對其稱質(zhì)量，按照下式計算出各組胸腺和脾臟指數(shù)。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

結(jié)果用 ±s表示，采用SPSS 16.0軟件中單因素方差分析程序進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)差異分析，采用最小顯著極差法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵多糖對小鼠生長情況的影響

表觀狀態(tài)可直觀反映出受試物對小鼠生長發(fā)育的影響，實(shí)驗(yàn)表明所有小鼠在喂養(yǎng)過程中進(jìn)食飲水正常，毛發(fā)濃密有光澤，活潑好動有活力，對外界刺激反應(yīng)靈敏，四肢有力，無死亡現(xiàn)象，證明蟲草、靈芝多糖對小鼠無表觀可見不良影響。由表1體質(zhì)量增加趨勢可以看出，與空白對照組相比，靈芝多糖對照組在整個實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)可促進(jìn)小鼠生長，在中后期達(dá)到顯著性水平（P＜0.05），Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵多糖也有促進(jìn)動物生長的作用，且整體呈劑量依賴性，其中高劑量組效果接近靈芝多糖組。

表1 Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵多糖對小鼠體質(zhì)量的影響Table 1 Effect of Cordyceps sinensis CAMT 63341 polysaccharides on body weight in mice

2.2 Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵多糖對實(shí)驗(yàn)小鼠情緒的影響

表2 Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵多糖對小鼠高架十字迷宮行為指標(biāo)的影響Table 2 Effect of Cordyceps sinensis CAMT 63341 on behavior performances of mice in elevated plus maze test

高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)廣泛應(yīng)用于檢測動物的抑郁行為和評價藥物的抗抑郁效果，以小鼠在開放臂中的滯留時間和進(jìn)入開放臂次數(shù)反映其抑郁狀態(tài)的強(qiáng)弱[18-19]。由表2可知，靈芝多糖對照組在進(jìn)入開放臂次數(shù)和中央?yún)^(qū)停留時間上顯著高于空白對照組（P＜0.05），Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵多糖組對小鼠抗抑郁效果存在劑量依賴性提高，其中高劑量組有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），其效果接近靈芝多糖組。郝文麗[28]研究表明，枸杞多糖對小鼠神經(jīng)系統(tǒng)有一定的影響，可以顯著抑制小鼠的自發(fā)性活動，延長戊巴比妥鈉的安眠作用時間，證明枸杞多糖具有一定抗焦慮效果，劉勐等[29]研究表明靈孢多糖具有一定的抗抑郁作用，而本研究進(jìn)一步證明所分離菌株的液態(tài)發(fā)酵多糖具有抗抑郁效果，豐富了多糖改善情緒的研究內(nèi)容。

2.3 Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵多糖對小鼠認(rèn)知能力的影響

基于穿梭箱聲光刺激的主動逃避和電擊的被動逃避已被廣泛用于評價小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，在一個訓(xùn)練周期內(nèi)，小鼠主動逃避時間（主動逃避潛伏期）和被動逃避時間（被動逃避潛伏期）越短，而主動和被動逃避次數(shù)越多，表明小鼠學(xué)習(xí)記憶能力越強(qiáng)[30]。聲、光、電刺激下的小鼠穿梭箱主動逃避和被動逃避實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖1～3。

圖1 Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵多糖對小鼠主動逃避次數(shù)的影響Fig. 1 Effect of Cordyceps sinensis CAMT 63341 polysaccharides on the number of active avoidance responses in mice

由圖1可知，在為期5 d的學(xué)習(xí)記憶訓(xùn)練中，小鼠主動逃避次數(shù)逐漸增加，表明實(shí)驗(yàn)小鼠對逃避不利刺激獲得了記憶，實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)主動逃避次數(shù)反映了記憶速率和正確率。至第5天，在記憶速率和正確率上所有多糖組都比空白對照組高，其中靈芝多糖對照組小鼠主動逃避次數(shù)最多，與空白對照組相比存在顯著性差異（P＜0.05），Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵多糖飼喂組可劑量依賴性提升小鼠記憶能力，高劑量組與空白對照組相比也存在顯著性差異（P＜0.05），且效果僅次于靈芝多糖對照組。

圖2 Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵多糖對小鼠在穿梭箱中被動逃避電擊次數(shù)的影響Fig. 2 Effect of Cordyceps sinensis CAMT 63341 polysaccharides on the number of passive avoidance responses to electronic shock in mice

被動逃避能力進(jìn)一步反映了小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，可由逃避前電擊時間和逃避次數(shù)定量表述，一定實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)電擊時間越短、逃避次數(shù)越多，表明動物記憶能力越強(qiáng)[31]。由圖2可知，各組小鼠5 d內(nèi)被電擊次數(shù)都隨訓(xùn)練時間延長而減少，所有多糖組都比空白對照組被電擊次數(shù)少，Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵多糖高劑量組與靈芝多糖對照組被電擊次數(shù)最少。

圖3 Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵多糖對小鼠被電擊時間的影響Fig. 3 Effect of Cordyceps sinensis CAMT 63341 polysaccharides on electric shock time in mice

同時，實(shí)驗(yàn)各組的小鼠被電擊時間都隨著訓(xùn)練時間延長而不同程度減少（圖3），且所有多糖組都比空白對照組電擊時間短，其中靈芝多糖組電擊時間最短，Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵多糖高劑量組次之，定量分析表明第5天除低劑量組相比空白對照組未達(dá)到顯著性差異外，其余各組差異均達(dá)到顯著性（P＜0.05）。

2.4 Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵多糖對小鼠免疫器官指數(shù)的影響

表3 Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵多糖對小鼠免疫器官指數(shù)及兩耳質(zhì)量的影響（n＝ 12）Table 3 Effect of Cordyceps sinensis CAMT 63341 polysaccharides on immune organ indexes and weight difference between two ears in mice (n= 12)

小鼠免疫器官是免疫系統(tǒng)的重要組成部分，胸腺和脾臟指數(shù)是評價動物免疫功能的一項(xiàng)指標(biāo)[32]。由表3可知，所有多糖組相較空白對照組的小鼠胸腺和脾臟器官指數(shù)都有不同程度提升，且基本存在劑量依賴性，其中高劑量Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵多糖組的脾臟指數(shù)有顯著性提高（P＜0.05），接近靈芝多糖對照組。多項(xiàng)研究表明，蟲草多糖能夠增高小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)，減輕小鼠由藥物使用導(dǎo)致的免疫器官損傷，改善DNFB誘發(fā)的小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)[17,27,32]。遲發(fā)型超敏反應(yīng)以T淋巴細(xì)胞為免疫應(yīng)答的超敏反應(yīng)，反映其T細(xì)胞的功能，被攻擊的小鼠耳廓腫脹程度與T細(xì)胞功能強(qiáng)弱呈正相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)用DNFB致敏劑涂抹小鼠，使其刺激T淋巴細(xì)胞增殖、分化，產(chǎn)生免疫應(yīng)答，結(jié)果顯示所有多糖組的小鼠左右兩耳片質(zhì)量差值顯著高于空白對照組（P＜0.05），且高劑量Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵多糖組和靈芝多糖對照組差異達(dá)到極顯著水平（P＜0.01），整體上反映了Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵多糖具有一定的免疫調(diào)節(jié)作用。

3 討 論

已有的研究充分表明，冬蟲夏草對人體具有多重生理活性，但天然的資源遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于市場需求，目前菌絲體液態(tài)發(fā)酵是大規(guī)模獲取蟲草活性物質(zhì)的主要方式。從本質(zhì)上講，冬蟲夏草的功效歸因于體內(nèi)寄生菌的代謝產(chǎn)物，多糖作為其生物活性成分之一，具有調(diào)節(jié)免疫、增強(qiáng)記憶、抗腫瘤、抗黏附、抗氧化、降血糖等活性[6-12]，但關(guān)于蛹蟲草多糖改善情緒和增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶的研究相對較少。因此，本研究在Cordyceps sinensis CAMT 63341前期液態(tài)發(fā)酵制備生物多糖的基礎(chǔ)上，重點(diǎn)評估了Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵多糖對小鼠情緒和認(rèn)知能力的影響，證明所得多糖不僅具有抗抑郁效果，而且可顯著提高小鼠學(xué)習(xí)記憶能力，拓寬了蟲草多糖的利用范圍，為Cordyceps sinensis CAMT 63341菌種資源的開發(fā)利用提供了參考。

情緒與學(xué)習(xí)記憶是腦的高級功能，其能力高低與機(jī)體免疫狀況密切相關(guān)，而且機(jī)體學(xué)習(xí)記憶能力障礙多與體內(nèi)炎癥因子調(diào)控失衡有關(guān)，降低機(jī)體炎癥因子水平可增強(qiáng)機(jī)體免疫能力[9,11,19]。遲發(fā)型超敏反應(yīng)和免疫器官指數(shù)作為衡量機(jī)體免疫水平的整體指標(biāo)具有簡便直接的優(yōu)點(diǎn)，是目前研究和評價機(jī)體免疫狀況的基本指標(biāo)。多項(xiàng)研究表明，蟲草多糖能夠增高小鼠脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)，減輕小鼠由藥物使用導(dǎo)致的免疫器官損傷，改善DNFB誘發(fā)的小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)[17,27,32]，本研究結(jié)果進(jìn)一步顯示Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵多糖組的小鼠左右兩耳片質(zhì)量差值顯著高于空白對照組，且高劑量組達(dá)到極顯著水平，整體上反映了所得蟲草多糖具有一定的免疫調(diào)節(jié)作用。鑒于免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)的復(fù)雜性，為探討學(xué)習(xí)記憶及情緒能力與免疫因子間的相關(guān)性，揭示Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵多糖腦保健功效的生理生化機(jī)制，需進(jìn)一步深入研究具體免疫因子與多糖攝入間的劑量-反應(yīng)關(guān)系，構(gòu)建起多糖攝入-免疫水平-宏觀行為學(xué)間的內(nèi)在聯(lián)系。

Cordyceps sinensis CAMT 63341發(fā)酵多糖可促進(jìn)小鼠生長，提高小鼠免疫能力，改善小鼠焦慮情緒，提升小鼠認(rèn)知能力，有進(jìn)一步開發(fā)利用的潛力。

[1] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(一部)[M]. 北京: 中國醫(yī)藥科技出版社, 2015: 115.

[2] SHASHIDHAR M G, GIRIDHAR P, SANKAR K U, et al. Bioactive principles from Cordyceps sinensis: a potent food supplement: a review[J]. Journal of Functional Foods, 2013, 5(3): 1013-1030.DOI:10.1016/j.jff.2013.04.018.

[3] CHEN X, WANG S A, NIE S P, et al. Properties of Cordyceps sinensis: a review[J]. Journal of Functional Foods, 2013, 5(2): 550-569. DOI:10.1016/j.jff.2013.01.034.

[4] ZHAO K, LI Y J, GAO S, et al. Effect of Dongchongxiacao (Cordyceps)therapy on contrast-induced nephropathy in patients with type 2 diabetes and renal insuff i ciency undergoing coronary angiography[J].Journal of Chinese Traditional Medicine, 2015, 35(4): 422-427.DOI:10.1016/S0254-6272(15)30119-9.

[5] 錢正明, 李文慶, 孫敏甜, 等. 冬蟲夏草化學(xué)成分分析[J]. 菌物學(xué)報,2016, 35(4): 476-490. DOI:10.13346/j.mycosystema.160010.

[6] HUANG Q L, SIU K C, WANG W Q, et al. Fractionation,characterization and antioxidant activity of exopolysaccharides from fermentation broth of a Cordyceps sinensis fungus[J].Process Biochemistry, 2013, 48(2): 380-386. DOI:10.1016/j.procbio.2013.01.001.

[7] LU W J, CHANG N C, JAYAKUNAR T, et al. Ex vivo and in vivo studies of CME-1, a novel polysaccharide purif i ed from the mycelia of Cordyceps sinensis that inhibits human platelet activation by activating adenylate cyclase/cyclic AMP[J]. Thrombosis Research, 2014, 134(6):1301-1310. DOI:10.1016/j.thromres.2014.09.023.

[8] WU D T, MENG L Z, WANG L Y, et al. Chain conformation and immunomodulatory activity of a hyperbranched polysaccharide from Cordyceps sinensis[J]. Carbohydrate Polymers, 2014, 110(22): 405-414. DOI:10.1016/j.carbpol.2014.04.044.

[9] MENG L Z, FENG K, WANG L Y, et al. Activation of mouse macrophages and dendritic cells induced by polysaccharides from a novel Cordyceps sinensis fungus UM01[J]. Journal of Functional Foods, 2014, 9: 242-253. DOI:10.1016/j.jff.2014.04.029.

[10] YAN J K, WANG W Q, WU J Y. Recent advances in Cordyceps sinensis polysaccharides: mycelial fermentation, isolation, structure,and bioactivities: a review[J]. Journal of Functional Foods, 2014, 6:33-47. DOI:10.1016/j.jff.2013.11.024.

[11] ZHANG J L, YU Y C, ZHANG Z F, et al. Effect of polysaccharide from cultured Cordyceps sinensis on immune function and antioxidation activity of mice exposed to60Co[J]. International Immunopharmacology, 2011, 11(12): 2251-2257. DOI:10.1016/j.intimp.2011.09.019.

[12] XIANG F X, LIN L M, HU M, et al. Therapeutic eff i cacy of a polysaccharide isolated from Cordyceps sinensis on hypertensive rats[J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2016, 82:308-314. DOI:10.1016/j.ijbiomac.2015.09.060.

[13] CHEN X, WU J Y, GUI X T. Production and characterization of exopolysaccharides in mycelial culture of Cordyceps sinensis fungus Cs-HK1 with different carbon sources[J]. Chinese Journal of Chemical Engineering, 2016, 24(1): 158-162. DOI:10.1016/j.cjche.2015.06.016.

[14] WANG L Y, CHEONG K L, WU D T, et al. Fermentation optimization for the production of bioactive polysaccharides from Cordyceps sinensis fungus UM01[J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2015, 79: 180-185. DOI:10.1016/j.ijbiomac.2015.04.040.

[15] LIN S, LIU Z Q, BAKER P J, et al. Enhancement of cordyceps polysaccharide production via biosynthetic pathway analysis in Hirsutella sinensis[J]. International Journal of Biological Macromolecules, 2016, 92: 872-880. DOI:10.1016/j.ijbiomac.2016.08.002.

[16] 于幫紅, 徐慧, 張傳博. 一株冬蟲夏草來源真菌的鑒定及抑菌活性檢測[J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2016, 22(8): 36-41. DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2016080036.

[17] 萬朋, 高俊濤, 沈楠, 等. 北冬蟲夏草對大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響[J]. 食品研究與開發(fā), 2016, 37(9): 11-13. DOI:10.3969/j.issn.1005-6521.2016.09.003.

[18] AMMON-TREIBERR S, GRECKSCH G, ANGELIDIS C, et al.Emotional and learning behaviour in mice overexpressing heat shock protein 70[J]. Neurobiology of Learning and Memory, 2008, 90: 358-364. DOI:10.1016/j.nlm.2008.04.006.

[19] WANG J, FLAISHER-GRINBERG S, LI S S, et al. Antidepressantlike effects of the active acidic polysaccharide portion of ginseng in mice[J]. Journal of Ethnopharmacology, 2010, 132(1): 65-69.DOI:10.1016/j.jep.2010.07.042.

[20] VIVIANI D, HAEGLER P, STRASSER D S, et al. Sex comparison on long-lasting behavioral and physiological disturbances induced by single shock experience in rats[J]. Physiology and Behavior, 2012,107: 243-251. DOI:10.1016/j.physbeh.2012.06.018.

[21] LI X L, ZHAO X, XU X, et al. Schisantherin A recovers Aβ-induced neurodegeneration with cognitive decline in mice[J]. Physiology &Behavior, 2014, 132:10-16. DOI:10.1016/j.physbeh.2014.04.046.

[22] POURMOTABBED A, NEDAEI S E, CHERAGHI M, et al. Effect of prenatal pentylenetetrazol-induced kindling on learning and memory of male offspring[J]. Neuroscience, 2011, 172: 205-211. DOI:10.1016/j.neuroscience.2010.11.001.

[23] 羅霞, 馬忠華, 胡明華, 等. 復(fù)合多糖對小鼠細(xì)胞免疫功能的影響[J]. 中國食品衛(wèi)生雜志, 2016, 28(2): 186-191. DOI:10.13590/j.cjfh.2016.02.010.

[24] 蔡溱, 陳方劍, 陸松偉, 等. 冬蟲夏草膠囊對免疫抑制小鼠免疫功能的影響[J]. 解放軍藥學(xué)學(xué)報, 2014, 30(2): 118-121. DOI:10.3969/j.issn.1008-9926.2014.02.006.

[25] 劉春紅, 王曉慧, 高磊, 等. 植物乳桿菌C88聯(lián)合人參多糖的免疫調(diào)節(jié)作用[J]. 食品科學(xué), 2016, 37(11): 202-207. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201611035.

[26] 賁松彬, 張?jiān)? 孫冬梅, 等. 蟲草多糖蘋果果醋的保健功能評價[J]. 食品科學(xué), 2014, 35(7): 232-237. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201407046.

[27] 龔曉健, 季暉, 盧順高, 等. 人工蟲草多糖對小鼠免疫功能的影響[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報, 2000, 31(1): 53-55.

[28] 郝文麗. 枸杞多糖對亞健康小鼠改善作用的研究[D]. 大慶: 黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué), 2015: 28-33.

[29] 劉勐, 居春陽, 朱延梅, 等. 靈孢多糖輔助治療抑郁癥的作用及機(jī)制[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2014, 14(4): 656-662. DOI:10.13241/j.cnki.pmb.2014.04.014.

[30] 馬素好, 馬霄, 李鳳麗. 蟲草多糖對反復(fù)腦缺血再灌注模型小鼠學(xué)習(xí)記憶及腦組織SOD、MDA的影響[J]. 中醫(yī)學(xué)報, 2016, 31(8):1135-1139. DOI:10.16368/j.issn.1674-8999. 2016.08.320.

[31] 張倩, 張永明, 陸衛(wèi)群, 等. 古尼蟲草多糖改善小鼠學(xué)習(xí)記憶作用的研究[J]. 營養(yǎng)學(xué)報, 2007, 29(4): 393-395. DOI:10.13325/j.cnki.acta.nutr.sin.2007.04.019.

[32] 孫勇, 楊文建, 馬寧, 等. 蛹蟲草子實(shí)體超細(xì)粉對小鼠免疫力及抗氧化功能的調(diào)節(jié)作用[J]. 食用菌學(xué)報, 2013, 20(1): 66-69.DOI:10.16488/j.cnki.1005-9873.2013.01.003.

Effect of Polysaccharides from Liquid Culture of Cordyceps sinensis CAMT 63341 on Behavior and Immunity Organ Indexes of Mice

CAI Chuangwei1, HUANG Xiaoyue1, NIE Fanghong1,*, XU Defeng1,2,3,*, HAO Jiangwei1
(1. Key Laboratory of Advanced Processing of Aquatic Products of Guangdong Higher Education Institution, Guangdong Provincial Engineering Technology Research Center of Marine Food, Guangdong Provincial Key Laboratory of Aquatic Product Processing and Safety, College of Food Science and Technology, Guangdong Ocean University, Zhanjiang 524088, China;2. School of Food Science and Engineering, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China;3. Technique Center of Inf i nitus (China) Co. Ltd., Guangzhou 510665, China)

This investigation was undertaken to evaluate the effect of polysaccharides from the liquid culture of Cordyceps sinensis CAMT 63341 on body weight, emotion, cognition and immune function in mice. Totally 60 healthy male mice were randomly divided into blank control, positive control and experimental groups. Ganoderma lucidum polysaccharides were taken as positive control, and the animals in the experimental groups were given Cordyceps sinensis CAMT 63341 polysaccharides at high, middle, and low doses, respectively. After continuous feeding for 30 days, elevated plus maze test,shuttle box test, and delayed type hypersensitivity test were conducted and the body weight and thymus and spleen organ weight to body weight ratios were recorded. Compared with the blank control group, the mice fed with Cordyceps sinensis CAMT 63341 polysaccharides exhibited dose-dependently accelerated body weight gain, increased number of open arm entries and extended time spent on the open arm of the maze, improved active avoidance response and shortened latent period of passive avoidance in shuttle box test, and increased thymus and spleen organ weight to body weight ratios, with statistically signif i cant differences being observed in the high-dose group (P ＜ 0.05 or 0.01), which was similarly effective to Ganoderma lucidum polysaccharides. Therefore, polysaccharides from the liquid culture of Cordyceps sinensis CAMT 63341 can promote body weight gain, improve emotion, and enhance cognition and immune function in mice.

Cordyceps sinensis CAMT 63341; liquid-state fermentation; polysaccharides; emotion; recognition; immunity

10.7506/spkx1002-6630-201801035

TS252.54

A

1002-6630（2018）01-0232-06

蔡創(chuàng)威, 黃曉月, 聶芳紅, 等. Cordyceps sinensis CAMT 63341液態(tài)發(fā)酵多糖對小鼠若干行為學(xué)指標(biāo)及免疫器官指數(shù)的影響[J]. 食品科學(xué), 2018, 39(1): 232-237.

10.7506/spkx1002-6630-201801035. http://www.spkx.net.cn

CAI Chuangwei, HUANG Xiaoyue, NIE Fanghong, et al. Effect of polysaccharides from liquid culture of Cordyceps sinensis CAMT 63341 on behavior and immunity organ indexes of mice[J]. Food Science, 2018, 39(1): 232-237. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201801035. http://www.spkx.net.cn

2016-10-10

中國博士后科學(xué)基金項(xiàng)目（2014M552203）；中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金項(xiàng)目（20152M062）；

廣東省科技廳項(xiàng)目（2013B021100016）

蔡創(chuàng)威（1995—），男，學(xué)士，研究方向?yàn)槭吃椿钚晕镔|(zhì)高值化利用。E-mail：915067704@qq.com

*通信作者簡介：聶芳紅（1969—），女，高級實(shí)驗(yàn)師，碩士，研究方向?yàn)槭称范纠韺W(xué)與功能性評價。E-mail：15913577717@163.com

徐德峰（1978—），男，副教授，博士，研究方向?yàn)樗a(chǎn)食品質(zhì)量與安全控制。E-mail：13827198525@163.com