許銳光，賈 艷，胡力文，翁嘉華，鄧俊良，胡延春，*

(1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物醫(yī)學(xué)院/動物疫病與人類健康四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 611130； 2.嘉興職業(yè)技術(shù)學(xué)院 農(nóng)業(yè)與環(huán)境分院，浙江 嘉興 314036)

黃芩甙對新城疫病毒感染雞胚成纖維細(xì)胞Toll樣受體2、3、4、7 mRNA表達(dá)的影響

許銳光1，賈 艷2，胡力文1，翁嘉華1，鄧俊良1，胡延春1，*

(1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物醫(yī)學(xué)院/動物疫病與人類健康四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 611130； 2.嘉興職業(yè)技術(shù)學(xué)院 農(nóng)業(yè)與環(huán)境分院，浙江 嘉興 314036)

旨在探討黃芩甙對新城疫病毒感染雞胚成纖維細(xì)胞Toll樣受體2、3、4、7 mRNA表達(dá)的影響。新城疫病毒(NDV)感染雞胚成纖維細(xì)胞，使用MTT法檢測黃芩甙對雞胚成纖維細(xì)胞的最大安全濃度，使用熒光定量PCR方法檢測不同濃度黃芩甙對染毒細(xì)胞Toll樣受體2、3、4、7 mRNA在不同時間表達(dá)的影響。結(jié)果表明，黃芩甙組和病毒對照組細(xì)胞TLR2、TLR4和TLR7 mRNA的表達(dá)水平起初受到抑制，TLR2和TLR4 mRNA在24 h內(nèi)呈上升趨勢，TLR7 mRNA在16 h內(nèi)呈上升趨勢，TLR3 mRNA的表達(dá)水平呈波動性變化。黃芩甙在24 h時能夠促進(jìn)NDV感染細(xì)胞TLR2和TLR4 mRNA的表達(dá)，且呈劑量依賴性，從而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，具有抗NDV的功能。

黃芩甙；新城疫病毒；Toll樣受體；實(shí)時熒光定量PCR

新城疫病毒(Newcastlediseasevirus， NDV)也被稱為亞洲雞瘟病毒、偽雞瘟病毒或禽肺腦炎病毒，屬于副黏病毒科，禽腮腺炎病毒屬(Avulavirus)，禽副黏病毒I型(APMV-1)[1]。最急性NDV感染雞群，死亡率高達(dá)90%，其每年對全球養(yǎng)禽業(yè)都造成巨大的損失[2]。接種疫苗是目前本病主要的防治措施[3]，因大量抗病毒西藥被禁止應(yīng)用于畜禽臨床中，故選擇一種天然化合物作為替代十分有應(yīng)用前景[4]。許多中藥本身具有調(diào)節(jié)免疫功能、抑制病毒增殖和感染[5]等作用，以及副作用小、毒性低等優(yōu)良特性。但目前中藥在動物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用并不廣泛。中藥抗病毒不只單純著眼于直接的抗病毒作用，更重視“病毒-機(jī)體-藥物”的關(guān)系，不僅直接殺滅病毒，阻止病毒的復(fù)制、轉(zhuǎn)染，更重要的是能夠增強(qiáng)機(jī)體的免疫力，激發(fā)調(diào)動一切的免疫防御系統(tǒng)發(fā)揮抗病毒作用[5]。黃芩甙(C21H18O11，圖1)是提取自中藥黃芩的干燥根中的一種主要活性成分，它具有抗炎[6]、抗病毒[7]、抗菌[8]和調(diào)節(jié)免疫[9]等生物活性。Jia等[10]的研究表明，黃芩甙具有體外直接抗NDV作用。

通過模式識別受體來識別病原微生物的特異性成分是機(jī)體發(fā)揮免疫應(yīng)答抵御病原微生物侵入的前提和基礎(chǔ)。Toll樣受體(TLRs)是一類重要模式識別受體，在脊椎動物中具有顯著的保守性，能夠識別細(xì)菌、病毒等微生物的各種組分[11]。當(dāng)TLRs被配體激活后，信號通過相關(guān)分子的傳導(dǎo)，激發(fā)一系列的免疫應(yīng)答反應(yīng)，產(chǎn)生炎癥細(xì)胞因子，抵御包括病毒在內(nèi)的病原微生物的侵入[12]。目前，在禽體內(nèi)已發(fā)現(xiàn)的TLRs為TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、TLR15和TLR21[13]。其中，TLR2、TLR3、TLR4、TLR7在NDV感染機(jī)體時發(fā)揮作用。本文通過研究黃芩甙對新城疫病毒感染雞胚成纖維細(xì)胞Toll樣受體2、3、4、7 mRNA表達(dá)的影響，旨在揭示黃芩甙能夠通過調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫力，激發(fā)調(diào)動免疫防御系統(tǒng)發(fā)揮抗NDV作用的機(jī)理，以期為臨床抗NDV新藥的研發(fā)提供理論和試驗(yàn)依據(jù)。

圖1 黃芩甙的化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig.1 Chemical structure of Baicalin

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

藥物：黃芩甙，購自上海金穗生物科技有限公司，純度≥98%。

病毒：新城疫病毒(La Sota株)由四川農(nóng)業(yè)大學(xué)預(yù)防獸醫(yī)系黃勇教授提供。

試驗(yàn)試劑：DMEM培養(yǎng)基購自Hyclone；噻唑藍(lán)(MTT)和二甲基亞砜(DMSO)購自Sigma；胎牛血清購自杭州四季青生物工程材料有限公司；TRIpure總RNA快速提取試劑盒購自成都百菲特科技有限公司；TUREscript 1st Strand cDNA Synthesis Kit和BestarSybrGreen qPCR mastermix購自北京艾德萊生物科技有限公司。

儀器設(shè)備：37XC009312型倒置顯微鏡，上海江南光學(xué)儀器廠；Thermo311型二氧化碳培養(yǎng)箱，Thermo Fisher Scientific；YXQ-LS-50S11型高壓滅菌鍋，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療責(zé)任設(shè)備廠；1645050型電泳儀，iMark型酶標(biāo)儀，CFX96熒光定量PCR儀和GelDoc XR+型凝膠成像系統(tǒng)，BIO-RAD公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞和病毒

按文獻(xiàn)[4]方法制備雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)。

將NDV La Sota株(病毒含量為100 EID50·mL-1)接種于9日齡雞胚尿囊腔，每胚接種0.2 mL，24 h內(nèi)死亡雞胚棄之。收集24 h后死亡雞胚尿囊液，0.22 μm濾膜過濾除菌、加雙抗(青霉素G和硫酸鏈霉素各100單位·mL-1)、分裝，-80 ℃保存。

1.2.2 NDV病毒對CEF細(xì)胞TCID50的測定

將病毒液用DMEM培養(yǎng)基對數(shù)稀釋成10-1，10-2，…，10-8。吸取每一稀釋度的病毒液100 μL加入吸去培養(yǎng)基的單層CEF 96孔板的相應(yīng)孔中，每個稀釋度重復(fù)4孔，在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中吸附1.5 h。吸棄病毒液，每孔加入200 μL維持液，培養(yǎng)72 h，在倒置顯微鏡下觀察致細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)，并記錄結(jié)果。用Reed-Muench方法計算病毒的TCID50。

1.2.3 黃芩甙對CEF細(xì)胞安全濃度的測定

用含2%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，即維持液稀釋Baicalin 至2 mg·mL-1，過濾除菌。倍比稀釋8個梯度加至吸去培養(yǎng)基的單層CEF 96孔板的相應(yīng)孔中，100 μL·孔-1，每個稀釋度重復(fù)4孔，同時設(shè)細(xì)胞對照孔和空白對照孔， 37 ℃、5%CO2培養(yǎng)。加藥后每12 h 觀察1次細(xì)胞單層完好程度， 培養(yǎng)72 h 后， 按MTT法[14]用酶標(biāo)儀測定570 nm 波長處D570值。選擇細(xì)胞D570值不顯著小于細(xì)胞對照組的單體最大質(zhì)量濃度作為該單體最大安全濃度[15]。

1.2.4 熒光定量PCR引物合成

根據(jù)文獻(xiàn)[16]提供的序列合成特異性引物，如表1。

1.2.5 黃芩甙對NDV感染的CEF細(xì)胞TLR2、TLR3、TLR4、TLR7 mRNA的調(diào)控試驗(yàn)

(1)樣品準(zhǔn)備

取處于對數(shù)期CEF細(xì)胞，用細(xì)胞生長液調(diào)整細(xì)胞密度為 5×105個·孔-1接種到 6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板。待CEF細(xì)胞長至單層時，棄舊培養(yǎng)液，加入

100TCID50的NDV，37 ℃吸附 1.5 h，棄去病毒液，黃芩甙由最大安全濃度倍比稀釋5個濃度梯度加入6孔板，并設(shè)置細(xì)胞對照和病毒對照，每組重復(fù)4次。分別于4、8、16、24、48、72 h后終止試驗(yàn)，冰上吸出培養(yǎng)液，PBS 洗3次，每孔中加入1 mL Trizol，用細(xì)胞刮刮凈細(xì)胞，儲存于-80 ℃冰箱，用于 RNA 提取。

(2)細(xì)胞總 RNA 的提取

根據(jù)TRIpure總RNA提取試劑盒說明書進(jìn)行操作，提取細(xì)胞總RNA。運(yùn)用變性瓊脂糖凝膠電泳檢測提取的總RNA的完整性，130 V穩(wěn)壓，1×TBE Buffer 1%變性瓊脂糖凝膠電泳20～30 min。

(3)總 RNA 的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

根據(jù)TUREscript 1st Strand cDNA Synthesis Kit說明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成cDNA。所得產(chǎn)物-20 ℃冰箱長期保存。

(4)實(shí)時熒光定量 PCR 反應(yīng)

取合成的cDNA作為DNA模板，每組設(shè)3個平行重復(fù)孔，按照BestarSybrGreen qPCR mastermix試劑盒說明書進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)程序?yàn)椋?5 ℃ 2 min；94 ℃ 15 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共40個循環(huán)。

1.2.6 數(shù)據(jù)分析

由 SPSS 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析和差異顯著性分析。黃芩甙對CEF細(xì)胞安全濃度的測定數(shù)據(jù)用Mean±SE表示。在進(jìn)行相對熒光定量時以18sRNA內(nèi)參基因作為標(biāo)準(zhǔn)?；蛳鄬Ρ磉_(dá)量的計算用2-ΔΔCt法。

2 結(jié)果與分析

2.1 NDV的TCID50測定結(jié)果

表1引物序列及擴(kuò)增片段長度

Table1The primers sequences and amplification fragments sizes

目的基因TargetmRNA上游引物Forwardprimers(5′-3′)下游引物Reverseprimers(5′-3′)產(chǎn)物大小Productsize/bpTLR2GATTGTGGACAACATCATTGACTCAGAGCTGCTTTCAAGTTTTCCC294TLR3TCAGTACATTTGTAACACCCCGCCGGCGTCATAATCAAACACTCC256TLR4AGTCTGAAATTGCTGAGCTCAAATGCGACGTTAAGCCATGGAAG190TLR7TTCTGGCCACAGATGTGACCCCTTCAACTTGGCAGTGCAG21918SrRNATCAGATACCGTCGTAGTTCCTTCCGTCAATTCCTTTAAGTT154

根據(jù)CPE情況計算NDV的TCID50，結(jié)果得出TCID50=10-5.5·mL-1，本試驗(yàn)使用的病毒濃度為100TCID50，故本試驗(yàn)使用的病毒濃度為10-3.5·mL-1。

2.2 黃芩甙對CEF細(xì)胞的安全濃度

根據(jù)MTT試驗(yàn)結(jié)果，選擇合適的植物單體作用于CEF細(xì)胞的藥物濃度。黃芩甙對CEF細(xì)胞的安全濃度測定結(jié)果圖 2。黃芩甙對CEF細(xì)胞的最大安全濃度為0.25 mg·mL-1。

2.3 總RNA的完整性

結(jié)果如圖3所示，總RNA的18S RNA和28S RNA條帶比較清晰、明亮、規(guī)則，并且18S RNA和28S RNA之間無拖帶，說明所提總RNA完整性較高，可用來合成cDNA。

A，黃芩甙組； B，病毒對照組； C，細(xì)胞對照組A， Baicalin group; B， NDV control group; C， cell control group圖3 總RNA變性瓊脂糖凝膠電泳Fig.3 Denatured agarose gel electrophoresis test of total RNA extracted from CEFs

2.4 黃芩甙對染毒細(xì)胞TLR2、TLR3、TLR4、TLR7 mRNA表達(dá)作用的影響

2.4.1 黃芩甙對染毒細(xì)胞TLR2 mRNA表達(dá)作用的影響

黃芩甙組和病毒對照組細(xì)胞TLR2 mRNA的表達(dá)水平起初受到抑制，極顯著低于細(xì)胞對照組(P<0.01)，在24 h內(nèi)呈上升趨勢，于24 h時極顯著高于細(xì)胞對照組(P<0.01)，最大相對表達(dá)量分別提高了149%(黃芩甙組)和67%(病毒對照組)，并在24 h后呈下降趨勢。在24 h時黃芩甙組的TLR2 mRNA的表達(dá)水平與濃度成正相關(guān)，并在濃度為1×2-2～1×2-4mg·mL-1時極顯著高于病毒對照組(P<0.01)，在濃度為1×2-5mg·mL-1時顯著高于病毒對照組(P<0.05)，在濃度為1×2-5mg·mL-1時與病毒對照組無顯著差異。故黃芩甙能夠促進(jìn)NDV感染細(xì)胞TLR2 mRNA的表達(dá)且促進(jìn)能力與濃度呈正相關(guān)，從而能夠通過免疫調(diào)節(jié)發(fā)揮抗病毒作用(圖4-A)。

2.4.2 黃芩甙對染毒細(xì)胞TLR3 mRNA表達(dá)作用的影響

黃芩甙組和病毒對照組細(xì)胞TLR3 mRNA的表達(dá)水平呈波動性變化，無明顯規(guī)律。而不同濃度的黃芩甙組的TLR3 mRNA表達(dá)水平與病毒對照組無顯著差異(P>0.05)。故黃芩甙對NDV感染細(xì)胞TLR3 mRNA的表達(dá)無顯著影響(圖4-B)。

2.4.3 黃芩甙對染毒細(xì)胞TLR4 mRNA表達(dá)作用的影響

黃芩甙組和病毒對照組細(xì)胞TLR4 mRNA的表達(dá)水平起初受到抑制，極顯著低于細(xì)胞對照組(P<0.01)，在24 h內(nèi)呈上升趨勢，于24 h時極顯著高于細(xì)胞對照組(P<0.01)，最大相對表達(dá)量分別提高了93%(黃芩甙組)和52%(病毒對照組)并在24 h后呈下降趨勢。在24 h時黃芩甙組的TLR4 mRNA的表達(dá)水平與濃度成正相關(guān)，并在濃度為1×2-2～1×2-4mg·mL-1時極顯著高于病毒對照組(P<0.01)，在濃度為1×2-5mg·mL-1時顯著高于病毒對照組(P<0.05)，在濃度為1×2-6mg·mL-1時與病毒對照組無顯著差異。故黃芩甙能夠促進(jìn)NDV感染細(xì)胞TLR4 mRNA的表達(dá)且促進(jìn)能力與濃度呈正相關(guān)，從而能夠通過免疫調(diào)節(jié)發(fā)揮抗病毒作用(圖4-C)。

在同一時間，無相同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)，無相同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)At the same time, the difference between data with different capital letter is very significant(P<0.01)， and the difference between data with different small letters is significant (P<0.05)圖4 不同處理組CEF細(xì)胞內(nèi)TLR2(A)、TLR3(B)、TLR4(C)、TLR7(D) mRNA的表達(dá)水平Fig.4 Expression levels of TLR2(A)、TLR3(B)、TLR4(C)、TLR7(D) in NDV-infected CEFs of different treatment groups

2.4.4 黃芩甙對染毒細(xì)胞TLR7 mRNA表達(dá)作用的影響

黃芩甙組和病毒對照組細(xì)胞TLR7 mRNA的表達(dá)水平起初受到抑制，極顯著低于細(xì)胞對照組(P<0.01)，在16 h內(nèi)呈上升趨勢，于16 h時極顯著高于細(xì)胞對照組(P<0.01)，相對表達(dá)量提高了約120%，并在16 h后呈下降趨勢。不同濃度黃芩甙組的TLR7 mRNA表達(dá)水平與病毒對照組無顯著差異。故黃芩甙對NDV感染細(xì)胞TLR7 mRNA的表達(dá)無顯著影響(圖4-D)。

3 討論

了解NDV感染和免疫系統(tǒng)的相互作用對于理解新城疫的發(fā)病機(jī)制是十分重要的。TLRs是細(xì)胞對抗病原入侵的首道防線，能夠作為模式識別受體識別病原。到目前為止，已經(jīng)有13種TLRs被發(fā)現(xiàn)，它們可以調(diào)節(jié)產(chǎn)生各種炎性細(xì)胞因子、化學(xué)增活素和干擾素[17]。其中，TLR2、TLR3、TLR4和TLR7在因病毒感染產(chǎn)生的天然免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要的作用。

TLR2可以激活MyD88信號通路，激活NF-κB和AP-1轉(zhuǎn)錄因子和干擾素調(diào)節(jié)因子(IRFs)，從而協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)宿主對微生物感染的防御[18]。越來越多的證據(jù)表明，TLR/MyD88信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在機(jī)體對微生物病原體的先天免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答的激活發(fā)揮著核心作用[19-20]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在NDV感染早期，TLR2 mRNA的表達(dá)被NDV抑制，但隨著NDV的增殖，TLR2 mRNA的表達(dá)量增加并于24 h達(dá)峰值。故NDV能夠激活TLR2的復(fù)制，從而激活MyD88信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路協(xié)同調(diào)節(jié)宿主防御病毒。本研究中，黃芩甙能增加TLR2 mRNA在NDV感染細(xì)胞的表達(dá)并增強(qiáng)上述免疫作用。

TLR3屬于I型跨膜蛋白，是存在于細(xì)胞內(nèi)的富含亮氨酸的重復(fù)序列(LRR)，并且是一個Toll-IL-1受體(TIR)的同源信號域[21]。TLR3受體可以識別體外轉(zhuǎn)錄的dsRNA[22]。Cheng等[23]的研究結(jié)果表明，TLR3能夠積極參與NDV感染時的前期炎癥反應(yīng)，并且導(dǎo)致抗病毒細(xì)胞因子分泌。本研究結(jié)果表明，NDV感染可引起TLR3 mRNA表達(dá)的變化，但它沒有規(guī)律，并且黃芩甙對TLR3 mRNA在NDV感染的細(xì)胞中的表達(dá)無明顯影響。

和TLR2一樣，TLR4也能夠激活MyD88信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[24]。一些TRIF相關(guān)的接頭分子(TRAM)只能被TLR4所利用，MyD88適配器是一個連接適配器，聯(lián)通TLR4和TRAM[25]。受體復(fù)合物的形成激活信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，產(chǎn)生 NF-κB、IRF3、IRF5 和IRF7轉(zhuǎn)錄因子，導(dǎo)致特異性免疫途徑基因表達(dá)從而調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫機(jī)能[17]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在NDV感染早期，TLR4 mRNA的表達(dá)被NDV抑制。但隨著NDV的增殖，TLR4 mRNA的表達(dá)量增加并于24 h達(dá)峰值。故NDV能夠激活TLR4的復(fù)制。TLR4可以激活MyD88信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路協(xié)同調(diào)節(jié)宿主防御病毒。本研究中，黃芩甙能增加TLR4 mRNA在NDV感染細(xì)胞的表達(dá)，并增強(qiáng)上述免疫作用。

TLR7能夠識別病毒的ssRNA，并且是機(jī)體對ssRNA病毒外周免疫反應(yīng)的重要媒介[26]。它主要參與促炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生，但具體機(jī)制尚不清楚[27]。本研究結(jié)果表明，在NDV感染早期，TLR7 mRNA的表達(dá)被NDV抑制，但隨著NDV的增殖，TLR7 mRNA的表達(dá)量增加并于16 h達(dá)峰值。故NDV能夠激活TLR7的復(fù)制從而調(diào)節(jié)宿主防御病毒。本研究中，黃芩甙對TLR7基因在病毒感染細(xì)胞的表達(dá)無明顯影響。

眾所周知，TLR2和TLR4均可以參與機(jī)體對病毒糖蛋白誘導(dǎo)產(chǎn)生促炎癥反應(yīng)[17]。在機(jī)體中，TLR2是TLR4的輔助受體，TLR2和TLR4基因的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系[28]。在本研究中，TLR2和TLR4的mRNA具有相似的表達(dá)變化趨勢，在NDV感染早期，其mRNA的表達(dá)均被NDV抑制。但隨著NDV的增殖其mRNA表達(dá)量均增加并于24 h達(dá)峰值。這是與前人的研究結(jié)果一致。

本研究結(jié)果表明，NDV感染影響了TLR2、TLR3、TLR4、TLR7 mRNA的表達(dá)，黃芩甙可以極顯著地促進(jìn)NDV感染細(xì)胞TLR2和TLR4 mRNA的表達(dá)，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，具有抗NDV的功能。

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EffectofBaicalinonexpressionofToll-likereceptor2，3，4，7inNewcastlediseasevirus-infectedCEFs

XU Ruiguang1， JIA Yan2， HU Liwen1， WENG Jiahua1， DENG Junliang1， HU Yanchun1，*

(1.KeyLaboratoryofAnimalDiseaseandHumanHealthofSichuanProvince，CollegeofVeterinaryMedicine，SichuanAgriculturalUniversity，Chengdu611130，China; 2.AgriculturalandEnvironmentalBranch，JiaxingVocationalTechnicalCollege，Jiaxing314036，China)

The purpose of this study was to investigate the changes of the expression ofTLR2，TLR3，TLR4 andTLR7 gene in NDV-infected cells and the effect of Baicalin on them. NDV infection of chicken embryo fibroblasts (CEFs) was performed. Cytotoxicity of Baicalin was tested by the MTT method. Quantitative expressions ofTLR2，TLR3，TLR4 andTLR7 gene were analyzed by real-time fluorescence quantitative PCR (RTFQ PCR). The results showed that the expressions ofTLR2，TLR4 andTLR7 genes were suppressed by NDV in the early infection stage， while their expression were enhanced with the replication of NDV and the expression ofTLR2 andTLR4 gene reached the peak level at 24 h. As well as the expression ofTLR7 gene reached the peak level at 16 h. The infection of NDV could change the expression ofTLR3 gene， but it was not regular. Besides， Baicalin could increase the expression ofTLR2 andTLR4 genes in NDV-infected cells and show the dosage-dependence， which enhanced immune function and possessed anti-NDV activity.

Baicalin;Newcastlediseasevirus(NDV); Toll-like receptors (TLRs)；real-time fluorescence quantitative PCR (RTFQ PCR)

浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報ActaAgriculturaeZhejiangensis， 2017，29(12): 1986-1993

http://www.zjnyxb.cn

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10.3969/j.issn.1004-1524.2017.12.05

2017-05-22

四川省科技支撐項(xiàng)目(2015SZ0201)；教育部創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(IRT0848)；四川省學(xué)術(shù)和技術(shù)帶頭人培養(yǎng)基金項(xiàng)目(2014，2016)

許銳光(1993—)，女，河北滄州人，碩士研究生，研究方向?yàn)閯游锃h(huán)境公害性疾病。E-mail: 597033704@qq.com

*通信作者，胡延春，E-mail: hychun114@163.com

S831.7

A

1004-1524(2017)12-1986-08

(責(zé)任編輯盧福莊)