本刊編輯/張金輝

精彩報告

2017豬瘟防控技術(shù)研討會精彩報告薈萃

本刊編輯/張金輝

豬瘟一直是危害我國養(yǎng)豬業(yè)的重要疫病，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了極大的經(jīng)濟損失，為進一步加強我國豬瘟的防控凈化工作，提升防控技術(shù)水平，促進全球豬瘟防控技術(shù)的合作與交流，由中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所主辦的“2017豬瘟防控技術(shù)研討會”于2017年10月11-13日在北京召開，來自國內(nèi)外的豬病研究專家匯聚一堂，針對豬瘟這一熱門話題，共同探討其防控和凈化的關(guān)鍵技術(shù)、策略和對策。小編非常榮幸能親臨大會現(xiàn)場，收獲頗豐，現(xiàn)將本次盛會的報告進行薈萃，希望能讓更多的養(yǎng)豬朋友了解會議精華。

特約報告專家：

張改平 院士、教授（中國工程院院士、河南農(nóng)業(yè)大學校長）

Trevor Drew 博士、教授(英國農(nóng)業(yè)部動物健康及獸醫(yī)實驗室病毒研究室及外來病室主任、英國OIE豬瘟參考實驗室負責人)

涂長春 研究員（長春獸醫(yī)研究所、OIE狂犬病參考實驗室主任）

Paul.Becher 博士、教授（德國漢諾威獸醫(yī)大學病毒室主任、OIE/歐盟豬瘟參考實驗室主任）

趙啟祖 博士、研究員（中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所標準物質(zhì)研究室主任、OIE豬瘟參考實驗室核心專家）

王 琴 博士、研究員（中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所、OIE豬瘟參考實驗室首席專家）

Llilianne Ganges博士（西班牙OIE豬瘟參考實驗室首席專家、豬瘟病毒、瘟病毒以及外來病研究組首席科學家）

羅廷榮 教授（廣西大學副校長）

史記暑 博士（堪薩斯州立大學獸醫(yī)學院終身教授、堪薩斯州立大學美中動物衛(wèi)生中心主任）

仇華吉 博士、研究員（中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所豬傳染病研究室主任、豬烈性傳染病創(chuàng)新團隊首席科學家）

Aruna Ambagala博士（加拿大食品監(jiān)察局國家外來病種研究中心/OIE豬瘟參考實驗室、豬瘟/哺乳動物病毒研究室主任）

陳金頂 教授（華南農(nóng)業(yè)大學）

Manuel Borca 博士（美國農(nóng)業(yè)部外來病研究中心（梅島）豬瘟研究首席科學家）

Staubach Christoph 博士（德國Friedrich-Loeffler-Institut研究所流行病學專家，歐洲野豬豬瘟監(jiān)控數(shù)據(jù)庫項目主管）

Postel Alexander 博士（德國漢諾威獸醫(yī)大學病毒研究所、EU/OIE豬瘟參考實驗室分子生物學實驗室主任）

高 榮 教授（四川大學生命科學學院）

周 斌 教授（南京農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院）

朱連德 博士（勃林格殷格翰（中國）動物保健全國技術(shù)服務總監(jiān)）

Douglas Gladue 博士（美國農(nóng)業(yè)部外來病研究中心（梅島）高級研究科學家）

徐 璐 副研究員（中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所、OIE豬瘟參考實驗室骨干）

張乾義 博士、副研究員（中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所、OIE豬瘟參考實驗室骨干）

Grzegorz_Wo?niakowski 博士、副教授（波蘭國家獸醫(yī)研究所豬病研究室、OIE豬瘟參考實驗室）

1 豬瘟病毒的特征及流行特點

涂長春研究員在《豬瘟病毒中國分離株的系統(tǒng)發(fā)生與抗原性分析》的報告中介紹了豬瘟在全世界的流行和分布情況，在我國是從1925年開始記載豬瘟的，豬瘟病毒為黃病毒科瘟病毒屬成員，病毒基因組是大小為12.3 kb的單股正鏈RNA，由基因組兩端非編碼區(qū)和一個大的開放閱讀框組成，后者翻譯產(chǎn)生一個多聚蛋白，其在宿主和病毒蛋白酶的作用下進一步加工為4個結(jié)構(gòu)蛋白（Core、Erns、E1和E2)和8個非結(jié)構(gòu)蛋白 (Npro、P7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B)。 基 于 E2基因核苷酸序列的系統(tǒng)進行分析將豬瘟病毒分為3個基因型、11個基因亞型（1.1-1.4；2.1-2.3；3.1-3.4）， 近兩年我國流行的豬瘟主要屬于基因2.1亞型。通過對基因2.1亞型毒株的遺傳多樣性進行系統(tǒng)的分析，結(jié)果基因2.1亞型又可進一步劃分為10個亞亞型（2.1a-2.1j），除了基因2.1d只流行于印度外，其他9個亞亞型的毒株在中國及其臨近國家甚至歐洲流行。涂研究員進一步指出，我國有世界上最好的豬瘟兔化弱毒疫苗，但在這么高強度的免疫下，豬瘟雖無大的暴發(fā)，但仍時有發(fā)生，現(xiàn)在的豬瘟防控主要是靠免疫，但免疫不能排除病毒，病毒為了生存就要不斷地進行變異。為了進一步分析豬瘟病毒中國分離株和疫苗株的抗原性差異，進行了試驗研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，一株單抗能與石門毒和6個基因2.1亞亞型毒株反應，但不能與兔化弱毒疫苗株反應；而另一株單抗則只與兔化弱毒疫苗株反應，不能與石門株和所有基因2.1亞亞型代表毒株發(fā)生反應。這一結(jié)果首次同時獲得能區(qū)分流行毒株與疫苗毒株的鑒別單抗，不僅為豬瘟病毒抗原變異分析提供了手段，而且也為防治工作中感染與免疫或流行毒株與疫苗株鑒別診斷提供了重要的抗體試劑。

羅廷榮教授在報告中講到豬瘟是由豬瘟病毒引起豬和野豬的高度傳染性疾病，其傳播力強，致死率高，被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為A類傳染病，我國也將其列為一類傳染病。在我國，豬瘟發(fā)病情況從經(jīng)典大流行現(xiàn)轉(zhuǎn)變?yōu)榈胤叫?、散發(fā)性流行，主要以非典型、溫和型發(fā)生，臨床癥狀和病理變化不明顯，常出現(xiàn)母豬繁殖障礙和仔豬先天性感染。干擾素刺激基因15（ISG15）是由干擾素（IFN）誘導的一種類泛素化蛋白，IFNα/β能夠上調(diào)ISG15的表達。與泛素系統(tǒng)相似，ISG15通過E1激活酶、類泛素E2酶和類泛素E3酶與靶標蛋白結(jié)合，通過一系列解聚酶與靶標蛋白分離完成類泛素循環(huán)。與泛素系統(tǒng)不同的是，ISG15與靶標蛋白結(jié)合并不對其進行降解而是對其進行修飾，參與蛋白功能的調(diào)控。多篇報道證實ISG15具有抗病毒的功能。羅教授的研發(fā)團隊通過體內(nèi)外實驗證實，豬瘟病毒感染可上調(diào)ISG15表達，但抑制了免疫系統(tǒng)關(guān)鍵免疫應答因子IFNα/β的表達。證實豬瘟病毒gRNA激活RIG-I/MAVS/IRF1通路上調(diào)ISG15。成功構(gòu)建了一系列isg15基因5`fr突變體，構(gòu)建了系列的PGL6-5`fr-Luc表達載體和PGL6-5`fr-ISG15表達載體。證實IRF1可調(diào)控isg15基因5`fr的-487— -325區(qū)域，5`fr-440g是IRF1結(jié)合isg15基因的關(guān)鍵核苷酸。

Paul Becher教授在《豬瘟及相關(guān)病毒的診斷與遺傳變異》的報告中指出，雖然目前歐盟國家沒有豬瘟病毒，但我們希望能一直保持下去，豬瘟是一個全球性的重要疾病，基于病毒基因組片段核苷酸序列的系統(tǒng)進化分析，可將豬瘟病毒分為3個基因型(基因1～3型)和11個基因亞型(1.1～1.4、2.1～2.3和3.1～3.4)。我們對豬瘟病毒做了大量的研究，近期我們在老鼠體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了新的瘟病毒屬，我們還通過高通量測序發(fā)現(xiàn)豬瘟病毒可能是仔豬發(fā)生先天性震顫的主要原因。

李素博士講解了豬瘟病毒復制的分子調(diào)控機制，他在報告中指出病毒的感染與致病通常是病毒與宿主相互博弈的過程，病毒需要利用宿主代謝系統(tǒng)合成自身組分并建立感染，而宿主則會利用天然免疫系統(tǒng)頡頏病毒的感染。MEK2與豬瘟病毒E2蛋白相互作用，并通過抑制JAK-STAT信號通路而促進豬瘟病毒的復制。

Alexander Postel博士介紹在2015年發(fā)現(xiàn)了仔豬先天性震顫的案例，將病料送到實驗室進行檢測發(fā)現(xiàn)，在小腦和血液中都發(fā)現(xiàn)了非典型的豬源瘟病毒（APPV)，APPV在舌顎線和胃內(nèi)都有很高的分布，這提示我們這種病毒主要通過消化道傳播，APPV與豬瘟沒有很大的交叉反應，一般一個區(qū)域的毒株有很多的多樣性，這些毒株的檢出率很高，從感染病毒到出現(xiàn)臨床癥狀一般可持續(xù)6個月。

Llilianne Ganges博士在報告中介紹到，通過在野豬身上采用感染低等毒力和中等毒力的兩個試驗進行攻毒，結(jié)果表明低等毒力攻毒野豬后雖然沒有表現(xiàn)出臨床癥狀，但在血清中帶毒，表現(xiàn)高病毒血癥。感染后數(shù)個月持續(xù)向外界排毒，是導致豬瘟長期存在、不易根除的主要原因。

2 豬瘟疫苗與免疫

趙啟祖研究員在《豬瘟DIVA疫苗的研究現(xiàn)狀》的報告中指出，我國生豬養(yǎng)殖模式多樣、生物安全水平不高，養(yǎng)殖成本過高，特別是疫病防治成本居高不下。其中豬瘟是危害養(yǎng)豬業(yè)的一個重要疫病，接種疫苗是防控豬瘟的主要手段。目前我國豬瘟疫苗的生產(chǎn)企業(yè)有44家，生產(chǎn)疫苗品種有10個：豬瘟活疫苗（兔源）；豬瘟活疫苗（乳兔源）；豬瘟活疫苗（細胞源）；豬瘟活疫苗（傳代細胞）；豬瘟耐熱保護劑活疫苗（細胞源）；豬瘟耐熱保護劑活疫苗（兔源）；豬瘟、豬丹毒、豬多殺性巴氏桿菌三聯(lián)活疫苗（細胞源或兔源+G4T10株+EO630株）；高致病性豬繁殖與呼吸綜合征、豬瘟二聯(lián)活疫苗（TJM-F92株+C株）；政府采購豬瘟活疫苗（脾淋源）；政府采購專用豬瘟活疫苗（細胞源）。豬瘟兔化弱毒疫苗（簡稱“C”株）性能穩(wěn)定、安全、免疫效果好，是國際公認的安全有效的弱毒疫苗。20世紀60年代從中國引入東歐和亞洲友邦，隨后傳到西歐和拉美各國，對世界豬瘟的預防控制做出了重大貢獻。雖然豬瘟兔化弱毒疫苗安全有效，但其缺點是不能區(qū)分野毒感染和免疫毒。因此，研制一款安全、高效、能區(qū)分野毒感染和疫苗毒的新型豬瘟疫苗顯得極為必要。趙研究員就新開發(fā)的標記疫苗、亞單位疫苗、活載體疫苗等新型DIVA豬瘟疫苗進行了詳細地講解。最后，他指出理想的豬瘟疫苗應具有：無短期或長期副反應；對靶動物和非靶動物遺傳穩(wěn)定；常規(guī)條件下生產(chǎn)工藝穩(wěn)定簡單；成本低；產(chǎn)生免疫迅速，終生免疫；抵御不同毒株；不形成帶毒者；預防水平和垂直傳播；具有敏感特異的診斷方法等特點。

圖1 涂長春教授

圖2 羅廷榮教授

圖3 Paul Becher教授

圖4 李素博士

圖5 Alexander Postel 博士

圖6 Llilianne Ganges博士

史記暑教授詳細介紹了豬瘟E2亞單位疫苗在中國豬瘟凈化中的前景，E 2亞單位疫苗具有安全性好、穩(wěn)定性強的特點。通過大量的試驗證明，臨床上免疫一倍劑量的KNB-E2亞單位疫苗的豬只可以抵抗豬瘟強毒的攻擊。但兩次免疫能更明顯地減少攻毒后的臨床癥狀以及血液中病毒濃度，并能誘發(fā)產(chǎn)生明顯的血清抗體。KNB-E2亞單位疫苗具有DIVA特性。其團隊開發(fā)了針對豬瘟C株E2蛋白和Erns蛋白的單克隆抗體，建立了基于豬瘟C株E2蛋白和Erns蛋白的單克隆抗體的競爭ELISA方法，該方法可以在血清學上做到區(qū)分豬瘟C株和KEB-E2亞單位疫苗免疫后的豬只與豬瘟野毒感染的豬只。他還介紹了豬瘟C株E2蛋白和Erns蛋白的單克隆抗體的篩選和制備過程，利用桿狀病毒表達和純化的豬瘟C株E2蛋白和Erns蛋白免疫分別實驗小鼠，融合后，分別篩選到了一株針對豬瘟C株E2的單抗（6B211)和一株針對豬瘟C株Erns蛋白的單抗（1104）。

Manuel Borca教授詳細介紹了Flag T4G豬瘟弱毒活疫苗的研究情況，他的團隊通過持續(xù)地對豬瘟毒力影響因子進行研究，發(fā)現(xiàn)多個毒力決定因子，然后對病毒進行反向遺傳操作，使用Flag T4對豬瘟病毒進行致弱和標記。在研究過程中通過對豬瘟全病毒進行測序發(fā)現(xiàn)了一些插入和缺少，發(fā)現(xiàn)標記的疫苗毒力返強，通過不斷地對Flag T4進行優(yōu)化，最終開發(fā)了穩(wěn)定的豬瘟標記疫苗。

王琴研究員在報告中強調(diào)豬瘟疫苗依然是最優(yōu)秀的疫苗，為豬瘟的控制提供了技術(shù)保障。目前豬瘟免疫失敗的主要原因有：豬瘟持續(xù)感染帶毒豬、個別豬體免疫功能異常、母源抗體對疫苗免疫的影響、免疫程序不科學、部分廠家豬瘟疫苗質(zhì)量問題、疫苗運輸?shù)睦滏溝到y(tǒng)不完善、多種病原混合存在、診斷方法不特異。

3 檢測與診斷技術(shù)

王澤洲博士介紹了應用鑭系元素做熒光標記物建立一種既具有金標層析技術(shù)簡單方便、快捷，又具有ELISA準確、特異、敏感的豬瘟抗體鑭系免疫層析檢測試劑盒。鑭系熒光免疫層析方法（LFICA）是在時間分辨熒光免疫分析基礎(chǔ)上建立起來的一種超微量快速免疫檢測技術(shù)，它集合了酶標記技術(shù)、放射標記技術(shù)和同位素標記技術(shù)的優(yōu)點，具有靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好、無污染，且測定范圍寬，試劑盒壽命長，操作簡單和非放射性的優(yōu)點，越來越受到各科學領(lǐng)域科研工作者的關(guān)注。

Aruna Ambagala教授介紹了加拿大豬瘟的診斷和研究情況，詳細介紹了新開發(fā)出的一種快速檢測豬瘟的試劑盒，常溫保存、60 min出結(jié)果，在豬瘟感染后的2 d就可以檢測出、非常敏感，唯一的缺點是每次檢測的樣品較少，只能檢測8個樣品。

Grzegorz_Wo?niakowski博士在《東歐豬瘟診斷現(xiàn)狀的挑戰(zhàn)與評價》的報告中介紹了波蘭 OIE 豬瘟參考實驗室對波蘭及東歐地區(qū)豬瘟病毒及抗體檢測診斷方面的工作，同時對近年來非洲豬瘟的流行情況進行了分析。他指出非洲豬瘟與經(jīng)典豬瘟非常相似，野豬攜帶非洲豬瘟是一個非常大的危險，野豬群通過牧草傳播非洲豬瘟，非洲豬瘟可通過飼喂的牧草傳染給家豬。

Christoph Staubach博士通過對野豬群中豬瘟病毒風險監(jiān)測進行研究，與傳統(tǒng)的血清學檢測方法進行對比，評估它們在檢測敏感性、操作時間、使用率以及經(jīng)濟效益等方面的情況進行系統(tǒng)的評估。“風險評估”是一種有效、省時、更有針對性的監(jiān)控方式，根據(jù)風險的特性進行采樣能有效地對疾病進行監(jiān)測和防控，在沒有豬瘟流行和沒免疫的野豬群中，風險監(jiān)測可以代替目前常規(guī)血清學監(jiān)測方法。

4 防控與凈化

河南農(nóng)業(yè)大學、中國工程院張改平院士以《中國豬瘟防控思考與研究》為題分三個方面展開報告：歷史與現(xiàn)狀、問題、認識與研究。張院士在報告中指出，我國在豬瘟防控方面存在三大問題：一是疫苗：生產(chǎn)廠家較多，價格不等、所產(chǎn)生的母源抗體高低不同；二是檢測：疫苗有效性檢測技術(shù)、抗體評價技術(shù)、病原檢測等還需完善；三是綜合防控：有些豬場對綜合防控的理解不到位，操作有偏差等。他認為生物安全防范是動物疫病防控的最高境界；建議疫苗廠商整合；加強疫苗質(zhì)量評價監(jiān)控；不僅要選用好疫苗，更要把疫苗用好、用明白；加強疫苗評價技術(shù)、抗體評價技術(shù)等方面研究；完善克服母源抗體影響的疫苗研究等。

圖7 趙啟祖研究員

圖8 史計署教授

圖9 Manuel Borca 博士

圖10 王琴研究員

圖11 Aruna Ambagala博士

圖12 Grzegorz_Wo?niakowski 博士

圖13 Staubach Christoph博士

圖14 Trevor Drew 教授

圖15 張改平院士

圖16 陳金頂教授

圖17 周斌教授

圖18 仇華吉研究員

Trevor Drew教授在《豬瘟控制與凈化策略回顧》的報告中強調(diào)，發(fā)現(xiàn)豬瘟要立即撲殺，并要追蹤發(fā)病前50 d接觸的人、物，對于疑似病例要做抗原、抗體檢測，監(jiān)測周邊10 km的監(jiān)控區(qū)內(nèi)是否有疾病發(fā)生。在控制和凈化豬瘟方面生物安全是最重要的，同時豬場管理人員的觀念也是非常重要的。如飼料、針頭等是一個非常重要的傳播途徑。雖然商品化的疫苗能減少疾病的發(fā)生，但會出現(xiàn)免疫失敗等現(xiàn)象。影響疫苗效果的因素有很多，如疫苗的運輸也是一個重要因素，疫苗的保存及稀釋液都可以影響到疫苗的效果。疫苗只能降低動物感染的風險、減少排毒，單依靠疫苗本身是不能防控疾病的，需要進行全方面的控制。

王琴研究員在報告中指出豬瘟的防治思路要以預防為主的防控方針；以源頭控制、分類指導、梯度推進為防治原則；以養(yǎng)殖場（戶）為防治主體；以疫病凈化為防治重點，不斷完善養(yǎng)殖場生物安全體系；嚴格落實免疫預防、監(jiān)測凈化、檢疫監(jiān)管、應急處置、無害化處理等綜合防控措施；積極開展場區(qū)或區(qū)域凈化工作，降低發(fā)病率，壓縮流行范圍，有效清除病原，逐步實現(xiàn)凈化目標；實施區(qū)域化管理，建設(shè)無豬瘟區(qū)和無豬瘟生物安全隔離區(qū)（無豬瘟企業(yè)）；評估驗收。最后，她強調(diào)只要建立了科學的豬瘟綜合防控凈化模式，在中國，豬瘟是可以凈化的！

仇華吉研究員詳細地介紹了新型豬瘟疫苗嵌合載體豬瘟疫苗，該疫苗具有C株疫苗安全、高效、成本低等優(yōu)點，同時克服了C株疫苗不能區(qū)分野毒感染和疫苗毒的缺點，不受母源抗體的干擾，可與豬繁殖與呼吸綜合征疫苗或豬偽狂犬疫苗同時進行免疫，互相不受干擾。免疫攻毒試驗顯示嵌合載體豬瘟疫苗能有效保護豬群抵抗豬瘟強毒的攻擊，攻毒后沒有出現(xiàn)任何臨床癥狀。

圖19 會議現(xiàn)場