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        肺癌患者膽堿激酶(Chok)及膽堿磷酸胞苷轉(zhuǎn)移酶(PCYT)基因的表達(dá)水平研究

        2017-12-23 05:54:57宋華勇張帆歷永強(qiáng)段永建修雁
        臨床肺科雜志 2017年1期
        關(guān)鍵詞:膽堿激酶磷酸

        宋華勇 張帆 歷永強(qiáng) 段永建 修雁

        ?

        ·論 著·

        肺癌患者膽堿激酶(Chok)及膽堿磷酸胞苷轉(zhuǎn)移酶(PCYT)基因的表達(dá)水平研究

        宋華勇1張帆2歷永強(qiáng)3段永建1修雁4

        目的 探討肺癌患者膽堿激酶及膽堿磷酸胞苷轉(zhuǎn)移酶基因的表達(dá)水平。方法 選取2014年2月至2016年2月就診于我院接受11C-膽堿PET/CT顯像的可疑肺癌患者共68例,術(shù)后選取病變組織作為觀察組,同時(shí)選取每例患者病變組織周圍≥5cm處的正常組織作為自身對(duì)照組,將兩組的組織分別進(jìn)行病理檢查和RT-PCR檢測(cè),分析兩組患者病變組織膽堿激酶及膽堿磷酸胞苷轉(zhuǎn)移酶基因的表達(dá)水平。結(jié)果 經(jīng)RT-PCR檢測(cè),50例放射性高攝取的肺癌組織中Chok(0.75±0.13)和PCYT(0.73±0.21)基因的表達(dá)水平均顯著高于對(duì)照組(0.34±0.11)、(0.35±0.05),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。9例放射性高攝取的肺癌組織和10例良性病變組織中Chok和PCYT基因的表達(dá)水平與對(duì)照組比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 大部分肺癌患者存在膽堿激酶及膽堿磷酸胞苷轉(zhuǎn)移酶基因表達(dá)水平的升高。

        肺癌;膽堿激酶;膽堿磷酸胞苷轉(zhuǎn)移酶;表達(dá)水平

        肺癌早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷對(duì)于延長(zhǎng)患者生存期作用重大[1]。新型PET顯像劑11C-膽堿(choline)反映不同組織細(xì)胞膽堿代謝的差異,對(duì)腫瘤的診斷具有重要作用[2]。膽堿在體內(nèi)的代謝主要在三個(gè)方面:膽堿的磷酸化,也被稱為肯尼迪通路,指的是膽堿轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞,閉塞的角色磷酸化生成磷酸膽堿,膽堿在PCYT催化膽堿磷酸和三磷酸胞嘧啶酸合成的胞二磷膽堿,然后經(jīng)過一系列的反應(yīng),最終生成磷脂酰膽堿,參與細(xì)胞膜的合成[3-6]。在這個(gè)過程中,主要的閉塞和PCYT兩個(gè)速率限制酶決定的反應(yīng)程度;膽堿氧化,生成的氧化主要為三甲胺乙內(nèi)酯;膽堿乙?;饔?主要在膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶產(chǎn)生乙酰膽堿,是神經(jīng)遞質(zhì)重要作用[7,8]。

        本研究以68例肺癌患者作為研究對(duì)象,分析11C-膽堿正電子發(fā)射斷層顯像/X線計(jì)算機(jī)體層掃描顯像在肺癌診斷與分期中的應(yīng)用價(jià)值,并分析肺癌患者膽堿激酶(Choline kinase,Chok)及磷酸膽堿胞苷轉(zhuǎn)移酶基因的表達(dá)水平。現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)告如下。

        資料與方法

        一、研究對(duì)象

        選取2014年2月至2016年2月就診于我院接受11C-膽堿PET/CT顯像的可疑肺癌患者共68例,男51例,女17例,年齡38-72歲,平均(53.62±9.76)歲。同時(shí)選取每例患者病變部位周圍大于5cm處正常組織作為自身對(duì)照進(jìn)行膽堿代謝的分子生物學(xué)檢查。所有患者與對(duì)照組的年齡、性別和教育程度等差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

        二、研究方法

        1 儀器與試劑:PET/CT機(jī)(產(chǎn)地:匈牙利Mediso);11C-膽堿由本院PET中心生產(chǎn),放化純度>95%;PCR儀(美國賽默飛世爾Piko系列);VDS紫外凝膠攝像儀購自美國Phamacia公司;Trizol試劑購自美國Invitrogen公司;Oligo(d T)引物、逆轉(zhuǎn)錄酶均購自Fermentas公司;基因特異性引物、Beta-actin引物均由上海生工生物公司合成;TaqDNA聚合酶購自Fermentas生物公司。

        2 顯像方法:①患者在進(jìn)行檢查前禁食2h,休息10min后按7.4MBq/kg靜脈注射11C-膽堿,間隔5min后行4排螺旋CT掃描,PET于CT衰減校正后行2D采集;②運(yùn)用有序子集最大期望值疊代法重建圖像,進(jìn)行濾波反投影衰減校正[3]。

        3 圖像分析:所得圖像由2位經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師共同探討分析。根據(jù)CT情況,病灶部位對(duì)11C-膽堿攝取明顯高于周圍肺本底者即診斷為惡性。

        4 RT-PCR檢測(cè):采用RT-PCR檢測(cè)病變及對(duì)照組織中Chok和PCYT基因的表達(dá)。目的基因的相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度通過目的基因和β-actin吸收光度值的比值來表示[4]。

        三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件,對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,采用兩配對(duì)樣本間的Wilcoxon檢驗(yàn),,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        結(jié) 果

        一、兩組Chok 及 PCYT 基因的表達(dá)水平比較

        1 觀察組中放射性高攝取肺癌組織與對(duì)照組Chok 及 PCYT 基因的表達(dá)水平比較:經(jīng)RT-PCR檢測(cè),50 例放射性高攝取的肺癌組織中 Chok (0.75±0.13)和PCYT (0.73±0.21)基因的表達(dá)水平均顯著高于對(duì)照組(0.34±0.11)、(0.35±0.05),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.05。(見表1)。

        表1 放射性高攝取肺癌組織Chok 及PCYT 基因的表達(dá)水與對(duì)照組平比較

        組別nChok基因PCYT基因?qū)φ战M500.34±0.110.35±0.05觀察組500.75±0.130.73±0.21Z-6.546-8.431P<0.05<0.05

        2 觀察組中未見放射性高攝取肺癌組織Chok 及 PCYT 基因的表達(dá)水平與對(duì)照組比較:經(jīng)RT-PCR檢測(cè),9例放射性高攝取的肺癌組織中 Chok 和PCYT基因的表達(dá)水平與對(duì)照組比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P>0.05。(見表2)。

        表2 未見放射性高攝取肺癌組織與對(duì)照組Chok及PCYT 基因的表達(dá)水平比較

        組別nChok基因PCYT基因?qū)φ战M90.41±0.120.39±0.10觀察組90.42±0.080.44±0.11Z-0.66-1.02P0.5140.412

        二、觀察組中良性病變組織Chok 及 PCYT 基因的表達(dá)水平與對(duì)照組比較

        經(jīng)RT-PCR檢測(cè),10例良性病變組織中 Chok 和PCYT基因的表達(dá)水平與對(duì)照組比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P>0.05。(見表3)。

        表3 良性病變組織Chok 及 PCYT 基因的表達(dá)水平與對(duì)照組比較

        討 論

        有研究認(rèn)為,膽堿代謝的主要途徑在腫瘤細(xì)胞的磷酸化膽堿[9]。由于惡性腫瘤細(xì)胞的增殖,大量的需要轉(zhuǎn)化為膽堿是卵磷脂的合成細(xì)胞膜[10]。功能性核磁共振的研究還表明,膽堿和腫瘤細(xì)胞磷脂酰膽堿的含量明顯高于正常組織[11]。這可能與關(guān)鍵酶表達(dá)的增加膽堿磷酸化的過程。一旦進(jìn)入細(xì)胞發(fā)生磷酸化膽堿,它是被困在細(xì)胞,被稱為“化學(xué)保留”,它提供了一種依據(jù)腫瘤膽堿成像[12]。因?yàn)榭梢詫⒛[瘤組織高攝入膽堿和正常組織吸收較低,所以我們可以用寵物來測(cè)量體內(nèi)的膽堿攝入量達(dá)到識(shí)別目的腫瘤,良性病變[13]。除了在癌癥中,在風(fēng)濕免疫性疾病,如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,骨關(guān)節(jié)炎等疾病中,膽堿激酶的表達(dá)水平也明顯上調(diào),膽堿激酶作為合成磷脂酰膽堿至關(guān)重要的酶,參與細(xì)胞合成,以及人體正常生理機(jī)能的維持,具有重要的生物學(xué)意義。如膽堿激酶大量合成,可能代表著機(jī)體的合成代謝機(jī)能亢進(jìn),在腫瘤,自身免疫性疾病等系統(tǒng)疾病中經(jīng)??吹絒11-13]。

        研究結(jié)果表明,閉塞在高放射性攝取的50例肺癌組織(0.75±0.13)和PCYT(0.73±0.21)基因表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組(0.34±0.11),(0.35±0.35),和9例肺癌組織中的高放射性攝取閉塞和PCYT基因的水平,與對(duì)照組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。這表明11C-膽堿PET成像的基礎(chǔ)上建立的增加在肺癌細(xì)胞磷脂酰膽堿,膽堿,膽堿和磷脂酰膽堿水平的增加相關(guān)的高表達(dá)PCYT[14]。結(jié)果還顯示,不僅增強(qiáng)膽堿磷酸化,但也在肺癌細(xì)胞的乙酰化膽堿,這些可能性仍然需要大量的研究來證明。這項(xiàng)研究的結(jié)果還表明,閉塞和PCYT基因的表達(dá)水平在10例良性病變與對(duì)照組沒有顯著差異(P>0.05)。這表明在良性病變,磷酸化膽堿在大多數(shù)情況下的正常水平,但在少數(shù)情況下,如肺結(jié)核、可能有膽堿磷酸化水平的增加,假陽性的問題[15]。這可能是因?yàn)楸M管良性病變不存在腫瘤細(xì)胞的過度增殖,但一些肉芽腫和炎性病變?cè)诙唐趦?nèi)可能會(huì)有大量的巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞增殖,這些炎癥細(xì)胞還需要攝入大量的膽堿磷酸化,作為細(xì)胞膜的合成材料[12]。

        這項(xiàng)研究顯示,大多數(shù)肺癌的膽堿激酶和磷酸膽堿轉(zhuǎn)移酶表達(dá)水平增加,導(dǎo)致膽堿吸收程度的增加,成為膽堿PET成像的基礎(chǔ)。寵物積極肺癌病例為什么有些患者膽堿激酶和磷酸膽堿胞嘧啶核苷轉(zhuǎn)移酶表達(dá)正常水平,為什么一些良性的疾病有兩個(gè)關(guān)鍵酶表達(dá)水平增加,大量的情況仍然需要進(jìn)一步的研究來揭示。

        [1] 解敬慧.18F-FDG PET/CT對(duì)肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及局部侵襲性的預(yù)測(cè)與診斷價(jià)值[D].大連醫(yī)科大學(xué),2014.

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        [5] 李猛,彭忠民,劉慶偉,等.肺癌11C-膽堿PET顯像機(jī)制與膽堿代謝的研究[J].山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2011,49(9):127-131.

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        Expression of choline kinase (Chok) and choline phosphate cytidylyltransferase (PCYT) in lung cancer patients

        SONGHua-yong,ZHANGFan,LIYong-qiang,DUANYong-jian,XIUYan

        TumorDepartment,theFirstAffiliatedHospitalofHe’nanUniversity,Kaifeng,He’nan475000,China

        Objective To investigate the expression of choline kinase (Chok) and choline phosphate cytidylyltransferase (PCYT) in lung cancer patients. Methods from February 2014 to February 2016 in our hospital received 68 cases of11C- choline PET/CT imaging of suspected lung cancer patient, and their postoperative lesions were selected as the observation group. At the same time, their healthy tissues more than 5 cm around the lesions were taken as the control group. They were examined by pathological examination and RT-PCR detection, and the expression level of Chok and PCYT was detected. Results Through RT-PCR detection, the levels of Chok and PYCT in lung cancer tissues was (0.75±0.13) and (0.73±0.21), which were significantly higher than those of the control group [(0.34±0.11), (0.35±0.05)] (P<0.05). There was no significant difference in the expression of Chok and PCYT gene among 9 high radioactive uptaking lung cancer tissues and 10 cases of benign tissues and the control (P>0.05). Conclusion The high expression of Chok and PCYT exists in most patients with lung cancer.

        lung cancer; choline kinase; choline phosphate cytidylyltransferase; expression

        10.3969/j.issn.1009-6663.2017.01.001

        國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No 81472745)

        1. 475000 河南 開封,河南大學(xué)第一附屬醫(yī)院 腫瘤科 2. 475000 河南 開封,河南大學(xué)第一附屬醫(yī)院 影像中心 3. 475000 河南 開封,河南大學(xué)生化教研室 4. 200032 上海,復(fù)旦大學(xué)中山醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科

        張帆,E-mail:janet897@163.com

        2016-05-24]

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