李深慧　唐可仁　方亦可　郭濤　鄭雪婷　王振忠

摘要 通過分光光度法測(cè)定波長(zhǎng)410 nm處山藥多酚氧化酶的活性，研究不同方式提取的松針提取液對(duì)山藥多酚氧化酶活性的影響。結(jié)果表明，松針冷水提取液對(duì)山藥多酚氧化酶活性抑制作用最明顯。

關(guān)鍵詞 松針提取液；山藥；多酚氧化酶活性

中圖分類號(hào) TS201.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2018）20-0105-01

山藥作為薯蕷的地下塊莖，富含多種活性成分等，具有一定的藥用及食用價(jià)值[1]。山藥在儲(chǔ)藏以及后期加工過程中，其富含的多酚氧化酶（polyphenol oxidase，PPO）容易被氧化而使山藥呈現(xiàn)褐色，對(duì)山藥的商品價(jià)值造成較大的影響[2-4]。因此，山藥的護(hù)色研究非常關(guān)鍵。我國(guó)松針資源較為豐富，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，松針具有一定的抗氧化能力[5-6]。本文選擇松針不同類型提取液為抗氧化劑，研究其對(duì)山藥中多酚氧化酶的抑制能力，為山藥的護(hù)色研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

新鮮山藥，購買自湖北十堰超市；新鮮松針采自湖北醫(yī)藥學(xué)院校內(nèi)；供試試劑有丙酮、無水磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、鄰苯二酚，均為分析純；試驗(yàn)儀器包括雙光束紫外可見分光光度計(jì)、離心機(jī)、電子天平、恒溫水浴鍋等。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 山藥中多酚氧化酶提取。將100 g新鮮山藥洗凈后在高速分散器中勻漿，冷凍離心10 min后棄去沉淀，取上清液，加入等體積冷丙酮溶液，混勻后繼續(xù)冷凍離心10 min，取出沉淀并用氮?dú)獯蹈桑尤?.2 moI/L磷酸鹽緩沖液（pH=6.0）15 mL，得到多酚氧化酶酶液，于-4 ℃保存。

1.2.2 多酚氧化酶活性測(cè)定條件的確定。①工作波長(zhǎng)的確定。將2 mL磷酸緩沖液（pH=6.0）、2 mL 0.1 mol/L鄰苯二酚溶液和0.5 mL新鮮酶液于室溫下迅速混合均勻，用紫外分光光度計(jì)在390～530 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)量吸光度變化。結(jié)果表明，在波長(zhǎng)410 nm處吸收最強(qiáng)。因此，選擇410 nm作為工作波長(zhǎng)。②水浴溫度的確定。分別測(cè)定25、30、35、40、45、50 ℃條件下山藥氧化酶的活性。結(jié)果表明，隨著反應(yīng)溫度的增加，山藥中多酚氧化酶的活性增強(qiáng)，當(dāng)溫度為35 ℃時(shí)酶活性達(dá)到最大值。因此，選擇35 ℃為水浴溫度。③磷酸緩沖液pH值的確定。分別測(cè)定磷酸緩沖液pH值為4.0～8.0時(shí)，山藥中多酚氧化酶的活性。結(jié)果表明，山藥中多酚氧化酶的活性隨著pH值的升高而增強(qiáng)，當(dāng)pH值為6.0時(shí)，山藥中多酚氧化酶的活性達(dá)到最高。因此，選擇磷酸緩沖液pH值為6.0。

1.2.3 多酚氧化酶活性的測(cè)定。在試管中依次加入2 mL 0.1 mol/L鄰苯二酚、2 mL磷酸緩沖液（pH=6.0）、0.5 mL多酚氧化酶提取液、1 mL不同方式提取的松針液，35 ℃恒溫水浴10 min，于波長(zhǎng)410 nm下測(cè)定多酚氧化酶活性。松針提取液包括熱水提取液、冷水提取液、乙醇-水（體積比1∶1）提取液、無水乙醇提取液4種。

2 結(jié)果與分析

由圖1可知，松針的4種提取液對(duì)山藥的多酚氧化酶活性的抑制效果有明顯差異。松針的冷水提取液對(duì)多酚氧化酶活性具有最強(qiáng)的抑制效果，隨著松針冷水提取液濃度的增加，多酚氧化酶活性逐漸降低，吸光度趨近于0。在松針的冷水提取液中，一般含有較豐富的水溶性物質(zhì)，其中包含有機(jī)酸類、黃酮化合物、抗壞血酸化合物等。一方面有機(jī)酸類化合物可以通過降低溶液的pH值，抑制多酚氧化酶的活性；另一方面在酸性環(huán)境下，溶液溶解的氧氣偏低，有利于抑制山藥中多酚氧化酶活性；此外，抗壞血酸具有很強(qiáng)的還原性，也可以對(duì)多酚氧化酶活性起到抑制作用。因此，松針的冷水提取液具有明顯的抗氧化性，對(duì)山藥中的多酚氧化酶活性具有明顯的抑制能力。

松針的熱水提取液對(duì)多酚氧化酶活性的抑制效果較差，主要原因是熱水對(duì)松針中有效成分活性有一定程度的破壞作用，從而降低了其抗氧化性。

松針的乙醇-水（體積比1∶1）提取液和松針無水乙醇提取液對(duì)山藥中多酚氧化酶活性也有一定的抑制效果。但松針醇提取液對(duì)山藥多酚氧化酶活性的抑制效果要明顯弱于松針冷水提取液，主要原因是松針醇提取液中以脂溶性的化合物為主，比如色素、VE等，這類脂溶性物質(zhì)的抗氧化能力相對(duì)較弱。

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，在測(cè)定山藥中多酚氧化酶活性時(shí)，分別加入松針熱水提取液、冷水提取液、乙醇-水（體積比1∶1）提取液、無水乙醇提取液后，松針的冷水提取液對(duì)山藥中多酚氧化酶活性具有較強(qiáng)的抑制作用，在山藥護(hù)色方面有一定的應(yīng)用潛力。

4 參考文獻(xiàn)

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