孫慶玲

摘 要：本文制備妥布霉素口服液并研究其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。采用高校液相測定了妥布霉素口服液中妥布霉素的含量，固定相為USA Agilent ZORBAXSB-C18柱（5μm，4.6mm×150mm），流動相為0.1mol·L-1三氟乙酸溶液；霧化管溫度40℃，漂移管溫度80℃，載氣壓力0.35MPa；流速1.0mL·min-1。妥布霉素對照品在50～900μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，呈良好的線性關(guān)系。妥布霉素的平均回收率為99.5%，RSD為0.91% （n=6）；此方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于妥布霉素口服液的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：妥布霉素口服液；制備；質(zhì)量控制

妥布霉素中文別名安欣、抗普霉素、托霉素等，英文別名Brulamycin、Gernebcin、NebramycinFactor6、Obracin、Tobradistin。妥布霉素對革蘭陰性菌特別是對綠膿桿菌具有高效，其作用為慶大霉素強(qiáng)2～4倍。妥布霉素適用于綠膿桿菌、大腸桿菌、克雷伯菌屬、沙雷菌屬及葡萄球菌（包括耐青霉素G與耐甲氧西林菌株）所致的新生兒膿毒癥、敗血癥、膽道感染、腹腔感染（及腹膜炎）、骨骼感染、急性與皮膚、軟組織感染（包括燒傷）、慢性中耳炎、鼻竇炎等。本文制備妥布霉素口服液并研究其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試藥

ZJ/FL2200高效液相色譜儀（等度）（北京中西遠(yuǎn)大科技有限公司）；HT/GDSJ-225北京交變高低溫濕熱試驗(yàn)箱（北京恒泰豐科試驗(yàn)設(shè)備有限公司）； 蒸發(fā)光散射檢測器（北京恒奧德儀器儀表有限公司）；DBT-IV-20 DBT-IV-20高端型超純水機(jī)（杜伯特（北京）科技有限公司）； 高低溫試驗(yàn)箱（浙江巨為儀器股份有限公司）；超聲波清洗機(jī)（上?？缕顑x器設(shè)備有限公司）；RS-EA十萬分之一電子天平（上海睿珊電子科技有限公司）。自制妥布霉素口服液批號為180101，180102，180103。妥布霉素對照品（中國藥品生物制品檢定所提供）。乙腈（天津市康科德科技有限公司）、（北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司）、甲醇（北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司）、三乙胺（北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司）、三氟乙酸（北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司）、醋酸（北京市津同樂泰化工產(chǎn)品有限公司）。

2 制備妥布霉素口服液

取妥布霉素，加入防腐劑等，調(diào)節(jié)pH至5.8，加純化水定容至300L，濾過，灌封，滅菌，即得妥布霉素口服液。

3 質(zhì)量控制

3.1 性狀本品為無色液體，味甜

3.2 色譜條件

色譜柱為USA Agilent ZORBAXSB-C18柱（規(guī)格4.6mm×150mm，5μm）；流動相為0.1mol·L-1三氟乙酸溶液；霧化管溫度40℃，漂移管溫度80℃，載氣壓力0.35MPa；流速1.0mL·min-1；柱溫：30℃[1-6]。

3.3 提取溶媒的選擇

在供試品溶液制備中，分別選用了水、20%甲醇、甲醇進(jìn)行超聲提取，結(jié)果表明20%甲醇分離效果、峰形及含量均為最好，所以選擇20%甲醇進(jìn)行超聲提取。

3.4 供試品溶液的制備

取妥布霉素口服液適量，精密量取1ml，置10mL量瓶中，加20%甲醇適量，超聲處理20min使溶解，放置至室溫，加20%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

3.5 對照品溶液的制備

精密稱取妥布霉素對照品約20mg，置50mL容量瓶中，用20%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取5mL至10mL容量瓶中，用20%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL溶液中含妥布霉素200.0μg）。

3.6 陰性干擾試驗(yàn)

在處方中去妥布霉素，按方中比例和制備工藝方法制成陰性制劑，用供試品溶液制備的方法，制成陰性對照溶液，用以上選定的測定條件進(jìn)行吸收曲線繪制，觀察在與妥布霉素相同的保留時間處是否存在吸收峰，結(jié)果表明：在選定條件下測得的陰性液吸收曲線在與妥布霉素相同保留時間處不存在吸收峰，因此說明選定的條件測定妥布霉素?zé)o干擾，具有較強(qiáng)的專屬性。

3.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

將濃度為50μg/ml，100μg/ml，300μg/ml，500μg/ml，700μg/ml，800μg/ml，900μg/ml的對照品溶液分別吸取20μL注入HPLC，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。試驗(yàn)表明，妥布霉素對照品在50～900μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.8 精密度試驗(yàn)

精密吸取妥布霉素對照品溶液重復(fù)進(jìn)樣5次，測定峰面積積分值，對照品峰面積積分值的RSD為0.98%。

3.9 重現(xiàn)性試驗(yàn)

分別稱取同批妥布霉素口服液樣品6份，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測定項(xiàng)下方法測定含量，并計(jì)算樣品的RSD值為0.67%，此含量測定方法的重現(xiàn)性良好。

3.10 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一對照品溶液與同一供試品溶液，分別在0，4，8進(jìn)樣測定，樣品溶液的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明，室溫下8h內(nèi)測定峰面積基本一致；將樣品置棕色試劑瓶內(nèi)，于4℃冷藏放置，24h內(nèi)測定峰面積基本一致。

3.11 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分別精密添加一定量的妥布霉素對照品，按供試品制備所述方法測定含量（同時測定樣品含量），計(jì)算回收率。6次測定的平均回收率為99.5%，RSD為0.91%。

3.12 含量限度的確定

按本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測定項(xiàng)下方法，測定了三批樣品，結(jié)果表明，樣品中妥布霉素的含量差異，含量為標(biāo)示量的95-105%。

4 討論

分別考察甲醇-水-三乙胺（25∶75：0.1），甲醇-0.1mol·L-1三氟乙酸溶液（5∶95），甲醇-0.1mol·L-1三氟乙酸溶液（2∶98），甲醇-2%醋酸水溶液（18∶82），0.1mol·L-1三氟乙酸溶液不同比例的流動相，結(jié)果以0.1mol·L-1三氟乙酸溶液為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用0.1mol·L-1三氟乙酸溶液為流動相。此方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于妥布霉素口服液的質(zhì)量控制；本制劑穩(wěn)定可靠。

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