胡振波 趙 剛 劉惟莞 夏 純 丁 虹 黃志軍

(1 健民藥業(yè)集團(tuán)藥物研究院，武漢，430052； 2 武漢大學(xué)藥學(xué)院，武漢，430071)

龍牡壯骨顆粒對(duì)糖皮質(zhì)激素所致大鼠骨質(zhì)疏松癥作用研究

胡振波1趙 剛1劉惟莞2夏 純1丁 虹2黃志軍1

(1 健民藥業(yè)集團(tuán)藥物研究院，武漢，430052； 2 武漢大學(xué)藥學(xué)院，武漢，430071)

目的：探討龍牡壯骨顆粒對(duì)糖皮質(zhì)激素所致骨質(zhì)疏松癥大鼠的治療效果。方法：采用低鈣飼料飼養(yǎng)加肌注氫化潑尼松的方法制備大鼠骨質(zhì)疏松癥模型。造模成功后，復(fù)方組、中藥成分組、化藥成分組、模型組大鼠分別灌胃龍牡壯骨顆粒復(fù)方、龍牡壯骨顆粒中藥成分、龍牡壯骨顆?；幊煞旨罢麴s水，正常對(duì)照組大鼠給予正常飼料飼養(yǎng)，不予造模。給藥35 d后測(cè)定相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果：復(fù)方組大鼠體重、胸腺指數(shù)、血鈣、血磷、股骨干重、骨鈣、干骺端皮質(zhì)外徑、骨密度、骨干髓質(zhì)密度、皮質(zhì)密度、骨密度等指標(biāo)明顯優(yōu)于模型組，尿鈣含量則顯著低于模型組。結(jié)論：龍牡壯骨顆粒對(duì)糖皮質(zhì)激素所致骨質(zhì)疏松癥大鼠有良好治療效果。

龍牡壯骨顆粒；大鼠；骨質(zhì)疏松癥；糖皮質(zhì)激素

龍牡壯骨顆粒是健民藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司獨(dú)家品種，已上市30余年，主要用于治療和預(yù)防小兒佝僂病、軟骨?。粚?duì)小兒多汗、夜驚、食欲不振、消化不良、發(fā)育遲緩等癥以及反復(fù)呼吸道感染也有治療作用[1-2]。前期已有大量研究數(shù)據(jù)驗(yàn)證了該品種對(duì)小兒佝僂病的療效[3-4]，但對(duì)骨質(zhì)疏松癥的治療作用尚無(wú)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，僅有一些臨床觀察報(bào)道[5-6]。為了考察龍牡壯骨顆粒對(duì)骨質(zhì)疏松癥的作用情況，本研究采用低鈣飼料飼養(yǎng)加糖皮質(zhì)激素氫化潑尼松肌注的方式制作大鼠骨質(zhì)疏松癥模型[7-8]，并考察龍牡壯骨顆粒對(duì)骨質(zhì)疏松癥大鼠各項(xiàng)指標(biāo)的影響情況，以期探討該產(chǎn)品治療骨質(zhì)疏松癥的療效。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 龍牡壯骨顆粒、龍牡壯骨顆粒中藥組分、龍牡壯骨顆?；幗M分均由健民藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司提供(批號(hào)：010825)。氫化潑尼松，上海第九制藥廠生產(chǎn)(批號(hào)：010501)。各項(xiàng)生化指標(biāo)試劑盒均為上海申能-德賽診斷技術(shù)有限公司產(chǎn)品，其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 儀器 AEROSET型全自動(dòng)生化分析儀(美國(guó)雅培公司)；LGS-4-1型馬福爐(上海第三實(shí)驗(yàn)電爐廠)；TAS9862型乙炔火焰原子吸收光譜儀(北京普析通用儀器有限公司)；HPIAS-2000型圖像分析系統(tǒng)(千屏影像工程公司)；UV-120型紫外分光光度計(jì)(日本島津)。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD雄性成年清潔級(jí)大鼠，體重(242±27)g，由湖北省衛(wèi)生防疫站提供，于實(shí)驗(yàn)前飼養(yǎng)5 d，以適應(yīng)本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室環(huán)境。

1.4 方法 60只大鼠隨機(jī)分為五組，每組12只，分別為正常對(duì)照組、模型組、復(fù)方組、中藥成分組、化藥成分組。其中，正常對(duì)照組給予正常飼料(含鈣0.46%)飼養(yǎng)，飲自來(lái)水。其他四組均采用低鈣飼料(含鈣0.16%)飼養(yǎng)、飲用蒸餾水，并肌注氫化潑尼松4.5 mg/kg，每周肌注2次，制作骨質(zhì)疏松模型。在造模的基礎(chǔ)上，復(fù)方組灌胃給予龍牡壯骨顆粒，(2.7 g生藥+3.3 μg維生素D2+10 mg葡萄糖酸鈣+2.5 mg乳酸鈣)/kg，1次/d；中藥成分組給予龍牡壯骨顆粒中藥成分(2.7 g生藥/kg)，1次/d；化藥成分組給予(3.3 μg維生素D2+10 mg葡萄糖酸鈣+2.5 mg乳酸鈣)/kg，1次/d；正常對(duì)照組和模型組則給予10 mL/kg蒸餾水灌胃。給藥35 d后測(cè)定如下指標(biāo)：

體重：觀察實(shí)驗(yàn)前和實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)體重變化。

胸腺、脾、腎指數(shù)：取胸腺、脾臟、腎臟稱重，根據(jù)公式計(jì)算臟器指數(shù)：臟器指數(shù)=臟器重量/體重(mg/g)。

尿鈣：實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，收集每只大鼠24 h尿液，用鄰甲酚肽絡(luò)合酮比色法按照試劑盒說(shuō)明書(shū)方法測(cè)定尿鈣排泄量[9]。

血清鈣、磷：實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，以3%戊巴比妥30 mg/kg腹腔注射麻醉動(dòng)物，頸動(dòng)脈取血，3 000 r/min分離血清，測(cè)定血清鈣含量；以磷鉬酸法按照試劑盒說(shuō)明書(shū)方法測(cè)定血清磷含量[10]；以放射免疫法測(cè)定血清骨鈣素含量[11]。

股骨X線片采用HPIAS-2000型圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析，得出骨密度相關(guān)參數(shù)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，經(jīng)方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)骨質(zhì)疏松癥大鼠體重的影響 結(jié)果如表1所示，由于皮質(zhì)激素的負(fù)氮平衡作用可致體重不增或下降，模型組大鼠體重增加明顯要低于正常對(duì)照組大鼠，但相對(duì)于模型組，復(fù)方組及中藥成分組大鼠體重增長(zhǎng)明顯(P<0.05)，化藥成分組與模型組差異則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 龍牡壯骨顆粒及其中藥、化藥組分 對(duì)大鼠體重的影響

注：與正常組比較，**P<0.01；與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01

2.2 對(duì)骨質(zhì)疏松癥大鼠臟器指數(shù)的影響 各組動(dòng)物臟器指數(shù)結(jié)果見(jiàn)表2。糖皮質(zhì)激素可明顯降低大鼠脾臟、胸腺和骨指數(shù)(與正常對(duì)照組比較，P<0.01)，對(duì)腎臟則無(wú)明顯改變(P>0.05)。復(fù)方組及其中藥成分組能逆轉(zhuǎn)糖皮質(zhì)激素所致大鼠的胸腺萎縮，對(duì)脾臟及骨指數(shù)有一定的改善作用，但與模型組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，化藥成分組與模型組則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.3 對(duì)骨質(zhì)疏松癥大鼠血清鈣、磷及尿鈣的影響 結(jié)果如表3所示。與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠血鈣及血磷含量明顯降低，尿鈣含量明顯升高。復(fù)方組及中藥成分組、化藥成分組均能使糖皮質(zhì)激素所致骨質(zhì)疏松癥大鼠血清鈣、磷含量顯著升高，尿鈣顯著降低，表明可明顯減少鈣的丟失，有利于新骨的形成。

2.4 對(duì)骨質(zhì)疏松癥大鼠股骨的影響 糖皮質(zhì)激素能使大鼠骨干重及骨鈣含量明顯下降(見(jiàn)表4，模型組與正常對(duì)照組比較，P<0.01)，復(fù)方組及中藥成分組、化藥成分組均能使骨質(zhì)疏松癥大鼠骨干重及骨鈣含量顯著升高(與模型組比較，P<0.01)。

表2 龍牡壯骨顆粒及其中藥、化藥組分對(duì)大鼠脾、胸腺、腎及骨指數(shù)的影響

注：與正常組比較，**P<0.01；與模型組比較，△△P<0.01

表3 龍牡壯骨顆粒及其中藥、化藥組分對(duì)骨質(zhì)疏松癥 大鼠血清鈣、磷及尿鈣含量的影響

注：與正常組比較，**P<0.01；與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01

表4 龍牡壯骨顆粒及其中藥、化藥組分對(duì)骨質(zhì)疏松癥大鼠股骨的影響

注：與正常組比較，**P<0.01；與模型組比較，△△P<0.01

2.5 骨質(zhì)疏松癥大鼠股骨X線片圖像分析 結(jié)果如表5所示。無(wú)論干骺端還是骨干糖皮質(zhì)激素均導(dǎo)致骨密度降低，模型組與正常對(duì)照組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。復(fù)方組及中藥成分組、化藥成分組均可使干骺端的骨密度、皮質(zhì)外徑，骨干平均骨密度、平均皮質(zhì)密度、平均髓質(zhì)密度有顯著性改善。

表5 龍牡壯骨顆粒及其中藥、化藥組分對(duì)骨質(zhì)疏松癥大鼠股骨密度參數(shù)的影響

注：與正常組比較，**P<0.01；與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01

3 討論

龍牡壯骨顆粒由13味中藥及維生素D2、葡萄糖酸鈣、乳酸鈣等組成，方中黃芪健脾補(bǔ)氣、升陽(yáng)固表止汗，黨參、白術(shù)(炒)、山藥、茯苓、大棗益氣健脾、補(bǔ)血益氣，雞內(nèi)金(炒)消食健脾，龍骨、牡蠣(煅)鎮(zhèn)驚安神、斂汗固精，五味子(醋制)斂肺滋腎，生津收汗，龜甲(醋制)滋陰潛陽(yáng)，益腎強(qiáng)骨，輔以麥冬、甘草，以養(yǎng)胃陰，調(diào)和脾胃。全方合用，脾腎雙補(bǔ)，共奏健脾益氣，補(bǔ)腎益精，填精益髓，培元固本之功，此外，該品還含有維生素D2及葡萄糖酸鈣、乳酸鈣等成分，適合于骨質(zhì)疏松癥的治療[1]。

研究結(jié)果顯示，龍牡壯骨顆?？娠@著增加糖皮質(zhì)激素所致骨質(zhì)疏松癥大鼠的體重、胸腺指數(shù)、血鈣、血磷、股骨干重、骨鈣及干骺端的骨密度、皮質(zhì)外徑，骨干骨密度、皮質(zhì)密度、髓質(zhì)密度等，并顯著降低尿鈣含量，由此，該品可顯著增加鈣的利用率，促進(jìn)新骨的形成與骨生長(zhǎng)。此外，龍牡壯骨顆粒中藥成分組也有類似作用，提示該產(chǎn)品中藥成分可獨(dú)立治療骨質(zhì)疏松癥。

龍牡壯骨顆?；幊煞纸M對(duì)骨質(zhì)疏松癥大鼠的體重及脾、胸腺、腎及骨等臟器指數(shù)均無(wú)影響，因此，僅通過(guò)灌胃給予維生素D2+葡萄糖酸鈣+乳酸鈣對(duì)于骨質(zhì)疏松癥的治療效果不明顯，尤其是對(duì)體重及臟器指數(shù)幾無(wú)療效，但對(duì)于增加血鈣、血磷含量，降低尿鈣含量，增加股骨干重與骨鈣含量以及增加骨密度等方面有一定效果。然而，龍牡壯骨顆粒相對(duì)于化藥成分組在動(dòng)物整體機(jī)能的改善方面表現(xiàn)出了明顯的優(yōu)勢(shì)，尤其是體重的增加及免疫力的提升等方面，顯示出了更為全面的療效。

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StudyonEffectsofLongmuZhuangguGranuleinTreatingGlucocorticoid-resultedRatOsteoporosis

Hu Zhenbo1, Zhao Gang1, Liu Weiwan2, Xia Chun1, Ding Hong2, Huang Zhijun1

(1AcademyofPharmaceuticalResearch,JianminPharmaceuticalGroupCo.,LTD,Wuhan430052,China; 2SchoolofPharmacy,WuhanUniversity,Wuhan430071,China)

Objective:To investigate the effects of Longmu Zhuanggu Granule on glucocorticoid-induced osteoporosis rats.MethodsRat osteoporosis models were prepared with low calcium feed and muscle injection with hydride prednisone. Compound group, Chinese medicine group, chemical medicine group, and model group of rats were given Longmu Zhuanggu Granule, its Chinese medicine, its chemical medicine, and distilled water respectively by intragastric administration. Normal control rats were feed with normal fodder. Related indicators were detected after 35 days of administration.ResultsIndicators of the compound group of rats, such as body weight, thymus index, calcium and phosphorus in blood, femoral weight, bone calcium, femoral epiphysis end diameter of the cortex, bone mineral density, the density of backbone medulla, cortical density, bone mineral density, etc, were significantly superior to the model group. Urinary calcium of the compound group of rats was significantly lower than that of the model group.ConclusionLongmu Zhuanggu Granule possesses a well therapeutic effect on glucocorticoid-induced osteoporosis.

Longmu Zhuanggu Granule; Rat; Osteoporosis; Glucocorticoid

R285.5

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2017.12.052

武漢市高新技術(shù)成果轉(zhuǎn)化及產(chǎn)業(yè)化計(jì)劃(201260513159)——中藥兒科系列化新產(chǎn)品的產(chǎn)業(yè)化開(kāi)發(fā)

胡振波(1971.01—)，男，碩士，高級(jí)工程師，研究方向：中藥藥理學(xué)研究

黃志軍(1972.09—)，男，博士，副教授，研究方向：藥理學(xué)研究，Tel:(027)84520229，E-mail：542354589@qq.com

(2017-11-10收稿 責(zé)任編輯：徐穎)