付旭　崔前進(jìn)　陳冰　楊博學(xué)　周婧　陳明康　韓雨哲

摘 要：為研究不同的飼料脂肪水平對(duì)淡黑鑷麗魚(yú)（Labidochromis caeruleus）的消化、免疫以及抗氧化酶的影響，選取狀態(tài)良好的淡黑鑷麗魚(yú)120尾隨機(jī)平均分成5個(gè)實(shí)驗(yàn)梯度，用脂肪含量分別為7.44%、9.86%、1091%、15.25%和23.69%的飼料進(jìn)行飼養(yǎng)試驗(yàn)，各3組平行，按脂肪水平從低到高分別用Z1、Z2、Z3、Z4和Z5表示。試驗(yàn)周期68 d。結(jié)果表明：隨著飼料中脂肪水平的增加，脂肪酶Z4顯著高于其他組（P<0.05）；胃蛋白酶活力和淀粉酶活力出現(xiàn)先增后降再增加的趨勢(shì)（P<0.05）；乳酸脫氫酶活力Z4顯著低于其他各組（P<0.05）；酸性磷酸酶活力Z2顯著高于其他各組（P<0.05）；堿性磷酸酶活力Z5顯著低于其他組（P<0.05）；過(guò)氧化氫酶活力Z3顯著高于其他各組（P<0.05）；丙二醛呈現(xiàn)先增后降再增加趨勢(shì)（P<0.05）；其他抗氧化能力指標(biāo)無(wú)明顯差異（P>0.05）。試驗(yàn)表明飼料中脂肪水平小于10.91%時(shí)隨著脂肪水平的升高對(duì)淡黑鑷麗魚(yú)的消化、免疫以及抗氧化有促進(jìn)增強(qiáng)作用，但脂肪水平高于10.91%會(huì)對(duì)淡黑鑷麗魚(yú)的消化、免疫以及抗氧化能力起到抑制的作用，并且會(huì)影響?hù)~(yú)體的健康狀況。

關(guān)鍵詞：淡黑鑷麗魚(yú)（Labidochromis caeruleus）；脂肪水平；消化酶；免疫酶；抗氧化酶

脂肪對(duì)于魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)發(fā)育非常重要，是魚(yú)類(lèi)主要的能量來(lái)源，維持了魚(yú)類(lèi)的生命活動(dòng)[1]。魚(yú)類(lèi)攝入脂肪的多少會(huì)影響體內(nèi)多種酶的變化[2-3]。攝入過(guò)量的脂肪會(huì)積累在魚(yú)類(lèi)的肝臟、腸壁以及腹腔等部位，導(dǎo)致魚(yú)類(lèi)的代謝處于紊亂，影響?hù)~(yú)類(lèi)的抵抗能力以及活力[4]。攝入適當(dāng)?shù)闹具€會(huì)有助于魚(yú)類(lèi)對(duì)脂溶性物質(zhì)的吸收[5]。在飼料中適當(dāng)?shù)闹竞繒?huì)提高免疫力，但過(guò)量的脂肪也會(huì)產(chǎn)生負(fù)面的影響，比如會(huì)提升魚(yú)體的氧化反應(yīng)，從而激發(fā)魚(yú)體的抗氧化機(jī)制，過(guò)高的脂肪也會(huì)增加魚(yú)類(lèi)患上脂肪肝的幾率從而造成不同程度的肝損傷[6]。

淡黑鑷麗魚(yú)（Labidochromis caeruleus）屬鱸形目、隆頭魚(yú)亞目、慈鯛科、鑷麗魚(yú)屬，屬于馬拉維湖慈鯛?zhēng)r棲類(lèi)小型慈鯛，成年個(gè)體11±1.0 cm，呈橙黃色，背鰭近邊緣處有一條黑色條紋?？蛇m應(yīng)人工飼料。淡黑鑷麗魚(yú)的觀賞價(jià)值取決于體型是否標(biāo)準(zhǔn)和體色的鮮艷程度。

目前，對(duì)淡黑鑷麗魚(yú)的研究較少，主要集中于形態(tài)學(xué)等方面。本試驗(yàn)將以淡黑鑷麗魚(yú)為研究對(duì)象，探討飼料脂肪水平對(duì)淡黑鑷麗魚(yú)消化、抗氧化以及免疫能力的影響，為開(kāi)發(fā)淡黑鑷麗魚(yú)配合飼料提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)用魚(yú)及飼養(yǎng)管理

本試驗(yàn)的試驗(yàn)用魚(yú)由當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖場(chǎng)自行繁育。體質(zhì)量為（1.70±0.5）g。體長(zhǎng)為（47.29±4.5）mm，取狀態(tài)良好的淡黑鑷麗魚(yú)120尾隨機(jī)平均分成5個(gè)試驗(yàn)梯度各3組平行進(jìn)行飼養(yǎng)試驗(yàn)，每個(gè)平行組8尾魚(yú)，于控溫循環(huán)水系統(tǒng)（匯新鈦公司提供）中進(jìn)行整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程，水體積30 L，循環(huán)水流量3 L/min。每組隨機(jī)布置于此系統(tǒng)中，每20日再次將每個(gè)組別隨機(jī)布置，并徹底清理魚(yú)缸。水溫25±1.0 ℃，每日投喂兩次分別于8：00和16：00，投喂至試驗(yàn)魚(yú)不攝食為止。投喂后1 h進(jìn)行吸底，同時(shí)清理糞便收集殘餌，每日18：00換水20%，每日控制均勻光照12 h。保持氧氣充足。試驗(yàn)周期共68 d。

1.2 試驗(yàn)飼料的制備

試驗(yàn)飼料的原料于上海生物工程有限公司。飼料經(jīng)過(guò)研磨、過(guò)篩、攪拌器充分混勻，用小型顆粒飼料制粒機(jī)壓制而成，60 ℃烘箱烘干至含水量18%，于-20 ℃冰箱真空密封避光保存。以大豆油（金龍魚(yú)品牌）為脂肪源，以魚(yú)粉、豆粕等為蛋白源，以淀粉等為糖源。添加的大豆油含量分別為0、30、60、92、170 g/kg，共五組。試驗(yàn)飼料的基本成分以及配比質(zhì)量見(jiàn)表1。

維生素E 4 000 IU、維生素K3 1 000 mg、維生素B1 2 000 mg、維生素B2 1 500 mg、維生素B6 1 000 mg、維生素B12 5 mg、煙酸1 000 mg、維生素C 5 000 mg、泛酸鈣5 000 mg、葉酸100 mg、肌醇10 000 mg、載體葡萄糖及水≤ 10%；礦物質(zhì)混合物為0025 mg/g 預(yù)混料提供（mg/kg）： 氯化鈉107.79、七水硫酸鎂380.02、二水磷酸氫鈉241.91、磷酸二氫鉀665.20、二水磷酸鈣376.70、檸檬酸鐵82.38、乳酸鈣907.10、氫氧化鋁0.52、七水硫酸鋅9.90、硫酸銅0.28、七水硫酸錳2.22、碘酸鈣0.42、一水硫酸鈷2.77。

1.3 試驗(yàn)取樣以及方法

試驗(yàn)期間觀察魚(yú)的生長(zhǎng)發(fā)育、攝食情況、死亡狀況。試驗(yàn)結(jié)束后停食24 h，每個(gè)平行組隨機(jī)取6尾魚(yú)。紗布擦干體表水分，至于冰袋上用滅菌的解剖工具進(jìn)行解剖，取其完整的肝臟和腸道。將每個(gè)平行組所取全部魚(yú)的肝臟做混樣用于測(cè)免疫酶、抗氧化酶，腸道做混樣用于測(cè)消化酶，置于對(duì)應(yīng)組別的離心管內(nèi)置于液氮中，后置于-80 ℃冰箱中短暫儲(chǔ)存，樣品置于滅菌的玻璃勻漿器中，置于碎冰中，加入預(yù)冷的生理鹽水充分勻漿制成20%的勻漿液，于4 ℃、2 500 r離心機(jī)離心10 min取上清。再稀釋成每種不同種酶測(cè)試的最適濃度。勻漿液在8 h內(nèi)測(cè)試完畢。

1.4 指標(biāo)測(cè)定與計(jì)算

采用試劑盒（南京建成生物有限公司）進(jìn)行測(cè)定，針對(duì)胃蛋白酶（PRS）、脂肪酶（LPS）、淀粉酶（AMS）、總氧化物歧化酶（T-SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-PX）和總抗氧化能力（T-AOC）、酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）、乳酸脫氫酶（LDH）和溶菌酶（LZM）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST/GOT）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT/GPT）進(jìn)行測(cè)定并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法

所得數(shù)據(jù)均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，并采用spss 20.0分析軟件進(jìn)行方差齊次檢驗(yàn)和單因素方差分析（One-Way ANOVA）并進(jìn)行Duncan氏多重比較，差異顯著水平為P<0.05。endprint

2 結(jié)果

2.1 飼料水平對(duì)淡黑鑷麗魚(yú)消化能力的影響

表2為淡黑鑷麗魚(yú)消化酶活力受飼料脂肪水平的影響。三種酶在不同脂肪濃度的作用下差異顯著。LPS的活性隨飼料中脂肪水平的增加呈先增后降趨勢(shì)。并于Z4達(dá)到最高值，Z4與Z5之間存在顯著差異（P<0.05），Z4與Z5分別與其他三組無(wú)顯著差異（P>0.05）。PRS隨脂肪水平的增高呈先增后降再增的趨勢(shì)，Z1、Z2與其余三組無(wú)顯著差異（P>0.05），Z3與Z4、Z5兩組有顯著差異（P<0.05）。AMS隨脂肪水平的增高呈先增后降的趨勢(shì)，于Z2達(dá)到最高值。其中Z4與Z1、Z2、Z3三組有顯著差異（P<0.05），Z2與Z3、Z4、Z5三組存在顯著差異（P<0.05），Z1與Z4、Z5兩組存在顯著差異（P<0.05）。

2.2 飼料脂肪水平對(duì)淡黑鑷麗魚(yú)免疫能力的影響

表3為淡黑鑷麗魚(yú)免疫酶活力受飼料脂肪水平的影響，其中各個(gè)組別中的LZM活性無(wú)顯著差異（P>0.05）。LDH的活性隨脂肪水平的增加先增后降，Z4顯著低于Z1、Z2、Z3三組（P<005）。ACP活力隨脂肪水平增加呈現(xiàn)出先增后降再趨于平緩的趨勢(shì)，Z2顯著高于Z1、Z3和Z5（P<0.05）。AKP活力Z1與其他組之間無(wú)顯著差異（P>0.05），Z5顯著低于除Z1外的其他組（P<0.05）。

2.3 脂肪水平對(duì)淡黑鑷麗魚(yú)抗氧化能力的影響

表4為淡黑鑷麗魚(yú)抗氧化能力受飼料脂肪水平的影響，分別為總抗氧化能力、總氧化物歧化酶和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶、過(guò)氧化氫酶和丙二醛，其中T-AOC、T-SOD和GSH-PX在不同脂肪水平下不表現(xiàn)出顯著差異（P>0.05），但總體趨勢(shì)為先增后降。CAT隨脂肪水平的不斷升高呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢(shì)，于Z3處出現(xiàn)最高值，并且顯著高于Z1、Z5兩組（P<0.05）。MDA則呈先升后降再顯著上升的趨勢(shì)，其中Z3顯著高于Z1（P<0.05），Z2、Z4分別與Z1、Z3兩組沒(méi)有顯著差異（P>0.05），而Z5則顯著高于其他組二至三倍（P<0.05）。

3 討論

3.1 飼料水平對(duì)淡黑鑷麗魚(yú)消化能力的影響

魚(yú)類(lèi)消化酶的活性受很多因素影響，如魚(yú)類(lèi)的品種、食性、環(huán)境以及外源攝入的營(yíng)養(yǎng)飼料等[7]。消化酶可催化體內(nèi)化學(xué)變化維持正常的生命活動(dòng)，反映魚(yú)類(lèi)對(duì)飼料的利用率及生長(zhǎng)發(fā)育狀況，故消化酶的研究對(duì)幫助提高魚(yú)類(lèi)的飼料轉(zhuǎn)化率以及促進(jìn)魚(yú)類(lèi)的生長(zhǎng)發(fā)育起重要作用[8]。本試驗(yàn)證實(shí)在飼料中適當(dāng)?shù)闹竞坑兄谔岣叩阼圎愻~(yú)的胃蛋白酶和淀粉酶的活性，但過(guò)高的脂肪含量會(huì)抑制胃蛋白酶和淀粉酶的活性。魚(yú)類(lèi)體內(nèi)脂肪酶的活力受攝入的外源脂肪含量的多少影響。當(dāng)在一定范圍內(nèi)攝入脂肪越多脂肪酶的活力就越強(qiáng)，以便可以消化吸收更多的脂肪來(lái)提供所需的能量，但當(dāng)脂肪攝入量過(guò)高時(shí)，由于脂肪積累過(guò)多會(huì)導(dǎo)致魚(yú)類(lèi)患有營(yíng)養(yǎng)性脂肪肝，并對(duì)魚(yú)體產(chǎn)生毒素，還會(huì)導(dǎo)致肌肉滲出性損失和肌肉營(yíng)養(yǎng)不良，不僅影響?hù)~(yú)的生長(zhǎng)發(fā)育還會(huì)對(duì)魚(yú)體造成損傷，并且影響肝臟分泌各種活性酶[9]。本試驗(yàn)中在飼料脂肪水平極低時(shí)，為了提供足夠的能量而需要消化碳水化合物和蛋白質(zhì)，使得胃蛋白酶和淀粉酶活力增加；當(dāng)飼料脂肪水平繼續(xù)增加時(shí)，由于提供了充足的能量使得不需要蛋白質(zhì)和碳水化合物來(lái)提供能量，從而抑制蛋白酶和淀粉酶的活力[10]。但隨著脂肪含量的繼續(xù)升高，蛋白酶活力又開(kāi)始增加，由于足夠脂肪的消化保證了必須脂肪酸的比例和種類(lèi)的平衡以及充足的能量節(jié)約了蛋白質(zhì)可以開(kāi)始更好的參與魚(yú)體的生長(zhǎng)發(fā)育從而蛋白酶的活力再次升高[11]。直至最高脂肪濃度組由于積累過(guò)多脂肪造成脂肪肝從而導(dǎo)致肝臟無(wú)法正常工作，而導(dǎo)致脂肪酶活力顯著降低使得脂肪無(wú)法被利用，為了維持魚(yú)體正常的代謝所需的能量，只能利用蛋白質(zhì)和碳水化合物，使得蛋白酶和淀粉酶的活力從原來(lái)的基礎(chǔ)再次升高，但由于損傷的肝胰臟是魚(yú)類(lèi)淀粉酶主要的分泌器官，腸道只能分泌少量淀粉酶，所以淀粉酶活力雖然升高也無(wú)法達(dá)到之前的峰值。

3.2 飼料脂肪水平對(duì)淡黑鑷麗魚(yú)免疫酶活力的影響

在謝麗玲[12]對(duì)龜殼攀鱸的研究中提出ACP和AKP的活性對(duì)魚(yú)類(lèi)的免疫能力的強(qiáng)弱起到影響，并發(fā)現(xiàn)ACP和AKP主要由肝臟分泌到血液以及腸道中，ACP和AKP在腸道、肝臟、鰓以及腎臟含量較多，故提出魚(yú)類(lèi)在ACP和AKP的作用下通過(guò)腸胃的代謝作用和鰓以及腎臟的解毒作用提高自身的免疫能力和對(duì)外界的抗逆性。在柳陽(yáng)[13]對(duì)大西洋鮭的研究和王萍[14]對(duì)大鱗副泥鰍的研究中提出了AKP和ACP對(duì)消化吸收以及代謝調(diào)節(jié)起到了重要作用。本試驗(yàn)AKP和ACP活性均為先增加后降低說(shuō)明飼料脂肪水平小于15.25%時(shí)可以增加魚(yú)體的免疫能力以及對(duì)營(yíng)養(yǎng)的消化吸收和新陳代謝功能，但若脂肪攝入過(guò)量會(huì)導(dǎo)致脂肪累積過(guò)多，造成肝臟以及其他器官受損，使得AKP和ACP無(wú)法正常產(chǎn)生分泌，從而降低對(duì)營(yíng)養(yǎng)的吸收能力和免疫能力導(dǎo)致魚(yú)體的抗逆性減弱，在環(huán)境改變時(shí)出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。LDH作為機(jī)體能量代謝中參與糖酵解的重要酶，存在于各組織器官中，主要分布于胞內(nèi)。在生物體內(nèi)，LDH主要催化乳酸脫氫成為丙酮酸，從而完成葡萄糖的無(wú)氧酵解過(guò)程，其基本功能為參與調(diào)節(jié)NAD和NADH的比率，從而對(duì)細(xì)胞內(nèi)一系列生化反應(yīng)起調(diào)控作用[15]。本試驗(yàn)在飼料脂肪水平超過(guò)10.91%時(shí)LDH活力表現(xiàn)出顯著下降，說(shuō)明此時(shí)脂肪攝入量過(guò)多，導(dǎo)致體內(nèi)組織損傷，免疫力下降，抗逆性減弱。與李偉[16]對(duì)鯽魚(yú)的乳酸脫氫酶的研究中提出了魚(yú)體在受到細(xì)菌入侵、體內(nèi)出現(xiàn)組織器官的損傷以及受重金屬影響時(shí)，肝臟等組織中的LDH活力會(huì)降低的結(jié)果相同。

3.3 脂肪水平對(duì)淡黑鑷麗魚(yú)抗氧化能力的影響

本試驗(yàn)中T-AOC、T-SOD、GSH-PX和CAT表現(xiàn)先增后降的趨勢(shì)，其主要原因?yàn)樵谝欢ㄖ竞糠秶鷥?nèi)，脂肪會(huì)對(duì)肝臟產(chǎn)生一定的刺激作用，使得肝臟產(chǎn)生更多的抗氧化酶從而增加魚(yú)體的抗氧化能力，減少脂質(zhì)過(guò)氧化物對(duì)魚(yú)體的損傷，但是如果脂肪攝入過(guò)高，則脂肪過(guò)量沉積于魚(yú)的肝臟、消化道以及體腔等部位，發(fā)生氧化產(chǎn)生過(guò)多的活性氧自由基，破壞細(xì)胞膜機(jī)構(gòu)和功能，對(duì)魚(yú)體肝臟的負(fù)荷增加，導(dǎo)致抗氧化能力的減弱[17]。MDA為過(guò)氧化反應(yīng)的主要代謝產(chǎn)物，其含量作為過(guò)氧化物積累狀況和氧化應(yīng)激程度的重要指標(biāo)[18]。本試驗(yàn)中MDA的先升高則是隨著攝入脂肪的不斷增加，脂質(zhì)過(guò)氧化物不斷積累產(chǎn)生的結(jié)果。Z4組MDA略下降，但抗氧化酶活力沒(méi)有升高并出現(xiàn)下降，由于每組飼料中添加200 mg/kg的葉黃素5 g/kg，葉黃素為脂溶性，并且有很強(qiáng)的的抗氧化作用[19]。脂肪含量的增加促進(jìn)了魚(yú)體對(duì)葉黃素的吸收和累積，使得自由基在魚(yú)體內(nèi)未發(fā)生作用即被葉黃素清除，導(dǎo)致誘導(dǎo)性酶活活力降低，從而產(chǎn)生了飼料脂肪含量升高時(shí)MDA和抗氧化能力同時(shí)降低的情況。在脂肪攝入極高的Z5組，MDA顯著高于其他組，可能是由于脂肪過(guò)多的累積并遠(yuǎn)超過(guò)體內(nèi)累積的葉黃素可以控制的范圍，導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化物增加，造成肝臟負(fù)荷過(guò)重，導(dǎo)致肝功能損傷，使其無(wú)法正常分泌抗氧化酶，抗氧化酶活性降低，MDA激增，對(duì)魚(yú)體造成損傷乃至死亡[20]。endprint

4 結(jié)論

本試驗(yàn)通過(guò)研究飼料中不同脂肪水平對(duì)淡黑鑷麗魚(yú)消化、免疫和抗氧化酶活力的影響得出結(jié)論為：淡黑鑷麗魚(yú)的飼料中脂肪水平小于9.56%時(shí)淡黑鑷麗魚(yú)的消化、免疫以及抗氧化能力隨脂肪水平的增加而增強(qiáng)；但飼料中脂肪水平超過(guò)9.56%時(shí)會(huì)對(duì)淡黑鑷麗魚(yú)體內(nèi)的酶產(chǎn)生抑制的影響，嚴(yán)重時(shí)會(huì)對(duì)魚(yú)體造成損傷以致出現(xiàn)死亡情況。

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（收稿日期：2017-09-28）endprint