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(南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院胸心外科， 湖南 衡陽(yáng) 421001)

·臨床醫(yī)學(xué)·

吉西他濱聯(lián)合順鉑新輔助化療對(duì)非小細(xì)胞肺癌TXNIP基因表達(dá)的影響

劉桂軍，胡名松*

(南華大學(xué)附屬第二醫(yī)院胸心外科， 湖南 衡陽(yáng) 421001)

目的研究吉西他濱聯(lián)合順鉑新輔助化療對(duì)非小細(xì)胞肺癌硫還蛋白結(jié)合蛋白氧(TXNIP)基因表達(dá)的影響。方法獲取非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者化療前的腫瘤標(biāo)本及采用吉西他濱聯(lián)合順鉑(GP)方案新輔助化療2個(gè)周期后的腫瘤標(biāo)本，通過實(shí)時(shí)定量PCR法、免疫組化及Western blot分析標(biāo)本中TXNIP表達(dá)的變化。并取一部分正常肺組織做為對(duì)照。結(jié)果正常人肺組織中TXNIP呈一定水平表達(dá)，相比之下，NSCLC患者癌標(biāo)本中TXNIP信使RNA(mRNA)顯著降低。當(dāng)患者經(jīng)2周期GP方案化療后，癌標(biāo)本中TXNIP mRNA表達(dá)水平明顯增高；再次免疫組化及Western blot法檢測(cè)結(jié)果顯示，正常人群肺組織中TXNIP呈一定量的表達(dá)，而NSCLC患者癌標(biāo)本中TXNIP表達(dá)量極低。但經(jīng)GP方案治療后，癌標(biāo)本中TXNIP的含量增高。結(jié)論吉西他濱聯(lián)合順鉑化療能上調(diào)非小細(xì)胞肺癌TXNIP基因和蛋白的表達(dá)。

吉西他濱； 順鉑； 硫氧還蛋白結(jié)合蛋白； 非小細(xì)胞肺癌

肺癌我國(guó)最常見的惡性腫瘤之一，其死亡率和發(fā)病率均占所有惡性腫瘤的第一位，其中約80%患者為非小細(xì)胞肺癌 (non-small cell lung cancer，NSCLC)。目前治療NSCLC以手術(shù)切除方法療效最好，但約80%的患者在就診時(shí)就已為中晚期，錯(cuò)過了手術(shù)機(jī)會(huì)。為了提高ⅢA/ⅢB期患者手術(shù)切除率，近年來提倡新輔助化療(neoadjuvant or primary chemotherapy)[1]。有研究表明吉西他濱聯(lián)合順鉑新輔助化療方案可明顯提高非小細(xì)胞肺癌患者的療效，而且沒有出現(xiàn)與化療相關(guān)的死亡病例，被認(rèn)為是目前應(yīng)用最廣泛、療效最顯著的晚期聯(lián)合化療方案之一[2]。治療以2周期為宜[3]。研究表明，人體多種腫瘤的發(fā)生與TXNIP的低表達(dá)有關(guān)，在胃癌、肝細(xì)胞癌、黑色素瘤等不同的癌細(xì)胞中，TXNIP表達(dá)低于正常人群[4]。TXNIP 基因可通過不同的機(jī)制發(fā)揮作用，最終直接影響腫瘤細(xì)胞的進(jìn)展和愈后[5]。TXNIP 基因在應(yīng)用吉西他濱聯(lián)合順鉑方案新輔助化療的非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)情況如何，尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。本文擬通過觀察非小細(xì)胞肺癌應(yīng)用吉西他濱聯(lián)合順鉑方案新輔助化療2個(gè)周期后TXNIP基因的變化，探討吉西他濱聯(lián)合順鉑方案新輔助化療在非小細(xì)胞肺癌綜合治療過程中的作用。

1 資料與方法

1.1一般資料40例非小細(xì)胞肺癌患者均通過病理學(xué)確診，按照國(guó)際 TNM 分期，其中IIIA期 28例，IIIB期 12 例。其中女性18人，男性22人，年齡43～64歲，中位年齡52歲；其中鱗癌15例，腺癌19例，其他類型非小細(xì)胞肺癌6例；其中不吸煙者19例，吸煙者21例。選擇經(jīng)詢問病史及相關(guān)檢查證實(shí)無其他器官基礎(chǔ)疾病的人體肺組織，作為正常對(duì)照(經(jīng)過醫(yī)院論理協(xié)會(huì)通過批準(zhǔn)，患者及家屬知情同意情況下，取外傷病人，行肺組織切除治療的，保留小部分正常肺組織)。

入選標(biāo)準(zhǔn):①病理學(xué)上符合非小細(xì)胞肺癌；②病理分期為IIIA、IIIB期；③采用GP方案新輔助化療2周；④患者所有資料保持完整(含聯(lián)系方式)。

剔除標(biāo)準(zhǔn)：①患者伴有其他惡性腫瘤；②化療2周期后未實(shí)施肺癌根治術(shù)；③術(shù)前使用其他抗腫瘤治療方法；④曾經(jīng)使用過其他化療方案治療者。

1.2治療方法40例患者均為初治患者，予以吉西他濱聯(lián)合順鉑(GP)化療方案化療：按每平方體表面積確定用藥劑量，即吉西他濱1 000 mg/m2，化療第1天與第8天，靜脈滴注；順鉑 25 mg/m2，化療第1、2、3天，靜脈滴注，21 天為 1 個(gè)周期。所有患者接受 2 個(gè)周期的治療,通過CT評(píng)估其療效。將手術(shù)后切除的肺癌標(biāo)本送檢。

1.3指標(biāo)檢測(cè)方法獲取非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者化療前的腫瘤標(biāo)本及采用吉西他濱聯(lián)合順鉑(GP)方案新輔助化療2個(gè)周期后的腫瘤標(biāo)本，通過實(shí)時(shí)定量PCR法、免疫組化及Western blot分析標(biāo)本中TXNIP表達(dá)的變化。并取一部分正常肺組織做為對(duì)照。

2 結(jié) 果

2.1 GP治療方案對(duì)TXNIP mRNA表達(dá)的影響正常人肺組織中TXNIP mRNA呈一定水平表達(dá)，相比之下，NSCLC患者體內(nèi)TXNIP mRNA顯著降低。當(dāng)患者經(jīng)2周期GP方案治療后，TXNIP mRNA表達(dá)水平明顯增高(圖1)。

圖1 GP治療方案對(duì)NSCLC患者TXNIP mRNA表達(dá)的影響與正常組比較，*：P<0.05;與治療前NSCLC比較，#：P<0.05

2.2 GP治療方案對(duì)組織中TXNIP表達(dá)的影響免疫組化結(jié)果顯示，正常人群肺組織中TXNIP呈一定量的表達(dá)，而NSCLC患者肺組織中TXNIP表達(dá)量極低。而經(jīng)GP治療后，TXNIP的含量有所增高(圖2)。

2.3 GP治療方案對(duì)細(xì)胞TXNIP表達(dá)的影響Western blot顯示，正常組中TXNIP表達(dá)較高，而NSCLC患者中呈低表達(dá)。而GP治療2周期后，與NSCLC組相比，表達(dá)水平有所增高(圖3)。

3 討 論

近幾十年來，肺癌已成為最常見的惡性腫瘤。病理學(xué)上以非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)最多。大部分患者確診時(shí)已喪失手術(shù)治療的機(jī)會(huì)。為了提高ⅢA/ⅢB期患者手術(shù)率，近年來提倡新輔助化療，即對(duì)惡性腫瘤進(jìn)行手術(shù)或放療等局部治療前進(jìn)行的化療，又稱原發(fā)化療、誘導(dǎo)化療或術(shù)前化療。新輔助化療結(jié)合手術(shù)治療非小細(xì)胞肺癌是目前醫(yī)學(xué)界研究的熱點(diǎn)，其作用主要包括以下幾方面：(1)縮小肺癌原發(fā)病灶，增加手術(shù)切除率和提高中晚期的生存率；(2)減少肺癌的分期(T和 N)；(3)清除可能已發(fā)生轉(zhuǎn)移的肺癌；(4)可評(píng)估藥物的敏感性。

圖2 免疫組化檢測(cè)TXNIP蛋白表達(dá)(100×) A：正常組； B：NSCLC；C：GP

圖3 Western blot檢測(cè)NSCLC中TXNIP表達(dá)

TXNIP 基因最初是通過用1，25二羥基維生素D-3(1,25-(OH)2D3) 作用人類白血病(Human leukemia)細(xì)胞系HL-60 中而發(fā)現(xiàn)的[6]，亦稱維生素D3上調(diào)蛋白1(vitamin D3 up-regulating protein 1，VDUP1)，是α-視紫紅質(zhì)抑制蛋白家族中可與硫氧還蛋白( thioredoxin，Trx) 發(fā)生結(jié)合的唯一蛋白。TXNIP作為一種新的抑癌基因，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在肝癌、胃腸癌等惡性腫瘤組織中表達(dá)水平下調(diào)，然而在肺癌中的報(bào)道非常少。TXNIP可與Trx半胱氨酸殘基結(jié)合從而負(fù)調(diào)控其抗氧化功能。此外，TXNIP還具有調(diào)節(jié)代謝平衡和調(diào)節(jié)生長(zhǎng)信號(hào)的作用。

吉西他濱屬于抗代謝類抗癌藥，是目前對(duì)治療NSCLC最有效的化療藥之一，主要作用于細(xì)胞周期S期細(xì)胞的特異性藥物，可使DNA合成減少，且能使抑制細(xì)胞從G1期到達(dá)S期。吉西他濱常在臨床中同其他藥物聯(lián)用尤其是鉑類藥物聯(lián)合治療方法效果均較理想[7-8]。順鉑(DDP)在抗癌藥物中是被應(yīng)用最廣泛之一，屬細(xì)胞周期非特異性抗腫瘤藥，主要作用是和DNA鏈上堿基發(fā)生作用，從而抑制DNA復(fù)制，減少了腫瘤細(xì)胞的分裂。順鉑在抗癌中的作用有較高的抗癌活性，且和其他抗癌藥物發(fā)生無交叉耐藥，故通常采用和其他抗腫瘤藥物聯(lián)合使用[9]。

目前非小細(xì)胞肺癌患者新輔助化療常采用“吉西他濱+順鉑”(GP)方案。大量臨床研究表明,吉西他濱聯(lián)合順鉑的新輔助化療方案可明顯提高非小細(xì)胞肺癌的臨床效果，而且患者對(duì)化療過程中出現(xiàn)的不良反應(yīng)均能耐受，沒有出現(xiàn)化療相關(guān)死亡病例，被認(rèn)為是目前應(yīng)用最廣泛、療效最顯著的晚期聯(lián)合化療方案之一。

為了明確吉西他濱聯(lián)合順鉑治療能否影響TXNIP的表達(dá)，本文通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了觀察。結(jié)果顯示，正常人肺組織中TXNIP mRNA 呈一定水平表達(dá)，相比之下，NSCLC患者體內(nèi)TXNIP mRNA顯著降低。當(dāng)患者經(jīng)2周期GP方案治療后，TXNIP mRNA表達(dá)水平明顯增高。免疫組化和Western blot也證實(shí)NSCLC患者體內(nèi)TXNIP蛋白水平明顯低于正常人群。由此可見，吉西他濱聯(lián)合順鉑治療可上調(diào)NSCLC患者TXNIP的表達(dá)水平。Knoll等[10]研究表明miR-224/452介導(dǎo)的TXNIP低表達(dá)可能是上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化以及腫瘤侵襲的重要機(jī)制。Farrell[11]證實(shí)TXNIP能調(diào)節(jié)HIF介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)錄活性，從而改變VEGF的表達(dá)而發(fā)揮多腫瘤的抑制作用。因此，在吉西他濱聯(lián)合順鉑新輔助化療非小細(xì)胞肺癌中，高表達(dá)的TXNIP可能是一種理想的標(biāo)志物，可能對(duì)預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)移和預(yù)后具有一定的意義。

綜前所述，吉西他濱聯(lián)合順鉑處理肺癌細(xì)胞后，可能通過誘導(dǎo)TXNIP基因mRNA的表達(dá)，從而上調(diào)TXNIP蛋白的表達(dá)水平。隨著TXNIP基因表達(dá)的增強(qiáng)，其對(duì)TrxR的抑制作用加強(qiáng)，從而抑制了硫氧還蛋白清除活性氧的功能，最終抑制腫瘤的生長(zhǎng)。

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Effectoftheneo-adjuvantchemotherapyofthecombinationofgemcitabineandcisplatinontxnipexpressioninnon-smallcelllungcancercells

LIU Guijun,HU Mingsong

(DepartmentofCardiothoracicsurgery,TheSecondAffiliatedHospitalofUniversityofSouthChina,Hengyang421001,Hunan,China)

ObjectiveTo observe the effect of gemcitabine and cisplatin therapy on TXNIP expression in non-small cell lung cancer cells.MethodsThe healthy populations were collected,and non-small cell lung cancer patients were administrated with two course of gemcitabine and cisplatin,then the clinical specimens were collected before and after the treatment.The Thioredoxin-interacting protein (TXNIP) was detected by real time PCR,the protein were measured by immunohistochemistry and western blot.ResultThe mRNA of TXNIP in the healthy populations expressed to a certain level.In contrast,the TXNIP mRNA in NSCLC patients was lower than that in healthy control.After two courses of gemcitabine and cisplatin treatment,the TXNIP mRNA was gradually increased;Immunohistochemistry demonstrated that in the lung of the healthy population,TXNIP was expressed to a certain level,while it decreased in NSCLC patients.Gemcitabine and cisplatin administration could increase its expression level.ConclusionThe combination of gemcitabine and cisplatin can upregulate TXNIP gene and protein expression in non small cell lung cancer patients.

Gemcitabine； Cisplatin； Thioredoxin-interacting protein； non-small cell lung cancer

10.15972/j.cnki.43-1509/r.2017.01.016

2016-07-23；

2016-12-21

湖南省衛(wèi)生廳科研課題支助(編號(hào)：B2014-057).

*通訊作者，E-mail:nanhua2h@126.com.

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蔣湘蓮)