萬曉華，劉向祎，王凡，文江平，郭擁軍，王勝來

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京同仁醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100730)

病毒性肝炎及肝癌患者血清GP73的表達(dá)及意義

萬曉華，劉向祎，王凡，文江平，郭擁軍，王勝來

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京同仁醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100730)

目的探討血清高爾基體蛋白73(GP73)在病毒性肝炎及肝癌患者中的表達(dá)及臨床意義。方法病例資料來源于2013-2015年首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京同仁醫(yī)院。應(yīng)用雙抗體夾心ELISA方法測定192例健康對(duì)照組、118例乙型肝炎組、131例丙型肝炎組和78例肝癌組患者的血清GP73水平。結(jié)果乙型肝炎組、丙型肝炎組和肝癌組患者的GP73濃度均明顯高于健康對(duì)照組，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；在乙型肝炎患者中，HBeAg陽性組GP73濃度和HBV-DNA含量明顯高于HBeAg陰性組，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；肝癌組患者的GP73與甲胎蛋白(AFP)呈正顯著相關(guān)性(r=0.433，P＜0.01)。結(jié)論 與健康對(duì)照組比較，GP73在不同肝炎組及肝癌組患者中均明顯增高，且隨著疾病進(jìn)展，GP73有明顯增高趨勢，表明血清GP73測定在病毒性肝炎及肝癌的診斷及監(jiān)測疾病進(jìn)程中具有重要意義。

高爾基體蛋白73；病毒性肝炎；乙型肝炎；丙型肝炎；肝癌

高爾基體蛋白73(Golgi protein-73。GP73)是新近發(fā)現(xiàn)的一種肝細(xì)胞癌相關(guān)蛋白[1-2]。肝細(xì)胞癌是一種惡性程度高、進(jìn)展快、預(yù)后差的常見的惡性腫瘤，它的發(fā)生與乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染密切相關(guān)。在我國，HBV感染是肝臟疾病的主要病因，大約7.8%的人口攜帶HBV，近年來，HCV感染也呈日益增高的態(tài)勢[3-4]。本研究應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法，分別檢測了乙型肝炎組(包括乙型肝炎HBeAg陽性組和乙型肝炎HBeAg陰性組)，丙型肝炎組、肝癌組和健康對(duì)照組的血清GP73水平，探討GP73在不同病例組中的GP73的表達(dá)及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 病例資料來源于2013-2015年首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京同仁醫(yī)院。本研究病例組分為三組，分別選取經(jīng)臨床確診的乙型肝炎組患者118例(包括乙型肝炎HBeAg陽性組58例和乙型肝炎HBeAg陰性組60例)、丙型肝炎組患者131例和肝癌組患者78例。其中乙型肝炎HBeAg陽性是指血清學(xué)檢測結(jié)果為乙肝表面抗原(HBsAg)陽性、乙型肝炎表面抗體(HBsAb)陰性、乙型肝炎e抗原(HBeAg)陽性、乙型肝炎e抗體(HBeAb)陰性、乙型肝炎核心抗體(HBcAg)陽性的樣本，乙型肝炎HBeAg陰性是指血清學(xué)檢測結(jié)果為HBsAg陽性、HBsAb陰性、HBeAg陰性、HBeAb陽性、HBcAg陽性樣本。健康對(duì)照組來源于本院體檢科的健康對(duì)照人群，選取192例，經(jīng)臨床確認(rèn)為身體健康者，包括肝臟生化指標(biāo)正常、無肝臟疾病史、無酗酒史、無病毒性肝炎史及B超顯示肝臟正常者。本研究健康對(duì)照組、乙型肝炎組、丙型肝炎組和肝癌組的中位年齡(范圍)分別為43(21～56)歲、38(18～72)歲、41(22～62)歲和44(27～71)歲，性別構(gòu)成情況男性/女性分別為88/104、66/52、72/59和46/32。

1.2 檢測方法

1.2.1 樣本采集 采用帶有惰性分離膠的進(jìn)口真空采血管分別抽取對(duì)照組和患者空腹靜脈血4 mL，自然凝集30 min，室溫4 000 r/min離心15 min分離血清，-80℃保存待測。

1.2.2 血清學(xué)檢測方法血清GP73檢測試劑盒由北京熱景生物技術(shù)股份有限公司(北京)提供高爾基體蛋白73(GP73)定量測定試劑盒，采用雙抗體夾心ELISA方法檢測；乙型肝炎及丙型肝炎樣本均采用雅培i2000SR發(fā)光免疫分析儀及配套試劑盒檢測，乙型肝炎檢測項(xiàng)目包括乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒表面抗體(HBsAb)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒e抗體(HBeAb)、乙型肝炎病毒核心抗體(HBcAb)。丙型肝炎檢測丙型肝炎抗體；乙型肝炎HBV DNA含量檢測試劑盒由中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司(廣州)提供商品化試劑盒，采用ABI7300熒光實(shí)時(shí)定量PCR系統(tǒng)(Applied Biosystems,CA，USA)；肝癌組血清AFP測定采用UniCel DXI 800全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀，血清AFP檢測試劑和相應(yīng)校準(zhǔn)品均由美國貝克曼庫爾特公司提供。所有操作嚴(yán)格按照儀器及使用說明進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以中位數(shù)和(或)百分位數(shù)表示，多組間比較采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，兩組間比較采用Mann-Whitney檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Spearman相關(guān)性分析，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 血清GP73在不同組的分布特征 192例健康對(duì)照組的GP73濃度中位數(shù)(95%可信區(qū)間)為39.90(19.57～99.72)ng/mL，乙 型 肝 炎 組 為 58.35(24.25～210.08)ng/mL，丙型肝炎組為 67.30(12.54～290.56)ng/mL，肝癌組為200.40(31.59～556.79)ng/mL。與健康對(duì)照組比較，乙型肝炎組，丙型肝炎組和肝癌組患者的GP73濃度均明顯高于對(duì)照組，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。此外，乙型肝炎組和丙型肝炎組患者的血清GP73濃度均明顯低于肝癌組，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，見表1。

表1 血清GP73濃度百分位數(shù)在不同組的分布特征(ng/mL，中位數(shù))

2.2 乙型肝炎HBeAg陽性及HBeAg陰性組患者的血清GP73及HBV DNA含量比較 乙型肝炎HBeAg陽性組患者的血清GP73濃度中位數(shù)(95%可信區(qū)間)為66.65(20.16～251.57)ng/mL，乙肝HBeAg陰性組血清GP73濃度中位數(shù)(95%可信區(qū)間)為48.85(21.46～154.39)ng/mL。如表2所示，健康對(duì)照組、乙型肝炎HBeAg陽性組及HBeAg陰性組血清GP73濃度差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。兩兩比較后發(fā)現(xiàn)，HBeAg陽性組和HBeAg陰性組GP73濃度均明顯高于對(duì)照組，差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，且GP73濃度HBeAg陽性組明顯高于HBeAg陰性組，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

表2 乙型肝炎不同組別血清GP73和HBV DNA含量的分布特征

本研究中，乙型肝炎HBeAg陽性組明顯高于HBeAg陰性組HBV DNA含量，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。HBeAg陽性組HBV DNA含量中位數(shù)(95%可信區(qū)間)為5.41×106(0～7.97×108)IU/mL，其中有5例HBV DNA檢測陰性，53例HBV DNA檢測陽性。HBeAg陰性組HBV DNA含量中位數(shù)(95%可信區(qū)間)是 2.85×102(0～1.89×108)IU/mL，其中有 31例HBV DNA檢測陰性，19例HBV DNA檢測陽性。

2.3 血清GP73與乙型肝炎HBV DNA含量的關(guān)系 118例乙肝病例中，HBV-DNA陰性組46例，HBV DNA陽性組72例。HBV DNA陰性組的GP73濃度中位數(shù)(95%可信區(qū)間)為55.65(24.70～205.01)ng/mL，HBV DNA陽性組的GP73濃度中位數(shù)(95%可信區(qū)間)是59.30(17.73～233.79)ng/mL。與HBV-DNA陰性組比較，GP73濃度在HBV DNA陽性組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.4 肝癌組GP73和AFP表達(dá)的相關(guān)性 本研究分別檢測了78例肝癌組血清GP73和AFP濃度，GP73濃度中位數(shù)(95%可信區(qū)間)是200.40(31.59～556.79)ng/mL，AFP濃度中位數(shù)(95%可信區(qū)間)是131.51(1.80～8.75×104)ng/mL。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)GP73和AFP呈明顯的正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)為0.433，P＜0.01)。

3 討論

GP73是一種常駐高爾基體Ⅱ型跨膜糖蛋白，在正常人中僅在膽囊上皮細(xì)胞中表達(dá)，在肝細(xì)胞中幾乎不表達(dá)；肝細(xì)胞受到病毒感染可引起GP73的高表達(dá)，肝癌患者中也發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞GP73表達(dá)量明顯上調(diào)且血清的GP73含量也顯著增高[1,5-6]。本研究表明，與健康對(duì)照組比較，GP73在肝癌組及各乙型肝炎組及丙型肝炎組均明顯增高。

對(duì)于慢性乙型肝炎患者，本研究及文獻(xiàn)[7-9]表明，血清GP73含量明顯高于健康對(duì)照組。許正鋸等[7]在對(duì)573例慢性HBV感染者研究發(fā)現(xiàn)血清GP73水平與慢性HBV感染者病情進(jìn)展呈正相關(guān)關(guān)系，在不同血清HBV DNA含量之間比較，患者血清GP73水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與本研究結(jié)果一致。鹿雷明[8]研究發(fā)現(xiàn)GP73是反映HBV相關(guān)性肝病患者進(jìn)展重要指標(biāo)，并與肝損害程度顯著相關(guān)。Xu等[9]對(duì)253例不同病理類型的慢性乙型肝炎患者研究發(fā)現(xiàn)，GP73是一個(gè)反映肝炎疾病進(jìn)展程度的有效標(biāo)志物，血清GP73的水平與HBV DNA的復(fù)制水平并不相關(guān)，這與本研究一致。但Xu等[9]對(duì)比HBeAg陽性的乙型肝炎和HBeAg陰性的乙型肝炎血清GP73含量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而本研究中，乙型肝炎HBeAg陽性組的GP73水平顯著高于HBeAg陰性組。

對(duì)于丙型肝炎患者，國外有報(bào)道GP73在含量明顯高于健康對(duì)照[10-11]，但國內(nèi)鮮有文獻(xiàn)報(bào)道。Riener等[10]研究發(fā)現(xiàn)HCV感染者GP73明顯高于健康對(duì)照組，并提示GP73是HCV感染肝臟疾病進(jìn)展的有效標(biāo)志物。Hu等[11]通過細(xì)胞培養(yǎng)研究發(fā)現(xiàn)，HCV感染的細(xì)胞GP73分泌量增加，當(dāng)GP73含量增加時(shí)，HCV的復(fù)制量也進(jìn)一步加劇，反之，GP73不表達(dá)或表達(dá)量很少時(shí)，HCV復(fù)制受抑制，這一現(xiàn)象從細(xì)胞及蛋白水平暗示了HCV和GP73正相關(guān)的作用機(jī)制，從而為GP73在HCV患者的抗病毒治療中的作用提供了新的思路。

肝癌是第五大常見癌癥和癌癥的第三個(gè)死亡的主要原因之一，慢性乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒(HCV)感染是肝癌發(fā)生發(fā)展的重要病因之一。AFP是肝癌診斷的重要血清標(biāo)志物[12-13]。本研究發(fā)現(xiàn)，肝癌組GP73明顯高于健康對(duì)照組，且GP73和AFP有明顯的相關(guān)性。血清GP73有望成為一個(gè)有用的指標(biāo)，用以監(jiān)測疾病的進(jìn)展和HBV或HCV感染，進(jìn)而早期預(yù)防肝癌的指標(biāo)[3]。多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)GP73和AFP聯(lián)合檢測可明顯提高診斷效率，有利于原發(fā)性肝癌的診斷與鑒別診斷[13-15]。付超等[16]研究發(fā)現(xiàn)，肝細(xì)胞癌患者不同治療階段，GP73也略有不同，原發(fā)性肝細(xì)胞癌治療后組患者血清GP73含量明顯低于治療前組，而復(fù)發(fā)患者和肝轉(zhuǎn)移癌患者沒有明顯差異，提示GP73對(duì)肝癌的預(yù)后和復(fù)發(fā)有輔助診斷的價(jià)值。

本研究存在以下局限：(1)各組病例數(shù)相對(duì)較少；(2)丙型肝炎組未能同時(shí)檢測HCV RNA的情況，從而無法探究在丙型肝炎組血清GP73含量與HCV RNA的關(guān)系；(3)由于肝癌組病例數(shù)較少，本研究未對(duì)肝癌組依據(jù)病理分級(jí)進(jìn)一步分組比較。對(duì)于GP73在病毒性肝炎及肝癌中的臨床意義，更深入的研究依賴于病例數(shù)的進(jìn)一步加大及病理分組的進(jìn)一步細(xì)化。

綜上所述，與健康對(duì)照組比較，GP73在不同肝病病例組均有明顯增高，尤其在肝癌組，增高幅度更為明顯。GP73有望成為乙型肝炎和丙型肝炎等肝癌高危人群篩查的良好指標(biāo)。

[1]Wang Y,Yang H,Xu H,et al.Golgi protein73,not Glypican-3,may be a tumor marker complementary toalpha-Fetoprotein for hepatocellular carcinoma diagnosis[J].J Gastroenterol Hepatol,2014,29(3):597-602.

[2]Yang J,Li J,Dai W,et al.Golgi protein73 as a biomarker for hepatocellular carcinoma:A diagnosticmeta-analysis[J].Exp Ther Med,2015,9(4):1413-1420.

[3]Zhang Y,Xi Y,Fang J,et al.Identification and characterization of monoclonal antibodies against GP73 for use as a potential biomarker in liver cancer screening and diagnosis[J].J Immunoassay Immunochem,2016,37(4):390-406.

[4] 滿冬亮,王齊暉.不同肝臟疾病血清GP73、AFP-L3、AFP及AFU水平的表達(dá)[J].肝臟,2016,21(5):368-371.

[5]Wang CH,Wey KC,Mo LR,et al.Current trends and recent advances in diagnosis,therapy,and prevention of hepatocellular carcinoma[J].Asian Pac J Cancer Prev,2015,16(9):3595-3604.

[6]Qiao Y,Chen J,Li X,et al.Serum gp73 is also a biomarker for diagnosing cirrhosis in population with chronic HBV infection[J].Clin Biochem,2014,47(16-17):216-222.

[7]許正鋸,潘興南,魏開鵬，等.血清高爾基體蛋白73與慢性乙型肝炎病毒感染者肝臟炎癥損傷的相關(guān)性[J].中華實(shí)驗(yàn)和臨床感染病雜志(電子版),2014,8(5):598-604.

[8]鹿雷明.GP73及AFP在診斷HBV相關(guān)性肝病患者的臨床分析[J].昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，35(10):109-111.

[9]Xu Z,Pan X,Wei K,et al.Serum Golgi protein 73 levels and liver pathological grading in cases of chronic hepatitis B[J].Mol Med Rep,2015,11(4):2644-2652.

[10]Riener MO,Stenner F,Liewen H,et al.Golgi phosphoprotein 2(GOLPH2)expression in liver tumors and its value as a serum marker in hepatocellular carcinomas[J].Hepatology,2009,49(5):1602-1609.

[11]Hu L,Yao W,Wang F,et al.GP73 is upregulated by hepatitis C virus(HCV)infection and enhances HCV secretion[J].PLoS One,2014,9(3):e90553.

[12]Cao FF,Yu S,Jiang ZY,et al.Diagnostic accuracy of Golgi protein 73 in primary hepatic carcinoma using ELISA:a systematic review and meta-analysis[J].Clin Lab,2014,60(4):587-597.

[13]Gao G,Dong F,Xu X,et al.Diagnostic value of serum Golgi protein 73 for HBV-related primary hepatic carcinoma[J].Int J Clin Exp Pathol,2015,8(9):11379-11385.

[14]崔冉亮,李悅國,張鵬宇,等.血清高爾基體蛋白73聯(lián)合甲胎蛋白檢測在原發(fā)性肝癌患者中的診斷價(jià)值[J].中國腫瘤臨床,2015,42(4):222-225.

[15]張知洪,吳英松.血清甲胎蛋白聯(lián)合高爾基體蛋白73對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值[J].實(shí)用癌癥雜志,2015,30(5):651-653.

[16]付超,齊軍,李學(xué)祥,等.高爾基體蛋白73(GP73)檢測在肝細(xì)胞癌中的應(yīng)用價(jià)值[J].中國腫瘤,2010,19(8):553-556.

Expression and clinical significance of serum GP73 in patients with virus hepatitis and liver cancer.

WAN Xiao-hua,LIU Xiang-yi,WANG Fan,WEN Jiang-ping,GUO Yong-jun,WANG Sheng-lai.Department of Clinical Laboratory,Bejing Tongren Hospital,Capital Medical University,Beijing 100730,CHINA

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of serum Golgi protein-73(GP73)in healthy controls and patients with virus hepatitis and liver cancer.MethodsSerum samples were obtained from patients who admitted to Beijing Tongren Hospital,Capital Medical University from 2013 to 2015.By Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA),serum GP73 was measured in 192 healthy controls,118 patients with HBV infection,131 patients with HCV infection and 78 patients with liver cancer.ResultsThe GP73 value in different liver diseases group was significantly higher than that in the healthy controls,respectively(P＜0.01).The GP73 value and quantitative HBV DNA of HBeAg-positive group were significantly higher than those of HBeAg-negative group,respectively(P＜0.01).GP73 had the significant positive correlation with AFP in liver cancer group(r=0.433,P＜0.01).ConclusionCompared with the healthy controls,GP73 in patients with different liver diseases is significantly increased.These results suggested that GP73 might play an important role in the diagnosis of liver diseases and monitor of disease progression.

Golgi protein-73(GP73);Virus hepatitis;Hepatitis B;Hepatitis C;Liver cancer

R512.6

A

1003—6350（2017）23—3872—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.23.028

北京市首都臨床特色項(xiàng)目(編號(hào)：z141107006614007)；北京市優(yōu)秀骨干人才項(xiàng)目(編號(hào)：2016-2018)

劉向祎。E-mail：13693328516@163.com

2017-04-28)