楊明非 蘇雯 王海英

(北日本制藥株式會社產(chǎn)品研發(fā)室，日本富山縣，930-0314) (廣東省珠海市斗門區(qū)公立醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)管理中心) (東北林業(yè)大學(xué))

紅松子油的體外抗氧化活性

楊明非 蘇雯 王海英

(北日本制藥株式會社產(chǎn)品研發(fā)室，日本富山縣，930-0314) (廣東省珠海市斗門區(qū)公立醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)管理中心) (東北林業(yè)大學(xué))

測定了紅松子油的總還原力、二苯基苦基肼自由基(DPPH·)的清除能力和羥基自由基(·OH)的清除能力。結(jié)果表明：紅松子油的總還原力較弱，質(zhì)量分數(shù)為50%時吸光度為0.211，遠低于對照組抗壞血酸的還原力。紅松子油對DPPH·和·OH清除能力相對顯著，對DPPH·的清除率略高于·OH，紅松子油質(zhì)量濃度在500 g/L以上時對二者清除率可達到100%，拮抗劑的半抑制質(zhì)量濃度(IC50)分別為22.05～23.69、13.74～13.74 g/L。紅松子油的體外清除自由基能力較強。

紅松子油;抗氧化活性;清除自由基能力

紅松(Pinuskoraiensis)為松科松屬植物，是東北常見的具有經(jīng)濟價值的樹種之一。紅松松子含有蛋白質(zhì)、糖類、粗纖維以及粗脂肪，其中有多種人體必需的氨基酸和維生素；本草綱目中記載松子有“補氣血，祛風(fēng)寒，潤肺止咳”等功效。

已有研究表明，以紅松松子為原料制成的松子油中，含有大量對人體有益的不飽和脂肪酸，約占松子油的總質(zhì)量分數(shù)的90%，如亞油酸、亞麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸等無法自身合成，必須由食物中獲取的脂肪酸[1-3]。其中含量最高的為亞油酸，具有降低血壓和降低膽固醇的作用[4-5]。因此，紅松子油作為一種極其健康的新型油脂，具有廣闊的科研和商業(yè)開發(fā)空間。目前，對紅松子油的研究，多側(cè)重于其中脂肪酸成分組成及其含量分析。除少量飽和脂肪酸棕櫚酸和硬脂酸占總質(zhì)量分數(shù)的7%，其余主體部分為亞麻酸、亞油酸和皮諾斂酸，還有少量花生酸、花生四烯酸、芥酸、二十碳三烯酸；但各成分具體含量因樹種不同、海拔不同、所處環(huán)境溫濕度不同而存在較大差異[6-8]。另一主要研究方向，是關(guān)于松子油的提取方法?，F(xiàn)今常見的應(yīng)用于松子油提取的方法有壓榨法、超臨界萃取法、超聲輔助提取法、有機溶劑浸取法等；其中壓榨法分為冷榨和熱榨，冷榨法為最傳統(tǒng)也是大面積投入生產(chǎn)應(yīng)用的方法，不僅避免高溫產(chǎn)生的反式脂肪酸，同時保留了松子天然的風(fēng)味和有效成分[9-10]。本實驗采用的原料，即為冷榨法提取的紅松子油；測定了紅松子油的抗氧化活性，包括總還原力、二苯基苦基肼自由基(DPPH·)和羥基自由基(·OH)的清除能力，為日后紅松子油的開發(fā)和應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

紅松子油：為冷榨法提取的紅松子油，來源于黑龍江宏泰松果有限公司。

主要試劑：鐵氰化鉀、三氯化鐵、三氯乙酸、二苯基苦基肼自由基(DPPH·)、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、硫酸亞鐵、水楊酸、質(zhì)量分數(shù)為30%的過氧化氫、無水乙醇，均為分析純。

主要儀器：722型可見分光光度計，上海光譜儀器有限公司。

總還原力測定方法：利用磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉配置pH=6.6的磷酸緩沖液，將紅松子油樣品用無水乙醇稀釋質(zhì)量分數(shù)為50.00%、43.75%、37.50%、31.25%、25.00%、18.75%、12.50%、6.25%。將1 mL不同質(zhì)量分數(shù)的紅松子油醇溶液和2.5 mL的磷酸緩沖液(濃度為0.2 mol/L，pH=6.6)加入試管中，再加入2.5 mL質(zhì)量分數(shù)為1%的鐵氰化鉀溶液，混合均勻后置于50 ℃恒溫水浴鍋中反應(yīng)20 min。取出后，再加入2.5 mL質(zhì)量分數(shù)為10%的三氯乙酸終止反應(yīng)，5 000 r/min離心10 min。取上清液2.5 mL，加入2.5 mL蒸餾水和0.5 mL質(zhì)量分數(shù)為0.1%的三氯化鐵溶液，混勻后靜置10 min，在700 nm處檢測吸光值。用抗壞血酸重復(fù)該實驗，作為其陽性對照組。

清除DPPH·的方法：稱取7.9 mg的DPPH·粉末溶于100 mL無水乙醇中，棕色瓶暗處保存?zhèn)溆?。將待測的紅松子油用倍數(shù)稀釋法，以無水乙醇為溶液分別稀釋質(zhì)量濃度為500.00、375.00、250.00、125.00、62.50、31.25、15.63 g/L的樣品溶液備用。之后，用移液管分別移取2 mL不同質(zhì)量濃度的待測樣品溶液于試管中，加入2.0 mL的DPPH·溶液，立即混勻，暗處放置30 min，測定517 nm的吸光度(Ai)，同時測定2.0 mL樣液加入2.0 mL無水乙醇的吸光度(Aj)及2.0 mL無水乙醇加入2.0 mL的DPPH·溶液的吸光度(A0)。實驗以2.0 mL蒸餾水和2.0 mL無水乙醇混合液作參比。每個質(zhì)量濃度平行操作3次，取平均值。計算樣品對DPPH·的清除率(RDPPH·)：RDPPH·=(1-(Ai-Aj)/A0)×100%。

數(shù)據(jù)處理：利用Excel 2007、SPSS19.0進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析、處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 紅松子油的總還原力

由表1可見：紅松子油具有一定的還原能力，但還原力較弱。紅松子油的還原能力與其質(zhì)量分數(shù)具有相關(guān)性，通過擬合得出相關(guān)回歸方程：A=0.012 5w+0.099(A為吸光度，w為質(zhì)量分數(shù))，決定系數(shù)(R2)為0.954 7。紅松子油質(zhì)量分數(shù)為50%時，其還原力所對應(yīng)的吸光度僅為0.211，遠低于對照組最低質(zhì)量濃度(2 g/L)抗壞血酸對應(yīng)的吸光度。這一結(jié)果與徐廣新[11]所測定的結(jié)果相類似。

表1 紅松子油總還原力

注：表中“吸光度”數(shù)據(jù)為“平均值±標準差”。

2.2 紅松子油對DPPH·的清除能力

由表2可見：紅松子油對DPPH·有良好的清除能力，紅松子油質(zhì)量濃度在375.00 g·L-1以上可達到100%的清除率。拮抗劑的半抑制質(zhì)量濃度(IC50)值越小，說明樣品清除能力越強，本次樣品紅松子油IC50為22.05～23.69 g·L-1。紅松子油中含有的脂肪酸和維生素，還有槲皮素和山奈素等活性組分，均會影響紅松子油清除DPPH·的能力。常晨等[12]比較了6種不同山體紅松子油的DPPH·清除能力，其IC50的值均有差異。但總體看，紅松子油清除DPPH·的能力較強，具有一定預(yù)防因自由基引起的細胞和肌體損傷的作用。

表2 紅松子油對自由基的清除能力

注：表中“自由基清除率”數(shù)據(jù)為“平均值±標準差”。

2.3 紅松子油對·OH的清除能力

由表2可見：紅松子油對·OH的清除能力較強；紅松子油質(zhì)量濃度為500.00 g·L-1時，對·OH的清除率可達到100%；紅松子油質(zhì)量濃度相對較低時，對·OH的清除率仍在50%。根據(jù)SPSS回歸計算得出的IC50值，清除·OH的IC50值為13.74～13.82 g·L-1。但清除率與紅松子油質(zhì)量濃度間線性關(guān)系不顯著，各個質(zhì)量濃度間清除率數(shù)值波動較大，誤差分析還需進一步試驗求證。

3 結(jié)論

紅松子油具有一定的抗氧化活性。相對于抗壞血酸，紅松子油的總還原力較弱，但對DPPH·、·OH清除效果較為顯著。紅松子油較高質(zhì)量濃度時清除率可達到100%，低質(zhì)量濃度時也有較好的清除效果。拮抗劑的半抑制質(zhì)量濃度(IC50)都較低，分別為23.69、13.74g/L，二者相比，雖然清除·OH的IC50值較小，但在同質(zhì)量濃度時，DPPH·的清除率略高出·OH。酚類、酸類和多不飽和脂肪酸均有抗氧化作用，而紅松子油中包含多種不飽和脂肪酸、維生素及酚類，其中還有少量山奈素和槲皮素等活性因子；初步推測，因為這些物質(zhì)，紅松子油體外抗氧化活性效果較為顯著。

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TheinvitroAntioxidantActivitiesofPinuskoraiensisSeedOil

Yang Mingfei

(Research and Development Department of Kitanihon Pharmaceutical CO., Toyama 9300314, Japan); Su Wen(Public Medical Institutions Management Center, Doumen District, Zhuhai, Guangdong Province, P. R. China); Wang Haiying(Northeast Forestry University)Journal of Northeast Forestry University，2017,45(12)：80-82.

Pinuskoraiensisseed oil, Antioxidant properties, Scavenging free radicals

楊明非，男，1989年10月生，北日本制藥株式會社產(chǎn)品研發(fā)室，臨床醫(yī)學(xué)碩士。E-mail：ymfarcher@163.com。

王海英，東北林業(yè)大學(xué)林學(xué)院，副教授。E-mail：haiyingwang908@126.com。

2017年10月10日。

張 玉。

S789.7

Theinvitroantioxidant activity ofPinuskoraiensisseed oil was studied, the total reducing power ofP.koraiensisseed oil was determined, and the scavenging ability of DPPH·, and the ability to remove hydroxyl groups were determined. The total reducing power ofP.koraiensisseed oil was weak, and the absorbance at 50% content was 0.211, which was much lower than that of control group. DPPH·, and ·OH scavenging ability was more significant, the DPPH· clearance rate was slightly higher than that of the ·OH. The concentration above 500 g/L ofP.koraiensisseed oil on the two clearance rate reached 100%, and IC50 of two were 22.05-23.69 g/L and 13.74-13.74 g/L, respectively. Therefore, the ability ofinvitroscavenging free radicals ofP.koraiensisseed oil was significant.