芮昆昆++++++章波++++++馮聯(lián)忠++++++邰小華

[摘要] 目的 探討CIP2A在甲狀腺乳頭狀癌、甲狀腺腺瘤、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫及甲狀腺正常組織中的表達(dá)及臨床意義。 方法 應(yīng)用免疫組化法檢測67例甲狀腺乳頭狀癌、26例甲狀腺腺瘤、23例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、22例甲狀腺正常組織中CIP2A蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果 CIP2A在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)明顯高于甲狀腺腺瘤、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫及正常組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；CIP2A在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P<0.05），與甲狀腺乳頭狀癌患者的性別、年齡、腫瘤大小及pTNM分期等無關(guān)（P>0.05）。結(jié)論 CIP2A在甲狀腺乳頭狀癌組織中過表達(dá)，且與其惡性臨床病理特征緊密相關(guān)，提示CIP2A作為一個新的靶點可能為甲狀腺乳頭狀癌的臨床診斷與治療策略提供新的方向。

[關(guān)鍵詞] CIP2A；甲狀腺乳頭狀癌；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；免疫組織化學(xué)

[中圖分類號] R736.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-9701（2017）32-0008-04

[Abstract] Objective To investigate the expression and clinical significance of CIP2A in papillary thyroid carcinoma， thyroid adenoma， nodular goiter and thyroid normal tissue. Methods Immunohistochemical method was used to detect the expression of CIP2A protein in 67 cases of thyroid papillary carcinoma， 26 cases of thyroid adenoma， 23 cases of nodular goiter and 22 cases of normal thyroid tissues. Results The expression of CIP2A in papillary thyroid carcinoma tissues was significantly higher than that in thyroid adenoma， nodular goiter and normal thyroid tissues， and the differences were statistically significant（P<0.05）； the expression level of CIP2A in papillary thyroid carcinoma was correlated with lymph node metastasis（P<0.05）， but was not associated with gender， age， tumor size and pTNM staging of patients with papillary thyroid carcinoma（P>0.05）. Conclusion CIP2A is overexpressed in papillary thyroid carcinoma， and is closely correlated with its malignant clinical and pathological characteristics， suggesting that CIP2A， as a new target， may provide a new direction for the clinical diagnosis and treatment strategy of papillary thyroid carcinoma.

[Key words] CIP2A； Papillary thyroid carcinoma； Lymph node metastasis； Immunohistochemistry

甲狀腺癌是最常見的內(nèi)分泌惡性腫瘤之一。近年來，甲狀腺癌的發(fā)病率以每年4%增幅逐年上升，尤以甲狀腺乳頭狀癌為主，約占80%，不但導(dǎo)致甲狀腺癌相關(guān)醫(yī)療費(fèi)用支出增加，也使因甲狀腺癌傷殘導(dǎo)致的疾病負(fù)擔(dān)處于上升趨勢[1-3]。盡管甲狀腺乳頭狀癌的預(yù)后良好，10年生存率達(dá)90%以上，但其發(fā)生、發(fā)展機(jī)制仍不明確，隨著近年來對癌基因、抑癌基因及腫瘤分子標(biāo)志物的研究，人們認(rèn)識到同其他惡性腫瘤一樣，甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生發(fā)展也是一個多因素、多階段、多靶點共同作用的結(jié)果。蛋白磷酸酶2A（Protein Phosphatase 2A，PP2A）的癌性抑制因子（Cancerous Inhibitor of Protein Phosphatase 2A，CIP2A）是近幾年發(fā)現(xiàn)的一種癌蛋白，主要通過抑制PP2A對c-Myc蛋白的去磷酸化作用以維持其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性，從而促進(jìn)細(xì)胞的增殖，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展?，F(xiàn)有研究表明，CIP2A在多種實體腫瘤中過表達(dá)[4]，并且CIP2A過表達(dá)與多種惡性腫瘤的浸潤深度、TNM分期或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理學(xué)參數(shù)間具有相關(guān)性，可作為潛在的診斷標(biāo)志物或不良預(yù)后的預(yù)測因子[5]。但是，截至目前CIP2A在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及與臨床病理學(xué)參數(shù)之間有無相關(guān)性的研究仍較少。本研究應(yīng)用免疫組化方法分析CIP2A在甲狀腺良惡性組織中的表達(dá)及其與甲狀腺乳頭狀癌臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1 一般資料

收集67例甲狀腺乳頭狀癌、26例甲狀腺腺瘤、23例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、22例甲狀腺正常組織石蠟組織標(biāo)本，均來自2015年11月～2016年11月間在嘉興學(xué)院附屬第二醫(yī)院腫瘤外科行手術(shù)治療的患者。本研究選取的病例術(shù)前均未進(jìn)行藥物及碘131等治療，所有組織標(biāo)本均經(jīng)HE染色及病理學(xué)檢查確診；依據(jù)美國癌癥聯(lián)合委員會（AJCC）制定的第7版《腫瘤分期指南》進(jìn)行TNM分期；本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)通過。67例甲狀腺乳頭狀癌中，男14例，女53例，年齡23～82歲，中位年齡50歲。所有標(biāo)本均經(jīng)100 mL/L甲醛固定，石蠟包埋后保存，對石蠟標(biāo)本行4 μm厚度連續(xù)切片。endprint

1.2 方法

鼠抗人CIP2A單克隆抗體購自美國santa cruz公司。采用免疫組織化學(xué)法進(jìn)行染色，具體實驗步驟按操作說明書進(jìn)行。CIP2A主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，顯微鏡下見細(xì)胞質(zhì)中棕黃色物質(zhì)判定為陽性。陽性對照參考試劑公司提供的陽性對照片，陰性對照以磷酸鹽緩沖液代替一抗。所有玻片經(jīng)顯微鏡觀察并拍照，以作后續(xù)分析。

1.3 免疫組化染色結(jié)果評估

所有玻片染色結(jié)果均由2位病理科專家采用陽性細(xì)胞平均百分比和染色強(qiáng)度兩種指標(biāo)聯(lián)合評價。具體打分方法如下：①每張玻片隨機(jī)選取5個顯微鏡下視野，根據(jù)陽性細(xì)胞平均百分比打分：沒有陽性細(xì)胞為0分，陽性細(xì)胞≤25%為1分，陽性細(xì)胞26%～50%為2分，陽性細(xì)胞51%～75%為3分，陽性細(xì)胞76%～100%為4分。②染色強(qiáng)度評分：陰性為0分，弱染色為1分，中度染色為2分，強(qiáng)染色為3分。每張切片的最終得分為兩種方法評分的乘積，最終可有四種結(jié)果：乘積為 0，記為“-”，表達(dá)陰性；乘積≤4，記為“+”，低表達(dá)；乘積為5～8，記為“++”，中度表達(dá)；乘積≥9，記為“+++”，強(qiáng)表達(dá)。若2位專家對同一張染色切片打分結(jié)果有差異，則棄用該數(shù)據(jù)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

對所有數(shù)據(jù)資料采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，經(jīng)方差齊性檢驗后采用t檢驗；計數(shù)資料采用χ2 檢驗；對臨床病理學(xué)資料采用χ2 檢驗進(jìn)行單因素分析，P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CIP2A蛋白在甲狀腺各種組織中的表達(dá)情況

CIP2A陽性表達(dá)的免疫組化結(jié)果為：細(xì)胞質(zhì)中見大量棕黃色顆粒，細(xì)胞核中也有少量表達(dá)（圖1）。甲狀腺乳頭狀癌標(biāo)本中CIP2A陽性表達(dá)率顯著高于甲狀腺腺瘤、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、甲狀腺正常組織，且各類型病變中的表達(dá)有統(tǒng)計學(xué)差異（χ2=30.9，P<0.05）。與甲狀腺正常組織相比，各類型病變CIP2A陽性表達(dá)率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=13.1、16.7、20.5，P<0.05）（表1）。

2.2 CIP2A蛋白表達(dá)水平與甲狀腺乳頭狀癌臨床病理特征的關(guān)系分析

CIP2A蛋白表達(dá)情況與甲狀腺乳頭狀癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），與患者的年齡、性別、臨床病理分期（pTNM分期）、腫瘤直徑及是否有腺外浸潤無關(guān)（表2）。

3 討論

CIP2A最初由Nagase T等[6]從人胎腦的cDNA文庫中克隆出，也稱為KIAA1524、P90，后由Junttila MR等[7]最終命名為CIP2A，定位于人類3號染色體上，分子量為102 kDa，是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種能抑制PP2A活性的蛋白質(zhì)。其可以通過抑制PP2A介導(dǎo)的c-Myc蛋白上的第62位絲氨酸（S62）去磷酸化作用，以減少c-Myc蛋白的泛素化水解，維持其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，發(fā)揮促進(jìn)細(xì)胞增殖和惡性轉(zhuǎn)化的作用[8，9]，并且c-Myc作為轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子又能上調(diào)CIP2A的表達(dá)，兩者之間的正反饋循環(huán)共同增強(qiáng)了CIP2A的生物學(xué)作用。通過基因敲除CIP2A基因后研究發(fā)現(xiàn)，c-Myc蛋白表達(dá)水平及細(xì)胞增殖率均降低，此研究證實CIP2A在促進(jìn)細(xì)胞增殖及腫瘤形成方面起重要作用，且c-Myc蛋白作為一個重要靶點參與該作用[10]。除此之外，CIP2A過表達(dá)還可以延緩細(xì)胞衰老[11]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，良性組織中CIP2A幾乎不表達(dá)，而在人類頭頸部鱗狀細(xì)胞癌[9]、胃癌[12]、結(jié)腸癌[13]、宮頸癌[14]、肝細(xì)胞癌[15]等多種實體惡性腫瘤中均為高表達(dá)，而且在急、慢性粒細(xì)胞白血?。╝cute myelocytic leukemia，AML；chronic myelocytic leukemia，CML）患者體內(nèi)也發(fā)現(xiàn)CIP2A過表達(dá)[16，17]，由此可見，CIP2A 可能參與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展，并可能成為指導(dǎo)多種惡性腫瘤診斷、治療及預(yù)后的新靶點。

本研究使用免疫組織化學(xué)法檢測CIP2A的表達(dá)，結(jié)果顯示，67例甲狀腺乳頭狀癌標(biāo)本中CIP2A陽性表達(dá)率為71.6%，26例甲狀腺腺瘤中陽性表達(dá)率為30.7%，23例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中陽性表達(dá)率為21.7%，22例癌旁正常組織中陽性表達(dá)率為13.6%。可見，CIP2A在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。此結(jié)果與其在胃癌、乳腺癌等腫瘤組織中表達(dá)結(jié)果相似[11，12]。

甲狀腺乳頭狀癌是甲狀腺最常見的惡性腫瘤，大部分起源于甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞，臨床上難以與某些良性甲狀腺疾病如濾泡性腺瘤、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫鑒別。所以，臨床上甲狀腺癌的鑒別常聯(lián)合多種腫瘤分子標(biāo)志物，如galectin-3、HBME-1、CK19等。近年來，有研究表明CIP2A與HBME-1或galectin-3聯(lián)合應(yīng)用，對于甲狀腺癌診斷的陽性預(yù)測值可高達(dá)96.2%，并且CIPA高表達(dá)水平與不良預(yù)后相關(guān)[18]。本研究結(jié)果顯示，CIP2A 的表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；且CIP2A的表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌患者的性別、年齡、腫瘤的直徑大小、腺外浸潤、pTNM分期均無關(guān)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。Li W等[19]研究也提示CIP2A在胃癌中的表達(dá)與患者的性別、年齡以及腫瘤的大小、分化程度等無明顯相關(guān)。而CIP2A在膽管癌組織的表達(dá)除與上述病理學(xué)參數(shù)無關(guān)，與患者腫瘤的位置、神經(jīng)浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及吸煙、HBV感染也均無相關(guān)性[20]。截止目前關(guān)于CIP2A與腫瘤臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系尚沒有較統(tǒng)一定論，還需更多的研究數(shù)據(jù)來支持。

綜上所述，CIP2A在甲狀腺乳頭狀癌中過表達(dá)，且與甲狀腺乳頭狀癌的臨床病理特征緊密相關(guān)，提示CIP2A 基因及蛋白的表達(dá)調(diào)控可能參與甲狀腺乳頭狀癌的發(fā)生發(fā)展。因此，CIP2A表達(dá)情況的檢測可能為甲狀腺乳頭狀癌的臨床診斷和治療策略提供新的思路及新的靶點。endprint

[參考文獻(xiàn)]

[1] 劉長路，吳巖，畢立夫.甲狀腺癌流行現(xiàn)狀及危險因素的研究進(jìn)展[J].中國地方病學(xué)雜志，2012，31（2）：234-236.

[2] 叢舒，方利文，包鶴齡，等. 1990年與2013年中國人群甲狀腺癌疾病負(fù)擔(dān)分析[J].中華流行病學(xué)雜志，2016， 37（6）：773-777.

[3] 董芬，張彪，單廣良.中國甲狀腺癌的流行現(xiàn)狀和影響因素[J].中國癌癥雜志，2016，26（1）：47-52.

[4] 顧海風(fēng)，夏國偉.CIP2A在惡性腫瘤中的表達(dá)及作用的研究進(jìn)展[J].中華臨床醫(yī)師雜志（電子版），2011，5（12）：3560-3563.

[5] Pang X，F(xiàn)u X，Chen S，et al.Overexpression of CIP2A promotes bladder cancer progression by regulating EMT[J]. Clin Transl Oncol，2016，18（3）：289-295.

[6] Nagase T，Kikuno R，Ohara O. Prediction of the coding sequences of unidentified human genes.ⅩⅫ.The complete sequences of 50 new cDNA clones which code for large proteins[J]. DNA Res，2001，8（6）：319-327.

[7] Junttila MR，Puustinen P，Niemela M，et al. CIP2A inhibits PP2A in human malignancies[J].Cell，2007，130（1）：51-62.

[8] Mumby M.PP2A：Unveiling a reluctant tumor suppressor[J]. Cell，2007，130（1）：21-24.

[9] Routila J，Bilgen T，Saramaki O，et al.Copy number increase of oncoprotein CIP2A is associated with poor patient survival in human head and neck squamous cell carcinoma[J].J Oral Pathol Med，2016，45（5）：329-337.

[10] Junttila MR，Westermarck J.Mechanisms of MYC stabiliz- ation in human malignancies[J].Cell Cycle，2008， 7（5）：592-596.

[11] Laine A，Sihto H，Come C，et al. Senescence sensitivity of breast cancer cells is defined by positive feedback loop between CIP2A and E2F1[J]. Cancer Discov，2013， 3（2）：182-197.

[12] Chen JS，Wu BB，Bao HL，et al. Relationship between CIP2A expression，and prognosis and MDR-related proteins in patients with advanced gastric cancer[J]. Int J Clin Exp Pathol，2015，8（11）：15007-15012.

[13] Wang HW，Yang SH，Huang GD，et al. Temsirolimus enhances the efficacy of cetuximab in colon cancer through a CIP2A-dependent mechanism[J]. J Cancer Res Clin Oncol，2014，140（4）：561-571.

[14] 車愛文，陳淑蘋，譚旭東，等. CIP2A在宮頸癌中的表達(dá)及其臨床意義[J]. 海南醫(yī)學(xué)，2015，26（2）：266-268.

[15] Huang P，Qiu J，You J，et al. Expression and prognostic significance of CIP2A mRNA in hepatocellular carcinoma and nontumoral liver tissues[J]. Biomarkers，2012，17（5）：422-429.

[16] 王石松. CIP2A、β-catenin和C-myc在慢性粒細(xì)胞白血病中的表達(dá)及意義[J]. 中國實用醫(yī)藥，2013，8（11）：68-69.

[17] Barragan E，Chillon MC，Castello-Cros R，et al. CIP2A high expression is a poor prognostic factor in normal karyotype acute myeloid leukemia[J].Haematologica，2015，100（5）：e183-e185.

[18] Chao TT，Maa HC，Wang CY，et al.CIP2A is a poor prognostic factor and can be a diagnostic marker in papillary thyroid carcinoma[J]. APMIS，2016，124（12）：1031-1037.

[19] Li W，Ge Z，Liu C，et al.CIP2A is overexpressed in gastric cancer and its depletion leads to impaired clonogenicity，senescence，or differentiation of tumor cells[J]. Clin Cancer Res，2008，14（12）：3722-3728.

[20] 許鵬，黃強(qiáng)，劉臣海，等.膽管癌組織CIP2A和Survivin蛋白表達(dá)及其與預(yù)后相關(guān)性的探討[J]. 中華腫瘤防治雜志，2011，18（24）：1933-1937.

（收稿日期：2017-09-20）endprint