趙 濤 樂 靜 李傳靜 劉愛林

mTORC1相關(guān)蛋白在胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中的表達(dá)及其與預(yù)后的相關(guān)性

趙 濤 樂 靜 李傳靜 劉愛林

目的探討mTORC1相關(guān)蛋白在胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中的表達(dá)與預(yù)后之間的相關(guān)性。方法納入75例胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的患者，采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)mTORC1相關(guān)蛋白的表達(dá)水平，通過病理學(xué)分級(jí)、臨床分期分析mTORC1相關(guān)蛋白在不同分層患者中的表達(dá)情況，采用Cox回歸分析及l(fā)og-rank檢驗(yàn)分析預(yù)后與mTORC1相關(guān)蛋白表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果mTOR1相關(guān)蛋白在胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中陰性表達(dá)率遠(yuǎn)高于陽(yáng)性率；病理學(xué)分級(jí)惡性程度高的標(biāo)本mTOR1、Bcl-2、TSC2、PS6、SSR2、β-catenin的陰性率高，臨床分期進(jìn)展程度高的標(biāo)本中，mTOR1、Bcl-2、TSC2、PS6、SSR2、β-catenin的陰性率高。Cox回歸分析及l(fā)og-rank檢驗(yàn)分析mTORC1相關(guān)蛋白表達(dá)陰性是預(yù)后不良的獨(dú)立影響因素。結(jié)論mTORC1相關(guān)蛋白在胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中的低表達(dá)與病理學(xué)分級(jí)、臨床分期差、預(yù)后不良具有一定的相關(guān)性。

mTORC1；胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤；預(yù)后；表達(dá)；相關(guān)性

胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤是一組以臨床表現(xiàn)到疾病預(yù)后均存在著較大差異的惡性腫瘤，表現(xiàn)為低度惡性、緩慢生長(zhǎng)及高侵襲性等一系列生物行為學(xué)表現(xiàn)[1]，發(fā)病率為2.5/10萬(wàn)。mTOR通路是近年來(lái)被發(fā)現(xiàn)的與細(xì)胞的增殖、血管發(fā)生、腫瘤發(fā)展具有重要相關(guān)性的蛋白，目前關(guān)于該通路的mTOR1相關(guān)蛋白對(duì)胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的預(yù)后影響研究較少。本研究通過對(duì)胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的臨床分期、病理分型等參數(shù)和mTOR1相關(guān)蛋白與患者預(yù)后之間的關(guān)系進(jìn)行分析，探尋mTOR1相關(guān)蛋白是否可以作為潛在的靶點(diǎn)蛋白，以求為患者預(yù)后的判斷提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病例收集

收集我院2010年1月1日至2013年12月31日在我院胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤根治術(shù)的75例患者資料。所有胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤組織標(biāo)本來(lái)源于石蠟包塊(包括10例癌旁組織蠟塊)，經(jīng)2位不同的病理醫(yī)生確診為胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤[2]。胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的病理學(xué)分級(jí)采用2004年WHO的分級(jí)[3]，分別為NEC：核分裂象>20/10HPF和(或)Ki-67增殖指數(shù)>20%；NETG1：核分裂象<2/10HPF和(或)Ki-67增殖指數(shù)≤2%；NETG2：核分裂象2/10HPF～20/10HPF和(或)Ki-67增殖指數(shù)3%～20%。根據(jù)診斷原發(fā)腫瘤時(shí)的B超、X線射片、CT、MR等輔助檢查，以及綜合術(shù)后病理結(jié)果確定胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的TNM臨床分期。患者診斷為胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的平均年齡為(52.94±14.85)歲。病例隨訪中，最短的隨訪14個(gè)月，最長(zhǎng)的58個(gè)月，中位隨訪時(shí)間為45個(gè)月。

1.2 免疫組織化學(xué)

采用經(jīng)典免疫組化方法。mTOR1相關(guān)蛋白(mTOR1、Bcl-2、TSC2、PS6、SSR2、β-catenin)染色極少數(shù)在細(xì)胞核中也有染色，陽(yáng)性以細(xì)胞質(zhì)為主。綜合染色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞百分率進(jìn)行評(píng)分，每張切片觀察5個(gè)400倍鏡下視野。陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)分：0分(視野內(nèi)無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞)，1分(視野內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞<25%)，2分(視野內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞25%～50%)，3分(視野內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞>50%)；染色強(qiáng)度計(jì)分：0分(陰性)，1分(弱陽(yáng)性)，2分(中等陽(yáng)性)，3分(強(qiáng)陽(yáng)性)。兩項(xiàng)分?jǐn)?shù)相加>2分者為陽(yáng)性，0～2分者計(jì)為表達(dá)陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，精確概率法、卡方檢驗(yàn)對(duì)計(jì)數(shù)資料進(jìn)行分析，log-rank檢驗(yàn)了解生存曲線的差異，Kaplan-Meier法估計(jì)生存率，多因素的生存分析采用Cox回歸檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)分析以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤組織中mTOR1相關(guān)蛋白表達(dá)

在收集的75例胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤組織中，mTOR1相關(guān)蛋白表達(dá)呈陽(yáng)性與表達(dá)為陰性的細(xì)胞數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。分析胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤患者病例中mTOR1相關(guān)蛋白表達(dá)，發(fā)現(xiàn)mTOR1相關(guān)蛋白表達(dá)在患者年齡、性別等方面無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，見表1。

表1 胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤組織中mTOR1相關(guān)蛋白表達(dá)異常/例

注：※為與陽(yáng)性比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。

2.2 胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤組織中mTOR1相關(guān)蛋白的表達(dá)與臨床標(biāo)本的病理學(xué)分級(jí)及臨床分期的相關(guān)性

mTOR1相關(guān)蛋白在高級(jí)別(低分化)中陰性率最高；低級(jí)別(中分化)胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤組織中mTOR1相關(guān)蛋白的陰性率次之；低度惡性傾向(高分化)陰性率最低，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，mTOR1相關(guān)蛋白的陰性率與胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的浸潤(rùn)程度相關(guān)，從NET期到NEC期依次降低，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

2.3 生存分析

75例胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤病例中，分別對(duì)mTOR1蛋白表達(dá)情況進(jìn)行生存分析，陽(yáng)性、陰性平均生存時(shí)間分別為86.5和62.0個(gè)月，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析2組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。見圖1。

3 討論

神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤可發(fā)生于全身的各個(gè)器官中，在病理學(xué)及臨床癥狀上具有共同的特點(diǎn)，但是對(duì)于腫瘤類型、發(fā)生部位等仍有不同的生物學(xué)行為的差異，與激素產(chǎn)物的形成有關(guān)，也被歸為功能性腫瘤[4-6]。胃腸胰腺是神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤最好發(fā)的部位，是一種復(fù)雜的異質(zhì)性腫瘤，該類腫瘤生長(zhǎng)迅速，但是腫瘤呈現(xiàn)生長(zhǎng)緩慢，且臨床癥狀不明顯等特點(diǎn)，部分腫瘤分泌激素并表現(xiàn)出與激素高分泌相關(guān)癥狀，由于該病的發(fā)病率不高，因此研究相對(duì)較少[7]。

表2 胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤mTOR1相關(guān)蛋白的表達(dá)與臨床標(biāo)本的病理學(xué)分級(jí)情況/例

圖1 mTOR1蛋白表達(dá)與胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤患者生存率的相關(guān)性

雖然臨床病理學(xué)、WHO分級(jí)等參數(shù)可以協(xié)助預(yù)測(cè)腫瘤的惡性程度及預(yù)后情況，但是對(duì)于這一神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤，只采用病理學(xué)參數(shù)很難良好地預(yù)測(cè)該此類腫瘤的生物學(xué)行為，對(duì)于腫瘤日后的復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移等預(yù)后情況并未得到良好的預(yù)測(cè)作用[8-9]。因此我們?yōu)榇诵鑼ふ腋鼮槊舾械纳飳W(xué)蛋白標(biāo)記物以探討腫瘤生物學(xué)行為，試圖篩選出能夠成為治療靶點(diǎn)的藥物。

已有關(guān)于神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的研究相關(guān)的通路包括mTOR通路，研究發(fā)現(xiàn)該類腫瘤的發(fā)生與mTOR通路活化有一定的相關(guān)性，不同分級(jí)及病理分型的腫瘤患者的預(yù)后差異性較大[10]，因此對(duì)該通路重要蛋白的研究，有助于更好地預(yù)測(cè)疾病的轉(zhuǎn)歸及治療[11-12]。因此本研究重點(diǎn)放在mTOR通路的mTOR1相關(guān)蛋白上。mTOR的活化及低表達(dá)在多種腫瘤上均得到了證實(shí)，上調(diào)具有抑制凋亡，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)及血管發(fā)生的作用，因此低表達(dá)延長(zhǎng)了腫瘤的生存時(shí)間，導(dǎo)致預(yù)后較差。在本研究中，我們通過對(duì)75例胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤組織免疫組化染色分析，mTOR1相關(guān)蛋白在胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中的陰性表達(dá)要遠(yuǎn)高于陽(yáng)性表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果表明mTOR1相關(guān)蛋白表達(dá)下調(diào)與胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的發(fā)生可能有密切的關(guān)系。

目前國(guó)內(nèi)外研究顯示，mTOR1相關(guān)蛋白可能具有維持細(xì)胞分化能力或促進(jìn)細(xì)胞分化。研究發(fā)現(xiàn)mTOR1相關(guān)蛋白在鱗癌干細(xì)胞樣細(xì)胞中低表達(dá)，能夠抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移[13-15]。上述這些研究結(jié)果充分說(shuō)明，mTOR1相關(guān)蛋白與腫瘤的增殖、轉(zhuǎn)移、干細(xì)胞樣特性密切相關(guān)。惡性腫瘤中病理學(xué)分級(jí)往往代表腫瘤惡性的侵襲程度，也代表細(xì)胞的分化程度，低分化的惡性程度高，高分化的癌細(xì)胞惡性程度相對(duì)較低。本研究發(fā)現(xiàn)mTOR1相關(guān)蛋白的表達(dá)在不同病理學(xué)分級(jí)的胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞中陽(yáng)性率存在差異。另外，本研究分析了mTOR1相關(guān)蛋白的表達(dá)與胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的臨床分期的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)臨床分期越高，mTOR1相關(guān)蛋白陽(yáng)性率越低，胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤早期，mTOR1相關(guān)蛋白陽(yáng)性率最高。通過log-rank檢驗(yàn)和Cox回歸分析發(fā)現(xiàn)，mTOR1相關(guān)蛋白陽(yáng)性表達(dá)的患者的預(yù)后明顯優(yōu)于于mTOR1相關(guān)蛋白表達(dá)陰性的患者。mTOR1相關(guān)蛋白的表達(dá)是影響胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤患者預(yù)后一種獨(dú)立影響因素，mTOR1相關(guān)蛋白的表達(dá)下調(diào)與胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的惡性程度及預(yù)后相關(guān)。

本研究未收集mTOR1相關(guān)蛋白的表達(dá)對(duì)胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤術(shù)后輔助治療對(duì)預(yù)后的影響，因此我們將在之后的研究中進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，詳細(xì)收集胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤術(shù)后輔助藥物治療對(duì)胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤預(yù)后的影響，分析mTOR1相關(guān)蛋白的表達(dá)在藥物治療效果的差異性和耐藥性中的作用。綜上所述，mTOR1相關(guān)蛋白在胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的發(fā)生發(fā)展中扮演重要的角色，mTOR1相關(guān)蛋白可能成為胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的治療的新靶點(diǎn)，對(duì)胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤診斷及預(yù)后有重要的價(jià)值。

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ExpressionandPrognosticResearchmTORC1-relatedProteinintheGastrointestinalandPancreaticNeuroendocrineTumors

ZHAOTao,LEJing,LIChuanjing,etal.

XiaoganAffiliatedHospitalofWuhanUniversityofScienceandTechnology,Xiaogan，432000

ObjectiveTo investigate the correlation between mTORC1-related protein and prognosis in gastrointestinal and pancreatic neuroendocrine tumors.Methods75 cases of gastrointestinal and pancreatic neuroendocrine tumors were selected,immunohistochemical methods was used to detect mTORC1-related protein expression,patients with normal and cancerous tissues beside compared by pathological grade,clinical stage analysis mTORC1-related protein stratification in patients with different expression,using Cox regression analysis and log-rank test to analyze the correlation with prognosis mTORC1 related proteins.ResultsmTOR1 related proteins in the gastrointestinal and pancreatic neuroendocrine tumors was much higher than the negative expression of the positive expression,the difference was statistically significant (P<0.001);high-grade malignant pathology specimens mTOR1,Bcl-2,TSC2,negative rate PS6,SSR2,β-catenin,the high degree of progression of clinical stage samples,mTOR1,Bcl-2,TSC2,PS6,SSR2,negative rate of β-catenin,Cox regression analysis and log-rank test analysis independent factors of mTORC1 negative expression was associated with poor prognosis.ConclusionLow expression of mTORC1-related protein in gastrointestinal and pancreatic neuroendocrine tumors is related with pathological grade,poor clinical staging and poor prognosis.

mTORC1;Gastrointestinal and pancreatic neuroendocrine tumors;Prognosis;Expression;Correlation

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:,1752～1755)

432000 武漢科技大學(xué)附屬孝感醫(yī)院

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.11.004

R736

A

1001-5930(2017)11-1752-04

2016-10-09

2017-04-04)

(編輯：甘艷)