蔣業(yè)慧，譚世新，翟衛(wèi)爽，李紅燕，劉華，楊學(xué)云

（1.新疆天山畜牧生物工程股份有限公司，昌吉 831100；2.新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所，烏魯木齊 830000）

自家無乳鏈球菌乳房炎疫苗使用效果評價(jià)

蔣業(yè)慧1，譚世新1，翟衛(wèi)爽1，李紅燕1，劉華1，楊學(xué)云2

（1.新疆天山畜牧生物工程股份有限公司，昌吉 831100；2.新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所，烏魯木齊 830000）

本研究采集某奶牛場全群泌乳牛的奶樣，經(jīng)美國加利福尼亞隱性乳房炎測試法（CMT）檢測后，對陽性奶樣進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)并鑒定出該場隱性乳房炎的主要致病菌，制作自家乳房炎疫苗。通過病原菌檢測、隱性乳房炎發(fā)病率及體細(xì)胞數(shù)的變化趨勢分析，評估自家乳房炎疫苗的使用效果，以供參考。

乳房炎疫苗；隱性乳房炎；無乳鏈球菌；體細(xì)胞數(shù)

奶牛乳房炎是乳房組織因受到微生物入侵、物理或化學(xué)損傷而引起的一種炎癥反應(yīng)，是病原微生物、環(huán)境因素、管理因素、奶牛自身及遺傳因素等綜合作用的結(jié)果[1,2]。由于乳房炎的致病菌種類繁多且不斷變異，同時(shí)新耐藥菌株又不斷出現(xiàn)[3]，有條件的規(guī)?；翀隹梢钥紤]制備自家乳房炎疫苗。自家苗的制備可有效提高疫苗使用效果，使用疫苗后應(yīng)定時(shí)隨機(jī)采集乳樣進(jìn)行病原菌檢測，以對牧場所流行的乳房炎致病菌種類進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測，同時(shí)對疫苗使用效果進(jìn)行評估[4]。本研究對某奶牛場主要乳房炎致病菌進(jìn)行了鑒定[5]，制作了自家乳房炎疫苗，并對全群泌乳牛進(jìn)行了免疫接種，通過病原菌檢測、隱性乳房炎發(fā)病率及體細(xì)胞數(shù)的變化趨勢分析，評估自家乳房炎疫苗的使用效果，為牧場奶牛乳房炎的防控提供了有力保障。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

2016年6月2日，采集某奶牛場全群泌乳牛的奶樣置于10mL離心管，詳細(xì)記錄牛號，共收集有效奶樣213份。

1.2 隱性乳房炎檢測

采用CMT對每份奶樣進(jìn)行隱性乳房炎檢測，具體結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)見表1。隱性乳房炎診斷液由新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所提供。

表1 CMT的判定標(biāo)準(zhǔn)

表2 全群免疫前隱性乳房炎發(fā)病率與病原菌檢出率

表3 免疫前后隱性乳房炎發(fā)病率與病原菌檢出率比較

1.3 病原菌分離鑒定

將隱性乳房炎陽性奶樣送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病原菌檢測與分離鑒定。

1.4 自家疫苗的制備

參考相關(guān)文獻(xiàn)[6]制作自家疫苗：取主要致病菌的純化培養(yǎng)液（每毫升含活菌數(shù)10億～100億），加入0.5%福爾馬林，37℃ 16～24h滅活，做無菌試驗(yàn)檢測后分裝備用[6]。自家疫苗由新疆畜牧科學(xué)院獸醫(yī)研究所研制。

1.5 免疫程序

2016年6月12日，采用自家乳房炎疫苗對產(chǎn)后30d的全群泌乳牛進(jìn)行群體免疫，肌肉注射2mL/頭，首次免疫后間隔2個(gè)月，于2016年8月4日，加強(qiáng)免疫一次。

1.6 免疫效果監(jiān)測

在免疫前（2016年6月2日）和第二次免疫30d后（2016年9月18日），采集全群泌乳牛的奶樣送至實(shí)驗(yàn)室做病原菌檢測，結(jié)合每月奶牛生產(chǎn)性能測定（DHI）的牛奶中體細(xì)胞數(shù)及隱性乳房炎發(fā)病率變化趨勢對自家疫苗的免疫效果進(jìn)行評價(jià)。

2 結(jié)果與分析

2.1 免疫前檢測結(jié)果

由表2可知，對213份泌乳牛奶樣進(jìn)行隱性乳房炎檢測，其中92份奶樣顯示為隱性乳房炎陽性，陽性率為43%。將92份隱性乳房炎陽性奶樣全部接種培養(yǎng)，分離的病原菌主要有無乳鏈球菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌，且檢出率分別為13.62%、3.76%、3.76%。由病原菌檢測結(jié)果可知無乳鏈球菌是乳房炎的主要致病菌。為此制作了無乳鏈球菌乳房炎疫苗，并對全群泌乳牛進(jìn)行免疫接種。

2.2 免疫結(jié)果檢測

2.2.1 免疫前后比較

因干奶期、奶樣污染、檢測數(shù)據(jù)異常等原因，最終統(tǒng)計(jì)了81頭泌奶牛的有效檢測數(shù)據(jù)。由表3可知，隱性乳房炎的發(fā)病率由49.4%下降到12.4%，無乳鏈球菌的檢出率由13.6%下降到0；金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的檢出率無顯著變化。由表4可知，經(jīng)過兩次無乳鏈球菌乳房炎疫苗免疫后，隱性乳房炎的轉(zhuǎn)陰率達(dá)到85%。結(jié)果表明，該疫苗對無乳鏈球菌乳房炎具有一定的預(yù)防及治療作用，但對環(huán)境致病菌引發(fā)的隱性乳房炎無積極作用。

表4 兩次免疫后隱性乳房炎及無乳鏈球菌轉(zhuǎn)陰率

2.2.2 免疫前后體細(xì)胞數(shù)變化情況

以上述81頭泌乳牛為調(diào)查對象，對其中部分牛只的體細(xì)胞數(shù)變化情況進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，由表5可知，第一次免疫前后，31%牛的體細(xì)胞數(shù)有所降低；加強(qiáng)免疫前后，38%牛的體細(xì)胞數(shù)有所降低；加強(qiáng)免疫后與未免疫前相比，52%牛的體細(xì)胞數(shù)有所降低。由此可知，81頭泌乳牛在經(jīng)過兩次無乳鏈球菌乳房炎疫苗免疫后，平均體細(xì)胞數(shù)有明顯降低。也說明無乳鏈球菌乳房炎疫苗的使用效果較為顯著，加強(qiáng)對無乳鏈球菌引起的乳房炎有一定的預(yù)防作用，且加強(qiáng)免疫后免疫效果有顯著提升。

表5 免疫前后體細(xì)胞數(shù)變化情況

3 討論

奶牛乳房炎的致病菌呈現(xiàn)多樣性，據(jù)報(bào)道[7]，引起此病的主要致病菌為金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌和大腸桿菌，且約占整個(gè)奶牛乳房炎病例的90%～95%，與該奶牛場乳房炎的主要致病菌種類一致。目前，防治乳房炎最有效的方法是在改善環(huán)境衛(wèi)生和擠奶程序的基礎(chǔ)上，結(jié)合藥物治療與疫苗免疫的綜合防控手段。

由于乳房炎致病原種類多的特點(diǎn)，比起單聯(lián)疫苗，多聯(lián)疫苗更受到牧場的青睞[8]。但金黃色葡萄球菌和大腸桿菌為環(huán)境性致病菌[9]，若牛場有嚴(yán)格的消毒與飼養(yǎng)流程，可不對此兩種病原進(jìn)行免疫。該奶牛場乳房炎的主要致病菌除環(huán)境菌外，主要是無乳鏈球菌，考慮單聯(lián)疫苗更具有針對性，免疫效果比多聯(lián)苗更佳，所以采用的疫苗是自制的無乳鏈球菌疫苗。通過一年的免疫效果監(jiān)測可知，自制無乳鏈球菌疫苗在防治乳房炎中有顯著效果，可在該場推廣使用。

[1] 趙興緒.獸醫(yī)產(chǎn)科學(xué)(第3版)[M].北京:農(nóng)業(yè)出版社,2002:458-459.

[2] 李勇,葛秀國,竇忠英.奶牛隱性乳房炎研究進(jìn)展[J].黃牛雜志,2003,29(1):38-41.

[3] 姚偉,于學(xué)武,曹波,等.遼寧地區(qū)奶牛乳房炎細(xì)菌性病原學(xué)鑒定及大腸桿菌藥敏試驗(yàn)[J].中國畜牧獸醫(yī),2016,43(11):3080-3084.

[4] 蔣業(yè)慧,王愛芳, 翟衛(wèi)爽,等. 奶牛乳房炎綜合防控研究現(xiàn)狀[J].新疆畜牧業(yè),2016,2:27-30.

[5] 薛永康,王新莊,閆躍飛,等.奶牛乳房炎診斷方法研究進(jìn)展[J].湖北畜牧獸醫(yī),2016,8(37):15-19.

[6] 陸有飛,高永銳,吳遠(yuǎn)松.畜禽自家疫苗的制備與應(yīng)用[J].廣西畜牧獸醫(yī),2008,11:58-60.

[7] 黃瑛,尹曉敏,李麗好,等.奶牛臨床型乳房炎病原菌的分離與鑒定[J].中國畜牧獸醫(yī),2007,34(12):74-76.

[8] 林鋒強(qiáng),潘杭君,胡松華.奶牛乳房炎疫苗研究進(jìn)展[J].中國奶牛,2002,1:40-43.

[9] 李宏勝,郁杰,李新圃,等.奶牛乳房炎病原菌區(qū)系分布及發(fā)病規(guī)律研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2005,26(6):146-149.

Evaluation of the Effects on Self-developed Mastitis Vaccine Against Streptococcus agalactiae

JIANG Ye-hui1, TAN Shi-xin1, ZHAI Wei-shuang1, LI Hong-yan1, LIU Hua1, YANG Xue-yun2
(1.Xinjiang Tianshan Animal Husbandry Bio-engineering co., LTD, Changji 831100;2.Research Institute of Veterinary Medicine, Xinjiang Academy of Animal Sciences, Urumqi 830000)

In order to clarify the pathogen of mastitis in dairy cattle, the milk samples of the whole group of dairy cows were collected, and the recessive mastitis test was performed with the California recessive mastitis test (CMT).To determine the main pathogens in the farm of mastitis and make their own mastitis vaccine, positive milk samples were cultured and the advantages of pathogenic bacteria species were identified. Through the changes of pathogenic bacteria and somatic cell count and the recessive mastitis, the effects of mastitis vaccine were evaluated.

Mastitis vaccine; Recessive mastitis;Streptococcus agalactiae; Somatic cells count

S858.23

A

1004-4264（2017）12-0034-03

10.19305/j.cnki.11-3009/s.2017.12.009

2017-03-06

蔣業(yè)慧（1986-），女，漢族，碩士，研究方向?yàn)轭A(yù)防獸醫(yī)學(xué)。

楊學(xué)云（1978-），男，寧夏中衛(wèi)人，助理研究員，從事動(dòng)物微生物學(xué)與免疫學(xué)研究工作。