鄭飛云，鈕成拓，朱林江，張逸秋，李永仙，劉春鳳，王金晶，李崎*

1(江南大學(xué) 生物工程學(xué)院,工業(yè)生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 無錫，214122)2(江南大學(xué),食品安全與營(yíng)養(yǎng)協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 無錫，214122)3(浙江工業(yè)大學(xué) 生物工程學(xué)院，浙江 杭州，310014)

梯度平板法定量分析啤酒污染細(xì)菌的四氫異-α-酸抗性

鄭飛云1,2，鈕成拓1,2，朱林江3，張逸秋1,2，李永仙1,2，劉春鳳1,2，王金晶1,2，李崎1,2*

1(江南大學(xué) 生物工程學(xué)院,工業(yè)生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇 無錫，214122)2(江南大學(xué),食品安全與營(yíng)養(yǎng)協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 無錫，214122)3(浙江工業(yè)大學(xué) 生物工程學(xué)院，浙江 杭州，310014)

快速定量分析啤酒污染細(xì)菌的酒花抗性和腐敗啤酒能力，對(duì)啤酒的工業(yè)生產(chǎn)具有重要的應(yīng)用價(jià)值。該研究首先優(yōu)化并建立了基于酒花苦味物質(zhì)四氫異-α-酸梯度平板的定量分析方法，并通過該方法定量分析23株啤酒污染細(xì)菌的四氫異-α-酸最小抑制濃度、比較分析液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況和菌株的腐敗啤酒能力。研究結(jié)果表明，酒花苦味物質(zhì)四氫異-α-酸的濃度梯度平板法，能夠簡(jiǎn)單快速并定量分析啤酒污染細(xì)菌的四氫異-α-酸抗性，同時(shí)能夠評(píng)估菌株的腐敗啤酒能力。

啤酒污染細(xì)菌；酒花抗性；酒花苦味物質(zhì)；四氫異-α-酸；快速檢測(cè)

啤酒污染細(xì)菌(beer spoilage bacteria)是在接種酵母、發(fā)酵、過濾等啤酒釀造過程和成品啤酒等環(huán)境中能夠生存或繁殖，對(duì)啤酒的釀造和貯存構(gòu)成威脅的細(xì)菌總稱[1]。雖然隨著現(xiàn)代啤酒釀造技術(shù)和灌裝技術(shù)的不斷發(fā)展，極大地降低了啤酒污染細(xì)菌的危害，但是在啤酒釀造過程中對(duì)啤酒污染細(xì)菌的監(jiān)控依然是必不可少的。目前普遍采用豐富培養(yǎng)基的檢測(cè)方法[2]，如添加環(huán)己酰亞胺的MRS和Rka-Ray培養(yǎng)基；也有添加啤酒中營(yíng)養(yǎng)成分和生長(zhǎng)因子的培養(yǎng)基UBA和NBB等。不過，通過這些檢測(cè)培養(yǎng)基的分析，只能分析啤酒污染細(xì)菌的數(shù)量，難以對(duì)分離菌株的腐敗性能進(jìn)行快速鑒定[3]。鑒定啤酒污染細(xì)菌腐敗能力的傳統(tǒng)方法是植菌實(shí)驗(yàn)，即將分離菌株重新接種到啤酒中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分析其生長(zhǎng)情況，一般需要花費(fèi)1個(gè)月以上，難以有效地指導(dǎo)生產(chǎn)。所以，需要發(fā)展快速鑒定方法，用于快速鑒定啤酒污染細(xì)菌腐敗能力。

啤酒污染細(xì)菌的腐敗能力，取決于污染細(xì)菌在啤酒環(huán)境中的生長(zhǎng)能力。一般而言，啤酒是一種安全的飲料，這是由于啤酒中不僅含有一定濃度的乙醇、低pH環(huán)境、痕量的氧氣和高濃度的二氧化碳，而且含有一定濃度的酒花苦味物質(zhì)。這種環(huán)境能夠抑制絕大多數(shù)細(xì)菌的生長(zhǎng)。然而，仍有少量細(xì)菌能夠在啤酒環(huán)境中生長(zhǎng)，對(duì)啤酒的發(fā)酵和保藏構(gòu)成威脅。這種細(xì)菌主要是一些乳桿菌、片球菌以及一些絕對(duì)厭氧菌。這些細(xì)菌在啤酒環(huán)境中生長(zhǎng)的一個(gè)典型特征是必須具有酒花抗性，即耐受啤酒中存在的酒花苦味物質(zhì)[4]。四氫異-α-酸是基于酒花苦味物質(zhì)α-酸開發(fā)的一種新型酒花苦味物質(zhì)，具有更高的苦味值和更強(qiáng)的抑菌效果，已成為啤酒工業(yè)常用的酒花制品。因此，目前本文使用四氫異-α-酸進(jìn)行啤酒污染細(xì)菌的抑制實(shí)驗(yàn)。已有研究表明，在啤酒污染細(xì)菌中，腐敗啤酒能力與與其酒花抗性能力具有一定的相關(guān)性[5-7]。所以，酒花抗性是研究啤酒污染細(xì)菌的一個(gè)重要生理特征。也已探索了基于酒花抗性機(jī)制而建立的快速檢測(cè)方法，如基于酒花抗性相關(guān)基因horA和horC的多重PCR檢測(cè)方法[8]、基于酒花抗性菌株表面抗原特征的單克隆抗體檢測(cè)方法[3,9]、基于菌種的PCR檢測(cè)方法[10]和熒光原位雜交技術(shù)[11]等。而這些快速檢測(cè)方法，仍難以定量檢測(cè)啤酒污染細(xì)菌的酒花抗性和腐敗啤酒能力。

為了快速評(píng)價(jià)啤酒污染細(xì)菌的腐敗能力，本次研究選用實(shí)驗(yàn)室保藏的啤酒污染細(xì)菌資源庫(kù)中的多個(gè)菌株，建立梯度平板快速定量分析啤酒污染細(xì)菌四氫異-α-酸抗性的方法，并比較分析啤酒污染細(xì)菌酒花苦味物質(zhì)四氫異-α-酸最小抑制濃度與其腐敗能力的相關(guān)性。

1 材料和方法

1.1 菌株及培養(yǎng)方法

本次研究所使用的啤酒污染細(xì)菌，是實(shí)驗(yàn)室保藏，分離自國(guó)內(nèi)多個(gè)不同啤酒廠，并經(jīng)過菌種鑒定，主要屬于乳桿菌屬。培養(yǎng)條件：采用MRS培養(yǎng)基或添加了四氫異-α-酸的MRS培養(yǎng)基，在28 ℃進(jìn)行厭氧培養(yǎng)。厭氧環(huán)境：培養(yǎng)皿的培養(yǎng)在厭氧罐中進(jìn)行；液體培養(yǎng)在厭氧管或厭氧瓶中進(jìn)行。

1.2 四氫異-α-酸梯度平板的制備

四氫異-α-酸制品(美國(guó)哈斯公司)是含有9 g/L的四氫異-α-酸的溶液，將其作為母液，用于配制不同濃度的四氫異-α-酸的培養(yǎng)基。四氫異-α-酸梯度平板的制作采用方形培養(yǎng)皿，制作方法如下：配制含高濃度四氫異-α-酸0.5 g/L的MRS瓊脂培養(yǎng)基和不含四氫異-α-酸的MRS培養(yǎng)基；將方形培養(yǎng)皿傾斜10°，倒入20 mL含高濃度四氫異-α-酸的MRS培養(yǎng)基；待第1層凝固后，將培養(yǎng)皿放平，然后倒入20 mL不含四氫異-α-酸的MRS培養(yǎng)基；凝固后放入自封袋，放入4 ℃冰箱，至少放置 1 d，使下層培養(yǎng)基中的四氫異-α-酸向上滲透，使培養(yǎng)基表面形成酒花梯度，待用。

1.3 菌株的四氫異-α-酸最小抑制濃度的分析

首先采用MRS培養(yǎng)基活性菌株：將保藏管中的啤酒污染細(xì)菌接入裝有20mL MRS液體培養(yǎng)基的厭氧管中進(jìn)行活化，接種量為5%，30 ℃下厭氧培養(yǎng)24～48 h；轉(zhuǎn)接活化細(xì)胞到新鮮的20 mL MRS中，相同條件下厭氧培養(yǎng)12～24 h，使細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期；通過培養(yǎng)皿背面標(biāo)記均分涂布區(qū)域：將方形梯度平板分為6塊平行區(qū)域；每1塊區(qū)分平均分為6個(gè)小格，從低濃度端開始依次將每個(gè)小格標(biāo)記為格子1#—格子6#；取10 μL培養(yǎng)液，均勻滴加到四氫異-α-酸梯度平板的相應(yīng)位置；用涂布棒在平板的固定區(qū)域涂布均勻，并使培養(yǎng)液被吸干；在28 ℃，厭氧罐中，培養(yǎng)3～5 d；觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。

各個(gè)四氫異-α-酸最小抑制濃度(MIC)的計(jì)算如公式(1)所示：

(1)

式中：MIC，菌株的四氫異-α-酸的最小抑制濃度，%；C高，高濃度端的四氫異-α-酸濃度，%；C低，低濃度端的四氫異-α-酸濃度，%；6，每個(gè)菌株生長(zhǎng)的培養(yǎng)基平板上平均分為6格；n，實(shí)驗(yàn)菌株生長(zhǎng)的格子數(shù)。

1.4 四氫異-α-酸脅迫條件下的菌株生長(zhǎng)能力分析

將活化菌株接種到含不同四氫異-α-酸濃度的MRS液體培養(yǎng)基中；厭氧管中，28 ℃培養(yǎng)；每24 h取樣300 μL到1.5 mL的離心管中；取200 μL到96孔板，通過酶標(biāo)儀分析OD600；比較分析不同菌株的生長(zhǎng)情況。

1.5 紫外分光光度法測(cè)定酒花浸膏苦味值

將制備好的樣品10 mL置于50 mL刻度離心管中，加0.5 mL 6 mol/L HCl酸化，加入20 mL異辛烷；擰緊塑料蓋，放入自動(dòng)振蕩器，設(shè)置振幅為2～3 cm，頻率為200次/min，振蕩30 min后取出，放入離心機(jī)，3 000 r/min離心10 min；取離心后的上清液置于1 cm石英比色皿中，于波長(zhǎng)275 nm處，以異辛烷作空白測(cè)定吸光度?？辔吨蛋垂?2)計(jì)算：

苦味值(BU)=A275×50

(2)

1.6 菌株的腐敗啤酒能力分析

1.6.1 污染細(xì)菌的活化

將保藏管中的啤酒污染細(xì)菌接入裝有20 mL MRS液體培養(yǎng)基的厭氧管中進(jìn)行活化，接種量為5%，30 ℃下厭氧培養(yǎng)24～48 h；轉(zhuǎn)接活化細(xì)胞到新鮮的20 mL MRS中，相同條件下厭氧培養(yǎng)3 d，使細(xì)胞生長(zhǎng)至穩(wěn)定期。

1.6.2 成品啤酒的消毒

對(duì)成品啤酒進(jìn)行巴士消毒，開蓋用滅菌紗布包好靜置2 d除氣；將啤酒分裝入已滅菌的厭氧管中，每管20 mL。

1.6.3 植菌實(shí)驗(yàn)

將已活化的菌液接入啤酒中，接種量為1%，28 ℃下培養(yǎng)1個(gè)月，能使啤酒變渾濁的即為啤酒污染細(xì)菌，并取200 μL通過96孔板測(cè)定最終OD600值。

2 結(jié)果和討論

2.1 四氫異-α-酸梯度平板快速檢測(cè)啤酒污染細(xì)菌的四氫異-α-酸抗性

優(yōu)化后的四氫異-α-酸梯度平板的制作方法如圖1A所示。方型培養(yǎng)皿有利于梯度平板的制作，提高其重復(fù)性。在制作梯度平板方面還需注意的其他細(xì)節(jié)包括：1)制做第1層高濃度酒花浸膏的培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)在稍高溫度下時(shí)倒置，有利于培養(yǎng)基表面的平整；2)第2層低濃度酒花浸膏的培養(yǎng)基倒置完成后，盡量吹干，有利于活化菌液的涂布。

從實(shí)驗(yàn)室保藏的啤酒污染細(xì)菌資源庫(kù)中，活化了其中23株，如表1所示，用于本次研究。這些菌株主要來自于長(zhǎng)三角地帶的啤酒工廠，具備一定的繁殖能力。采用四氫異-α-酸高濃度為0.05%和低濃度為0%的梯度平板，對(duì)這些菌株的四氫異-α-酸抗性進(jìn)行分析，結(jié)果如圖1B所示。不同菌株在梯度平板中的生長(zhǎng)能力存在顯著差異，其四氫異-α-酸的MIC如表1所示。

A：四氫異-α-酸梯度平板的制作方法示意圖;B：梯度平板分析啤酒污染細(xì)菌菌株的四氫異-α-酸最小抑制濃度1-18的菌株編號(hào)依次為：2-9-2、1-8-2、2-5-3、3-6-3、6-12-4、6-14-3、3-14-2、6-17-3、6-20-2、3-13-4、6-20-2、2-13-1、1-5-3、2-14-1、3-13-1、1-6-1、2-9-5圖1 梯度平板快速分析菌株的四氫異-α-酸抗性Fig.1 Resistance of strains towards tetrahydro-iso-α-acid

表1 各個(gè)菌株的四氫異-α-酸最小抑制濃度和12°P啤酒中的生長(zhǎng)能力Table 1 MIC values and growth ability of different strains in 12°P beer

續(xù)表1

啤酒污染細(xì)菌菌株四氫異?α?酸的最小抑制濃度/%12°P啤酒中的生長(zhǎng)能力aL rossiae6-20-10 009+L rossiae6-20-20 0375+++L lactis2-6-30 0038±

注a：12°P啤酒中的生長(zhǎng)能力：接種到12°P啤酒中培養(yǎng)30 d后，通過96孔板測(cè)定其OD600值，“±”：OD = 0～0.02；“+”：OD = 0.02～0.04；“++”：OD = 0.04～0.06；“+++”：OD = 0.06～0.12。

在3塊梯度平板中，5#、7#和18#涂布區(qū)域的菌株具有最好的生長(zhǎng)能力，菌斑遍及全部的6個(gè)格子，其四氫異-α-酸應(yīng)接近或高于0.05%，其對(duì)應(yīng)的菌株分別是L.plantarum6-12-4、L.plantarum3-14-2和L.paracasei2-9-5。所以，四氫異-α-酸梯度平板能夠有效地鑒定不同四氫異-α-酸抗性能力的菌株，并根據(jù)生長(zhǎng)菌斑的長(zhǎng)度，對(duì)各個(gè)菌株的四氫異-α-酸MIC進(jìn)行了初步地定量分析。

2.2 四氫異-α-酸脅迫條件下菌株生長(zhǎng)能力的比較

采用四氫異-α-酸梯度平板，能夠快速有效地定量分析各個(gè)菌株對(duì)酒花苦味物質(zhì)四氫異-α-酸的耐受能力。為了驗(yàn)證其分析結(jié)果，選取了6株啤酒污染細(xì)菌，比較其在含有一定濃度四氫異-α-酸的液體MRS培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況，結(jié)果如圖2所示。

圖2 0.005%(A)和0.01%(B)濃度四氫異-α-酸脅迫條件下的菌株生長(zhǎng)曲線Fig.2 Growth curves of different strains in MRS media with 0.005% (A) and 0.01% (B) tetrahydro-iso-α-acid

采用的脅迫條件為，四氫異-α-酸含量分別為0.005%和0.01%的液體MRS培養(yǎng)基，通過紫外分光光度法測(cè)定其對(duì)應(yīng)的苦味值分別是42.6 BU和80.5 BU。這6株菌在0.005%四氫異-α-酸的脅迫條件下，均表型出一定的生長(zhǎng)能力，具有一定的四氫異-α-酸抗性能力。在0.01%四氫異-α-酸的脅迫條件下時(shí)，L.brevis1-5-1和L.paracasei2-15-2的生長(zhǎng)已被抑制，其最小抑制濃度應(yīng)在0.005%～0.01%，而梯度平板分析結(jié)果表明其MIC分別為0.009%和0.007 5，具有較好匹配性。菌株L.plantarum6-12-4和L.plantarum1-8-2在這兩種條件下，生長(zhǎng)能力并未發(fā)生明顯變化，表現(xiàn)出較強(qiáng)的四氫異-α-酸抗性，而梯度平板分析結(jié)果表明其MIC也較高。L.casei2-14-1在這2種條件下，生長(zhǎng)的細(xì)胞密度(OD值)較小，但是變化不大，其在0.01%四氫異-α-酸的脅迫條件下仍能夠生長(zhǎng)，表明其最小抑制濃度應(yīng)大于0.01%，而梯度平板分析結(jié)果表明其MIC值為0.015%。L.plantarum1-6-1的情況比較特別，在低濃度四氫異-α-酸(0.005%)脅迫，其生長(zhǎng)速率較快，而在0.01%四氫異-α-酸脅迫下，生長(zhǎng)能力顯著下降。盡管通過梯度平板分析，其MIC為0.03%，大于L.casei2-14-1和L.plantarum1-8-2的MIC。所以，四氫異-α-酸的梯度MRS平板，能夠快速區(qū)分不同菌株的四氫異-α-酸抗性能力，具有較好的準(zhǔn)確性，但同時(shí)其定量分析的準(zhǔn)確性有待進(jìn)一步完善。

2.3 四氫異-α-酸抗性菌株的啤酒腐敗能力

對(duì)細(xì)菌而言，在啤酒環(huán)境中，除了酒花苦味物質(zhì)外，還存在其他的脅迫條件，包括低pH值、極少量的O2、低濃度的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和一定濃度的酒精等。為了評(píng)價(jià)啤酒污染細(xì)菌的酒花抗性強(qiáng)弱與其腐敗啤酒能力之間的相關(guān)性，對(duì)實(shí)驗(yàn)的啤酒污染細(xì)菌菌株進(jìn)行傳統(tǒng)的植菌實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如表1所示。表1不同菌株，在12°P啤酒環(huán)境中的生長(zhǎng)能力差異較大。根據(jù)其生長(zhǎng)的OD值，將23株啤酒污染細(xì)菌分為4類，即4種腐敗強(qiáng)度。具有“+++”的菌株，經(jīng)過1個(gè)月培養(yǎng)，存在明顯的渾濁現(xiàn)象，具有很強(qiáng)的腐敗啤酒能力。

2.4 酒花抗性與啤酒腐敗能力的相關(guān)性分析

按照菌株在12°P啤酒中生長(zhǎng)能力區(qū)分，其四氫異-α-酸抗性具有一定的分布特征，如表2所示。除了L.paracasei2-9-5外，其啤酒腐敗能力為“+”，但四氫異-α-酸的MIC為大于0.05%，其它菌株的四氫異-α-酸抗性與啤酒腐敗能力存在正相關(guān)性，即四氫異-α-酸抗性越強(qiáng)，其啤酒腐敗能力也越強(qiáng)。這一結(jié)果表明，在啤酒環(huán)境中，限制啤酒污染細(xì)菌生長(zhǎng)的主要因素是酒花苦味物質(zhì)四氫異-α-酸。在實(shí)驗(yàn)的23株菌株中，大部分菌株的啤酒污染細(xì)菌能力為“+”，其四氫異-α-酸的在0.007 5%～0.022 5%之間。所以，酒花苦味物質(zhì)四氫異-α-酸的梯度平板能夠快速定量分析啤酒污染細(xì)菌的四氫異-α-酸抗性，進(jìn)而初步判斷其啤酒腐敗能力。

表2 啤酒腐敗能力與四氫異-α-酸抗性的相關(guān)分析Table 2 Relative analysis of corruption ability and tetrahydro-iso-α-acid resistance ability

3 結(jié)論

本次研究開發(fā)了一種快速分析啤酒腐菌酒花四氫異-α-酸抗性和腐敗啤酒能力的方法。該方法是采用方形培養(yǎng)皿，制作四氫異-α-酸的梯度濃度固體培養(yǎng)基，通過劃線和培養(yǎng)鑒定其酒花抗性。通過菌膜生長(zhǎng)長(zhǎng)度，初步估計(jì)菌株的四氫異-α-酸最小抑制濃度，達(dá)到定量分析。通過對(duì)實(shí)驗(yàn)室保藏的23株啤酒污染細(xì)菌菌株的四氫異-α-酸最小抑制濃度分析，并比較菌株在液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)情況和在12°P啤酒中的生長(zhǎng)情況，證實(shí)酒花苦味物質(zhì)梯度濃度固體培養(yǎng)基方法，在分析菌株的酒花四氫異-α-酸抗性和腐敗啤酒能力方面，具有簡(jiǎn)單快速的優(yōu)點(diǎn)，定量分析結(jié)果具有一定準(zhǔn)確性和參考價(jià)值，能夠指導(dǎo)實(shí)際生產(chǎn)。此外，從啤酒污染細(xì)菌四氫異-α-酸抗性與腐敗啤酒能力的相關(guān)性分析，證實(shí)酒花苦味物質(zhì)四氫異-α-酸是限制啤酒污染細(xì)菌在啤酒環(huán)境中生長(zhǎng)的主要因素。

[1] SUZUKI K.125th anniversary review,microbiological instability of beer caused by spoilage bacteria [J]. Journal of Institute of Brewing,2011,117(2): 131-155.

[2] SAKAMOTO K,KONINGS W N. Beer spoilage bacteria and hop resistance [J]. International Journal of Food Microbiology,2003,89(2-3): 105-124.

[3] 朱林江,鄭飛云,李崎，等. 啤酒腐敗菌的檢測(cè)方法[J]. 食品科學(xué),2007,28(1): 360-366.

[4] 鄭飛云,朱林江,李崎，等. 啤酒腐敗菌的酒花抗性[J]. 生命的化學(xué),2006,26(5): 419-421.

[5] SAKAMOTO K,MARGOLLES A,VEEN H W.,et al. Hop resistance in the beer spoilage bacteriumLactobacillusbrevisis mediated by the ATP-binding cassette multidrug transporter HorA [J]. Journal of Bacteriology,2001,183(18): 5 371-5 375.

[6] IIJIMA K,SUZUKI K,OZAKI K,et al. horC confers beer-spoilage ability on hop-sensitiveLactobacillusbrevisABBC45cc[J]. Journal of Applied Microbiology,2006,100(6): 1 282-1 288.

[7] FERNANDEZ J L,SIMPSON W J. Aspects of the resistance of lactic acid bacteria to hop bitter acids[J]. Journal of Applied Bacteriology,1993,75(4): 315-319.

[8] HAAKENSEN M,SCHUBERT A,ZIOLA B. Multiplex PCR for putativeLactobacillusandPediococcusbeer-spoilage genes and ability of gene presence to predict growth in beer[J]. Journal of American Society of Brewing Chemists,2008,66(2): 63-70.

[9] YASUI T,YODA K. The group E antigen is masked by the paracrystalline surface layer inLactobacillusbrevis[J]. Journal of Fermentation and Bioengineering,1997,84(1): 35-40.

[10] 鄭飛云,金建中,顧國(guó)賢. 啤酒污染乳酸菌PCR引物的設(shè)計(jì)[J]. 釀酒,2002,29(2): 44-47.

[11] 孟思,劉曉宇,王德良，等. 優(yōu)化用FISH檢測(cè)啤酒中乳酸菌流程研究[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè),2010,36(9): 110-115.

Quantitativetestoftetrahydro-iso-α-acidresistanceofbeerspoilagebacteriausinghoptetrahydro-iso-α-acid-gradientmedium

ZHENG Fei-yun1,2, NIU Cheng-tuo1,2, ZHU Lin-jiang3, ZHANG Yi-qiu1,2,LI Yong-xian1,2,LIU Chun-feng1,2,WANG Jin-jingg1,2,LI Qi1,2*

1(The Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education,School of Biotechnology,Jiangnan University, Wuxi 214122,China)2(Synergetic Innovation Center of Food Safety and Nutrition, Jiangnan University, Wuxi 214122,China)3(College of Biotechnology and Bioengineering, Zhejiang University of Technology, Hangzhou 310014,China)

Rapid and quantitative detection of hop resistance and beer spoilage capability in beer spoilage bacteria can effectively guide the beer manufacture of breweries. In this study, a new culture-dependent rapid test method based on hop tetrahydro-iso-α-acid-gradient medium plate was constructed. 23 beer spoilage bacteria strains were used to test the accuracy of method. The minimum inhibitory concentrations of tetrahydro-iso-α-acid, a compound of hop bitter acid, were rapidly detected by the method. The growth capabilities in MRS broth contained tetrahydro-iso-α-acid and 12°P beer broth were compared. These results indicate that the method based on hop tetrahydro-iso-α-acid-gradient plate quite rapid and simple to quantitatively assay hop resistance of beer spoilage bacteria, meantime, evaluate the beer spoilage capability.

beer spoilage bacteria;tetrahydro-iso-α-acid resistance; hop bitter compound;tetrahydro-iso-α-acid; rapid detection

10.13995/j.cnki.11-1802/ts.014777

博士研究生，講師(李崎教授為通訊作者,E-mail： liqi@jiangnan.edu.cn)。

國(guó)家自然科學(xué)基金(No. 31571942 & No.31601558)；國(guó)家高新技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃，No.2013AA102106-03)；江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目(PAPD)；江蘇省自然科學(xué)基金(BK20150159)；江蘇基礎(chǔ)研究資助項(xiàng)目(JUSRP51306A, JUSRP51402A & JUDCF13008)；111引智計(jì)劃(No. 111-2-06)

2017-05-16，改回日期：2017-06-29