王月紅，張婭杰，谷強

(石河子大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院，新疆石河子832002)

肺炎支原體感染的哮喘患兒血清CD40L、VCAM-1水平變化及其意義

王月紅，張婭杰，谷強

(石河子大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院，新疆石河子832002)

目的探討肺炎支原體 (MP) 感染的支氣管哮喘患兒血清CD40L與血管細胞黏附分子-1(VCAM-1)水平的變化及其意義。方法選擇59例支氣管哮喘患兒作為觀察組，入院后行MP-lgM檢測，根據MP是否陽性分為MP感染并支氣管哮喘組(MP感染哮喘組)30例、單純支氣管哮喘組(單純哮喘組)29例。另選擇同期正常體檢的兒童27例作為對照組。MP感染哮喘組中根據MP-IgM抗體效價滴度分為低滴度11例、中滴度10例、高滴度9例三個水平。清晨抽取三組空腹靜脈血4 mL，離心取上清液，采用酶聯免疫法測定血清CD40L及VCAM-1水平。分析MP感染哮喘患兒血清CD40L與VCAM-1水平的相關性。結果單純哮喘組及MP感染哮喘組血清CD40L、VCAM-1水平均高于對照組(P均<0.05)，MP感染哮喘組血清CD40L、VCAM-1水平均高于單純哮喘組(P均<0.05)。高滴度及中滴度患兒血清CD40L、VCAM-1水平均高于低滴度患兒(P均<0.05)。高滴度及中滴度患兒間血清CD40L與VCAM-1水平差異無統計學意義(P>0.05)。MP感染哮喘患兒血清CD40L水平與VCAM-1水平呈正相關(r=0.634，P<0.01)。結論哮喘患兒存在MP感染時，血清CD40L及VCAM-1水平可進一步升高，從而加重呼吸道的慢性炎癥過程，進而加重支氣管哮喘。

支氣管哮喘；肺炎支原體；CD40L；血管細胞黏附分子1；炎癥反應

肺炎支原體(MP)是一種非典型的病原體，其在哮喘患兒急性期發(fā)作中的感染率有逐年增加的趨勢[1]，已成為兒童呼吸道感染的重要病原體[2]。MP感染對兒童哮喘的發(fā)生、發(fā)展及遷延均起十分重要的作用，但是其致病機理尚不明確。CD40廣泛表達于免疫細胞表面，其與配體CD40L相互作用可激活抗原提呈細胞(APC)，進而激活T細胞參與免疫炎癥反應。而T細胞分泌過多及其功能紊亂與哮喘的發(fā)病有關，提示CD40L在哮喘氣道炎癥的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。但這一信號分子在哮喘發(fā)病中作用的相關報道相對較少，尤其是MP感染是否可通過刺激CD40-CD40L系統在哮喘疾病中發(fā)揮作用尚不明確。血管細胞黏附分子-1(VCAM-1)是調節(jié)細胞與細胞間或細胞與基質間相互作用的一類分子，主要表達于血管上的內皮細胞、 淋巴細胞、單核細胞，其在哮喘及MP感染中的作用、與CD40的關系及相關研究報道尚不多。2016年1～12月，我們檢測了MP感染哮喘患兒血清CD40L、VCAM-1水平，探討MP感染對哮喘發(fā)病的影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇我院同期收治的59例支氣管哮喘患兒作為觀察組，男30例、女29例，年齡(6.62±0.45)歲。診斷均符合2016年版《兒童支氣管哮喘診斷與防治指南》[3]的診斷標準。診斷標準：具有反復氣喘、氣促等多種接觸變應原癥狀；發(fā)作時雙肺可聞及散在或彌漫性、以呼吸相為主的哮鳴音，呼吸相延長；上述癥狀和體征經過抗哮喘治療有效或自行緩解；除外其他疾病所致的氣喘、咳嗽氣促及胸悶；臨床癥狀不典型者，符合以上1～4條或第4、5條者，可診斷為哮喘。排除標準：合并過敏性疾病；既往有免疫缺陷疾病；呼吸道畸形；合并有急性呼吸道感染疾病及心臟疾病。入院后行MP-IgM檢測，根據MP是否陽性分為MP感染并支氣管哮喘組(MP感染哮喘組)30例、單純支氣管哮喘組(單純哮喘組)29例。MP感染哮喘組中根據MP-IgM抗體效價滴度，分為低滴度(≥1∶160～1∶320)11例、中滴度(≥1∶320～1∶640)10例、高滴度(≥1∶640)9例三個水平。選擇同期正常體檢的兒童27例作為對照組，年齡1～14(6.6±0.5)歲。三組年齡、性別差異均無統計學意義，具有可比性。本研究均獲兒童家長的知情同意。

1.2 血清CD40L、VCAM-1檢測方法 清晨抽取空腹靜脈血4 mL，離心取上清液，采用酶聯免疫法測定血清CD40L及VCAM-1水平，檢測嚴格按照試劑盒說明書操作。

2 結果

2.1 三組血清CD40L、VCAM-1水平比較 單純哮喘組及MP感染哮喘組血清CD40L、VCAM-1水平均高于對照組(P均<0.05)，MP感染哮喘組血清CD40L、VCAM-1水平均高于單純哮喘組(P均<0.05)。見表1。

表1 三組血清CD40L、VCAM-1水平比較

注：與對照組比較，*P<0.05；與單純哮喘組比較，△P<0.05。

2.2 不同MP-IgM滴度的MP感染哮喘患兒血清CD40L、VCAM-1水平比較 高滴度及中滴度患兒血清CD40L、VCAM-1水平均高于低滴度患兒(P均<0.05)。高滴度及中滴度患兒間血清CD40L與VCAM-1水平差異均無統計學意義(P均>0.05)。見表2。

表2 不同MP-IgM滴度的MP感染哮喘患兒血清CD40L、VCAM-1水平比較

注：與低滴度比較，*P<0.05。

2.3 MP感染哮喘患兒血清CD40L與VCAM-1水平的相關性 MP感染哮喘患兒血清CD40L水平與VCAM-1水平呈正相關(r=0.634，P<0.01)。

3 討論

哮喘是兒科呼吸道常見疾病之一，其因素有多種，多與呼吸道感染、家族遺傳基因、大氣環(huán)境污染、反復呼吸道感染等密切相關。反復呼吸道感染是導致兒童哮喘最重要的因素，其中MP是最重要的病原。研究發(fā)現，MP感染是哮喘疾病發(fā)生、發(fā)展的一個重要原因[4]。哮喘的本質是氣道炎癥細胞、T及B細胞、呼吸道上皮細胞等細胞結構與細胞組分一起參與的慢性呼吸道炎癥性疾病，T細胞尤其是Th細胞紊亂在哮喘免疫發(fā)病中起到重要作用，因此T細胞功能紊亂是哮喘發(fā)作的關鍵環(huán)節(jié)。研究MP感染與T細胞關系對于哮喘的診斷及治療均有重要的臨床意義。

MP感染既可誘發(fā)支氣管哮喘急性發(fā)作，又可加重氣道高反應性，甚至導致重癥或難治性哮喘[5]。MP感染對呼吸道的致病機理包括直接侵入呼吸道上皮細胞和免疫紊亂兩種學說[6]，可能與MP損傷氣道上皮細胞，增加氣道的高反應，造成氣道慢性炎癥過程，刺激轉化生長因子-β1、血管內皮生長因子、TNF-α、嗜酸細胞陽離子蛋白等多種參與哮喘氣道重塑過程的細胞因子和炎癥介質釋放[7,8]有關。CD40-CD40L是一對非常重要的協同刺激分子，能夠激活T細胞，在免疫反應中具有重要作用。CD40-CD40L系統處于炎癥進程的關鍵環(huán)節(jié)，處于細胞因子網絡的上游環(huán)節(jié)，具有調節(jié)多種炎癥反應的作用[9]。研究發(fā)現，CD40-CD40L是T細胞激活的關鍵[10]，這一刺激途徑在體液免疫反應中起重要作用，可調節(jié)CD4+T細胞與B細胞的相互作用，并對激活APC起到非常重要作用，被認為是哮喘發(fā)病的途徑之一。既往研究發(fā)現，哮喘可激活信號分子CD40-CD40L系統，進而促進基質金屬蛋白酶(MMP)、IL-6、IL-8及TNF-α等炎癥因子的釋放，導致或誘發(fā)哮喘的發(fā)生[11～13]。本研究發(fā)現，單純哮喘組及MP感染哮喘組血清CD40L水平高于對照組，提示MP的感染可能激活了這一途徑的發(fā)生，進而誘發(fā)哮喘的發(fā)作；MP感染哮喘組血清CD40L水平高于單純哮喘組，高滴度及中滴度患兒血清CD40L水平高于低滴度患兒，推測當哮喘患兒合并MP感染時，可進一步激活哮喘患兒信號分子CD40-CD40L，使得這一系統參與和調節(jié)許多細胞與免疫分子的過程，包括T細胞和體液的適應性免疫的發(fā)生、發(fā)展過程，加劇哮喘的炎癥反應[14]。

MP感染發(fā)病機制涉及黏附作用、直接侵入及免疫性損傷，目前認為免疫性損傷為主要發(fā)病機制[15]。VCAM-1是判斷內皮功能受損的一種炎癥指標。VCAM-1可促進已進入病灶的單核細胞的滾動、T淋巴細胞的激活，并增加其他細胞與細胞間的相互作用，進而放大免疫應答、防止致敏和誘導免疫耐受[9]，從而誘發(fā)哮喘的發(fā)作。本研究發(fā)現，單純哮喘組及MP感染哮喘組血清VCAM-1水平高于對照組，MP感染哮喘組血清VCAM-1水平高于單純哮喘組，提示MP感染可能是促發(fā)氣道內皮損傷的重要危險因素，而高滴度及中滴度患兒血清VCAM-1水平高于低滴度患兒，提示可能MP感染的程度可能并不是氣道內皮損傷，誘發(fā)哮喘發(fā)作的原因。

本研究發(fā)現，MP感染哮喘患兒血清CD40L水平與VCAM-1水平呈正相關，提示MP感染可能進一步激活了CD40-CD40L系統，進而激活了參與氣道慢性炎癥因子的生成，激發(fā)了氣道內皮損傷，從而進一步促進及誘發(fā)哮喘的發(fā)作。本研究通過內皮損傷因子VCAM-1的檢測驗證這一過程，但因研究標本量偏少，可能還需增大樣本量來研究。

綜上所述，哮喘患兒存在MP感染時，血清CD40L及VCAM-1水平可進一步升高，從而加重呼吸道的慢性炎癥過程，加劇呼吸道的氣道高反應性，進而加重支氣管哮喘。

[1] 王志華，王玉水.肺炎支原體感染導致支氣管哮喘的機制探[J]. 醫(yī)學綜述,2010,16(13):2013-2014.

[2] Sun Y， Peng D， Lecanda J， et al． In vivo gene transfer of CD40 ligand into colon cancer cells induces local production of cytokines and chemokines，tumor eradication and protective antitumor immunity[J]． Gene Therapy， 2000，7(17):1467-1476．

[3] 中華醫(yī)學會兒科學分會呼吸學組.兒童支氣管哮喘診斷與防治指南(2016年版)[J]．中華兒科雜志，2016，54(3)：167-181.

[4] Shao L, Cong Z, Li X, et al. Changes in levels of IL-9, IL-17, IFN-γ, dendritic cell numbers and TLR expression in peripheral blood in asthmatic children with Mycoplasma pneumoniae infection[J]. Int J Clin Exp Pathol, 2015,8(5):5263-5272.

[5] Wood PR, Hill VL, Burks ML, et al. Mycoplasma pneumoniae in children with acute and refractory asthma[J]. Ann Allergy Asthma Immunol, 2013,110(5): 328.

[6] Park CS, Lee SM , Chung SW, et al. Interleukin -2 and soluble in-terl eukin-2 receptor in bronchoalveolar lavage fluid from patiens with bron ehial asthma[J ]. Chest, 1994,106(2):400-406.

[7] Esposito S, Blasi F, Arosio C, et al. Importance of acute mycoplasma pneumoniae and chlamydia pneumoniae infections in children with wheezing[J]. Eur Respir J, 2000,16(6):1142-1146.

[8] Chung HL, Kim SG, Shin IH. The relationship between serum endothelin (ET)-1 and wheezing status in the children with mycoplasma pneumoniae pneumonia[J]. Pediatr Allergy Immunol, 2006,17(4):285-290.

[9] Costello RT，Gastaut JA，Olive D． What is the real role of CD40 in cancer immunotherapy[J]. Immunol Today，1999，20(11): 488-493.

[10] Principi N，Esposito S. Mycoplasma pneumonia and chlamydia pneumoniae cause lower respiratory tract disease in paediatric patients[J]. Curr Opin Infect Dis，2002,15(3):295-300.

[11]Shang QH, Wang HJ, Li SM, et al. The effect of sodium tanshinone iia sulfate and sinivastatin on elevated sermu levels of inflammatory markers in patients with coronary heart diease: a study protocol for a randomized controlled trial[J].Evid- based Compl Alt, 2013,14:452-460.

[12] Pfister R, Cairns R, Erdann E, et al. A clinical risk score for heart failure in patients with type 2 diabletes and macrovascular diease: an analysis of the proactive study[J]. Int J Cardiol, 2013,162(2):112-116.

[13] Kanaya AM, Kandula N, Herrington D, et al. Mediators of atherosclerosis in south asians living in america(masala) study: objectives, methods, and cohort description[J].2013,36(12):713-720.

[14] Kawabe T， Matsushima M， Hashimoto N， et al． CD40/CD40 ligand interactions in immune responses and pulmonary immunity[J]．Nagoya J Med Sci，2011，73(3-4):69-78．

[15] 李玉華，吳本清.川崎病合并肺炎支原體感染患兒實驗室檢查指標及臨床特征研究[J].中國全科醫(yī)學，2012,8B(15):2649-2651.

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.46.024

R562.2

B

1002-266X(2017)46-0078-03

2017-02-26)