李田田，孫偉偉，趙瑞華*

(1.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院，北京 100053； 2.北京市回民醫(yī)院，北京 100054)

子宮內(nèi)膜異位癥盆腔粘連大鼠模型的建立與評(píng)價(jià)

李田田1,2，孫偉偉1，趙瑞華1*

(1.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院，北京 100053； 2.北京市回民醫(yī)院，北京 100054)

研究報(bào)告

目的探索子宮內(nèi)膜異位癥盆腔粘連大鼠模型的建立方法及評(píng)價(jià)指標(biāo)。方法采用自體移植法將子宮內(nèi)膜移植于大鼠腸系膜間，術(shù)后1、3、5、7、14、21、28 d分別隨機(jī)抽取8只大鼠開腹觀察病灶生長(zhǎng)情況，采用美國(guó)生殖學(xué)會(huì)粘連分級(jí)(AFS)分級(jí)、Haber粘連評(píng)分兩種方法同時(shí)對(duì)盆腔粘連程度進(jìn)行評(píng)分；同時(shí)采取各組病灶及周圍粘連腹膜組織行HE染色；術(shù)后5、7、14、21、28 d組分別采取病灶周圍粘連組織，對(duì)其組織型纖溶酶原激活劑(tPA)含量進(jìn)行動(dòng)態(tài)檢測(cè)。結(jié)果兩種粘連評(píng)分方法均顯示造模后5 d已形成典型的盆腔粘連；與空白對(duì)照組及假手術(shù)相比，造模5 d后各模型組大鼠盆腔粘連腹膜組織中tPA含量極度降低(P< 0.01)，造模28 d后tPA含量有上升趨勢(shì)，但仍顯著低于空白對(duì)照組及假手術(shù)組(P< 0.01)。結(jié)論采用自體移植法將子宮內(nèi)膜移植于腸系膜間建立EMs盆腔粘連模型，造模術(shù)后5 d即為成熟模型，tPA與EMs盆腔粘連的發(fā)生具有相關(guān)性。

子宮內(nèi)膜異位癥；盆腔粘連；大鼠；組織型纖溶酶原激活劑

子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis，EMs)是指子宮內(nèi)膜組織生長(zhǎng)于子宮腔以外的部位，主要發(fā)生在育齡期婦女，近年來(lái)發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。盆腔粘連是內(nèi)異癥的重要特征,有研究表明，80%以上的患者在初次手術(shù)時(shí)即發(fā)現(xiàn)有盆腔粘連[1],且術(shù)后再粘連發(fā)生率高。EMs相關(guān)痛經(jīng)、不孕、慢性盆腔痛及其復(fù)發(fā)等均與盆腔粘連有關(guān)。另外，盆腔粘連越嚴(yán)重，術(shù)程越長(zhǎng)、術(shù)中出血也愈多[2]。因此，許多學(xué)者將內(nèi)異癥相關(guān)盆腔粘連治療提上議程[3]。受倫理限制，EMs盆腔粘連動(dòng)物模型的建立是闡明機(jī)制、觀察療效的重要研究方法，但目前并無(wú)公認(rèn)的EMs盆腔粘連動(dòng)物模型，其建立與評(píng)價(jià)方法仍有待研究。研究表明，上調(diào)內(nèi)異癥患者腹膜纖溶系統(tǒng)中組織型纖溶酶原激活劑(tissue-type plasminogen activator, tPA)表達(dá)可減輕腹膜粘連的程度[1],這提示tPA與EMs盆腔粘連有極大關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)從EMs盆腔粘連產(chǎn)生發(fā)展過(guò)程出發(fā)，確定模型成立時(shí)間，并對(duì)造模后不同時(shí)間點(diǎn)大鼠盆腔粘連組織中tPA含量經(jīng)行測(cè)定，初步探討其與EMs盆腔粘連發(fā)生的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)性成熟未孕雌性SD大鼠116只，8周齡，體重220±20 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供[SCXK(京)2006-0009]。飼養(yǎng)于中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室[SYXK(京)2012-0001]，燈光(12 L：12 D)，室溫 22℃。飼養(yǎng)動(dòng)物所需的籠具及飲水瓶均由專業(yè)飼養(yǎng)人員高壓滅菌后提供。

1.2 主要試劑與儀器

常規(guī)手術(shù)器械包2套，超凈工作臺(tái)等。

水合氯醛(批號(hào)：20140304，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，中國(guó))；苯甲酸雌二醇(批號(hào)：B131204，規(guī)格4 mg: 2 mL，寧波市三生藥業(yè)有限公司，中國(guó))；青霉素鈉(國(guó)藥準(zhǔn)字：H13020657，規(guī)格：80萬(wàn)單位/支，華北制藥股份有限公司，中國(guó))。

大鼠酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(Elisa)試劑盒,由武漢華美生物工程有限公司提供；倒置顯微鏡：IX～70，日本Olympus公司產(chǎn)品；離心機(jī)：CT15 RE型，日本Hitachi公司產(chǎn)品；酶標(biāo)儀：Stat Fax 2100, Awareness公司產(chǎn)品。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 藥物配制方法

10%水合氯醛：用100 mL無(wú)菌蒸餾水溶化10 g水合氯醛晶體；苯甲酸雌二醇：2 mL苯甲酸雌二醇與植物油18 mL混合均勻，配成1:10的苯甲酸雌二醇溶液。

1.3.2 造模方法

術(shù)前準(zhǔn)備：術(shù)前2 d肌注4 mg/2 mL的苯甲酸雌二醇0.1 mg/(kg·d)，使其處于同一動(dòng)情周期，造模前禁食12 h。

分組：造模前將72只雌性SD大鼠按照體重隨機(jī)分為空白組8只(B組)、假手術(shù)組8只(S組)、模型組(56只)。

模型制作：參考Haber造模方法[4]，模型組大鼠禁食12 h后，采用自體移植法在無(wú)菌條件下進(jìn)行造模。大鼠稱重，10%水合氯醛(0.38 mL/100 g)腹腔麻醉，置于超凈臺(tái)，腹部備皮，在尿道口上約1 cm處靠左側(cè)做平行于正中線長(zhǎng)約1.5 cm的縱切口進(jìn)腹，進(jìn)腹后在膀胱背側(cè)找到子宮，游離左側(cè)子宮，近端離左子宮角 1 cm 處結(jié)扎，遠(yuǎn)端離卵巢 2 cm 處結(jié)扎，并結(jié)扎兩端間的子宮系膜血管，切除約 1.0 cm 長(zhǎng)子宮段，立即放入盛有無(wú)菌生理鹽水的培養(yǎng)皿中，用眼科剪沿系膜部剪開管狀子宮，切割成3 mm × 3 mm大小的碎片，共4片，注意區(qū)分肌層與內(nèi)膜面，內(nèi)膜面朝向腸系膜，用5-0線縫合于右側(cè)腸系膜血管豐富處，檢查腹腔無(wú)出血后，腹腔留置青霉素鈉0.25 mL，5-0線縫合腹壁，2-0線縫合皮膚進(jìn)行逐層關(guān)腹。分籠喂養(yǎng)，待其自然蘇醒。術(shù)后連續(xù)3 d肌注青霉素鈉0.25 mL，每天1次，以預(yù)防術(shù)后感染，術(shù)后第二天開始肌注苯甲酸雌二醇0.1 mg/kg·d，以促進(jìn)異位灶的生長(zhǎng)。

假手術(shù)組制作：術(shù)前準(zhǔn)備、麻醉、子宮的切除方法同模型組，緊貼腸系膜縫4針5/0尼龍線。

1.3.3 觀察指標(biāo)及測(cè)定方法

模型組分別于造模術(shù)后第1天(M1組)、3天(M2組)、5天(M3組)、7天(M4組)、14天(M5組)、21天(M6組)、28天(M7組)隨機(jī)抽取8只大鼠，其中第28天同時(shí)將假手術(shù)組開腹，開腹后觀察盆腔粘連情況及異位灶生長(zhǎng)情況。

1.3.4 盆腔粘連評(píng)分

每只大鼠均采用兩種粘連評(píng)分方法：①美國(guó)生殖醫(yī)學(xué)會(huì)粘連分級(jí)(AFS)分級(jí)方法[5]：粘連范圍：0分：無(wú)，1分：≤25%，2分：≤50%，3分：≤75%，4分：≤100%；粘連類型：0分：無(wú)，1分：膜狀、透明、無(wú)血管，2分：不透明或半透明，無(wú)血管，3分：不透明，有毛細(xì)血管，4分：不透明，有更大的血管；粘連韌性：0分：無(wú)，1分：自動(dòng)分離，2分：需要牽拉才能分離，3分：需要銳性分離；分別從粘連范圍、粘連類型及粘連強(qiáng)度三個(gè)方面進(jìn)行評(píng)價(jià)，總粘連評(píng)分為三者總和。②Haber粘連評(píng)分方法[4]：0分：無(wú)粘連，無(wú)粘連帶；1～2分：輕微粘連，有少許粘連帶，幾乎難以辨認(rèn)；3～4分：輕中度粘連，移植物周圍可見(jiàn)一些粘連帶，不需要分解；5分：中度粘連，移植物周圍有一些粘連帶，相對(duì)容易分解；6～7分：中重度粘連，粘連帶較多，大部分圍繞移植物，在腸管間也可見(jiàn)粘連帶，難以分解；8～9分：重度粘連，腸管間有很多粘連帶，粘連分解困難；10分：嚴(yán)重粘連，大量的粘連帶使腸管、腸系膜、腹膜嚴(yán)重粘連，在不損傷臟器的情況下無(wú)法分解粘連。以上兩種粘連評(píng)分方法均有相同的兩位實(shí)驗(yàn)人員獨(dú)立進(jìn)行，每種評(píng)分方法均取兩位實(shí)驗(yàn)人員所評(píng)分?jǐn)?shù)的平均值作為最終粘連評(píng)分。

1.3.5 粘連組織tPA活性檢測(cè)

造模術(shù)后第5天、第7天、14天、第21天、第28天組均采取粘連處腹膜組織，假手術(shù)組及空白組采取正常腹膜組織，進(jìn)行組織勻漿、離心、蛋白定量, ELISA方法檢測(cè)tPA含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 肉眼觀察

造模術(shù)后第1天：異位灶腫脹，緊貼腸系膜，未見(jiàn)有透亮異位囊泡生成，異位灶周圍腸管相互接觸，稍松動(dòng)即可分離，松動(dòng)過(guò)程中可見(jiàn)有極薄的透明彈性組織斷裂，分離過(guò)程中無(wú)出血。(圖1-A)

造模術(shù)后第3天：可見(jiàn)直徑3 mm左右大小的異位灶，內(nèi)含透亮液體，異位灶周圍及腸管間有輕度粘連，稍提拉即可分離，分離過(guò)程中可見(jiàn)有較薄的透明組織斷裂，分離過(guò)程中無(wú)出血。(圖1-B)

造模術(shù)后第5天：囊泡直徑增大至4～8 mm左右，內(nèi)含清亮液體，表面覆蓋有新生血管；盆腔廣泛粘連，多見(jiàn)于異位灶附近腸管與腸管、腸管與腸系膜、異位灶與側(cè)盆壁或遠(yuǎn)部臟器粘連，粘連部位脂肪組織輕度增生，呈半透明活不透明狀，粘連韌性增強(qiáng)，有小的新生血管生成，易鈍性分離，分離后可見(jiàn)有少量出血，可壓迫止血。(圖1-C)

造模術(shù)后第7天：病灶處可見(jiàn)移植物體積增大至5～10 mm左右，呈透明囊泡狀，內(nèi)含清亮液體，表面覆蓋有新生血管及脂肪組織；盆腔廣泛粘連，粘連部位脂肪組織增生增厚，不透明，有小的新生血管生成，鈍性分離后，分離面廣泛滲血，壓迫止血時(shí)間長(zhǎng)，易傷及正常組織。(圖1-D)

造模術(shù)后第14天：移植物體積增大，呈透明囊泡狀，內(nèi)有液體積聚，表面覆蓋有豐富的新生血管及脂肪組織；盆腔粘連致密，脂肪組織進(jìn)一步增生增厚，鈍性分離易撕破腸管，造成大鼠死亡。(圖1-E)

造模術(shù)后第21天、28天：移植物體積縮小，呈半透明囊泡狀，內(nèi)有稍渾濁液體積聚，常包埋在粘連組織內(nèi)；盆腔廣泛粘連，更加致密，粘連部位新生血管豐富，需小心銳性分離，分離面出血量多，壓迫止血困難，常傷及周圍正常組織，造成大鼠死亡。(圖1-F、G)

假手術(shù)后28天：縫合線周圍基本無(wú)粘連，脂肪組織稍增厚，正常解剖結(jié)構(gòu)未破壞，無(wú)需分離。

2.2 美國(guó)生殖醫(yī)學(xué)會(huì)粘連分級(jí)(AFS)評(píng)分

結(jié)果顯示，造模術(shù)后1～5 d內(nèi)各組大鼠盆腔粘連范圍、粘連類型、粘連韌性評(píng)分均不斷提高，各組間評(píng)分比較，差異有顯著性(P< 0.05)；造模術(shù)后5～7 d粘連范圍基本固定，約75%的病灶周圍均形成粘連，新生毛細(xì)血管已形成，粘連類型基本固定，粘連韌性增強(qiáng)變慢，造模術(shù)后第5天與第7天組在粘連范圍、粘連類型及粘連韌評(píng)分方面差異無(wú)顯著性(P> 0.05)。造模術(shù)后第14天、21天、28天組在粘連范圍、粘連類型及粘連韌性評(píng)分方面差異無(wú)顯著性(P> 0.05)。(見(jiàn)表1)

注：A：M1組；B：M2組；C：M3組；D：M4組；E：M5組；F：M6組；G：M7組；H：S組；I：B組。圖1 造模術(shù)后不同時(shí)間大鼠盆腔粘連情況比較Note.A: M1 group. B: M2 group. C: M3 group. D: M4 group. E: M5 group. F: M6 group. G: M7 group. H: S group. I: B group.Fig.1 Pelvic adhesions of the model rats at different stages表1 造模術(shù)后不同時(shí)期EMs大鼠盆腔粘連AFS評(píng)分比較Tab.1 Comparison of AFS scores of pelvic adhesions in the EM rats at different stages

分組Groups粘連范圍Adhesionrange粘連類型Adhesiontype粘連韌性AdhesiontoughnessM1組M1group0(0～1)0(0～1)0(0～1) 013±035? 012±035?# 012±035?#M2組M2group1(0～1)1(0～1)1(0～1) 075±046? 075±046?# 075±046?#M3組M3group35(1～4) 15(1～3) 2(1～2)312±112175±088 187±035M4組M4group4(2～4)3(2～3)2(2～3)350±075275±046212±035M5組M5group3(1～4)3(3～4)2(2～3)300±107 325±046? 237±052?M6組M6group3(1～4)3(2～4)25(2～3) 300±107 300±053? 250±053?M7組M7group3(2～4)3(3～4)3(2～3)312±083 338±052?# 262±052?#

注：A(B～C)：A表示AFS評(píng)分中最小值B與最大值C之間的中位數(shù)；與造模術(shù)后第5天相比，*P<0.05；與造模術(shù)后第7天相比，#P< 0.05。

Note.A represents the median of the minimum B and the maximum C in AFS scores. Compared with the group of five days after modeling,*P< 0.05. Compared with the group of one week after modeling，#P< 0.05.

2.3 Haber粘連評(píng)分

結(jié)果顯示，造模術(shù)后第1～5天內(nèi)粘連發(fā)生率不斷增長(zhǎng)，造模術(shù)后第5天粘連發(fā)生率即可達(dá)到峰值100%，粘連評(píng)分為6.15±1.28，已達(dá)到中重度粘連，頓性分離相對(duì)困難，且造模術(shù)后5 d粘連組織中新生毛細(xì)血管生成，其后將形成不可逆粘連。(見(jiàn)表2、圖2)

表2 造模術(shù)后不同時(shí)期EMs大鼠盆腔粘連Haber評(píng)分比較Tab.2 Comparison of Haber scores of pelvic adhesions in the EM rats at different stages

注：與造模術(shù)后第5天相比，*P< 0.05；與造模術(shù)后第7天相比，#P< 0.05。

Note.Compared with the group of five days after modeling，*P< 0.05. Compared with the group of one week after modeling，#P< 0.05.

注：與造模術(shù)后第5天相比，* P< 0.05；與造模術(shù)后第7天相比，#P< 0.05。圖2 造模術(shù)后不同時(shí)期EMs大鼠盆腔粘連Haber評(píng)分比較Note.Compared with the group of five days after modeling，* P< 0.05. Compared with the group of one week after modeling，#P< 0.05.Fig.2 Comparison of Haber scores of pelvic adhesions in the EMs rats at different stages

2.4 造模術(shù)后不同時(shí)期病灶周圍組織HE染色

結(jié)果顯示，造模術(shù)后第1天：纖維脂肪組織表層多量纖維素附著，形成紅染的粘附帶，較多炎細(xì)胞和吞噬細(xì)胞浸潤(rùn)，血管擴(kuò)張充血不明顯，線頭和內(nèi)膜周圍多量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，伴有纖維組織增生(圖3-A)。

造模術(shù)后第3天：纖維脂肪組織表層可見(jiàn)纖維蛋白滲出，部分表面襯覆紅染粘附帶，呈纖維修復(fù)性改變，表面可見(jiàn)間皮細(xì)胞增生，細(xì)胞呈立方或低柱狀，伴有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)(圖3-B)。

造模術(shù)后第5天：纖維脂肪組織內(nèi)多量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，可見(jiàn)大量新生小血管，大量炎性肉芽生長(zhǎng)，伴有血栓形成(圖3-C)。

造模術(shù)后7～28 d：纖維增生，漿膜面纖維組織增生主要以膠原纖維及平滑肌樣細(xì)胞為主，粘連逐漸致密?？梢?jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，新生血管逐漸增多形成血管網(wǎng)(圖3-D)。

假手術(shù)后28 d：未見(jiàn)明顯纖維組織增生，偶可見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，未見(jiàn)明顯血管增生(圖3-E)。

正常對(duì)照：無(wú)纖維組織增生，未見(jiàn)明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，無(wú)增生血管(圖3-F)。

2.5 tPA含量檢測(cè)

與正常組或假手術(shù)比較，各個(gè)時(shí)期模型組tPA含量均大幅度降低，差異有顯著性(P< 0.01)。造模術(shù)后5 d tPA含量低水平表達(dá)維持到造模術(shù)后21 d，各組間差異無(wú)顯著性(P> 0.05)，造模術(shù)后28 d tPA含量有回升趨勢(shì)，與模組型比較，差異有顯著性(P< 0.01)，但仍顯著低于空白對(duì)照組及假手術(shù)組，差異有顯著性(P< 0.01)。(見(jiàn)表3、圖4)。

表3 造模術(shù)后各組大鼠盆腔tPA含量比較Tab.3 Comparison of the relative expression of tPA in EMs rat peritoneum at different stages

注：與假手術(shù)、空白組相比，*P< 0.01；不同時(shí)期模型組與造模術(shù)后28 d組相比較，#P< 0.01。

Note.Compared with the sham operation group and blank group,*P< 0.01. Models of different periods compared with the group at 28 days after modeling,#P< 0.01.

3 討論

3.1 動(dòng)物的選擇

相關(guān)研究指出，靈長(zhǎng)類動(dòng)物月經(jīng)周期與人類接近，是建立EMs模型的最佳動(dòng)物，但因動(dòng)物稀有、價(jià)格昂貴，且自發(fā)性EMs的比例低(4.8%)[6]，這很大程度上限制了其在實(shí)際科研中的應(yīng)用。裸鼠是一種免疫缺陷型小鼠，是建立內(nèi)異癥模型的理想動(dòng)物，但因免疫缺陷，它在體現(xiàn)自身免疫學(xué)改變方面存在不足[7]。小鼠體積較小，臟器柔弱，開腹及分離粘操作困難，且更易傷及臟器造成死亡。大鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，具有性成熟早、動(dòng)情周期短、個(gè)體較大、生命力強(qiáng)、實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好、價(jià)格適宜等優(yōu)點(diǎn)，是復(fù)制EMs盆腔粘連模型的最佳選擇。

3.2 盆腔粘連的時(shí)間選擇

在異位灶的刺激下，兩塊接觸的腹膜被覆纖維蛋白膠原而形成粘連條帶，隨著時(shí)間的推移，粘連范圍逐漸擴(kuò)大，粘連組織逐漸增厚，韌性不斷增強(qiáng)，直至在不損傷正常臟器的情況下無(wú)法分離。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，造模術(shù)后粘連程度不斷增強(qiáng)，術(shù)后5～7 d后粘連范圍基本固定，14～28 d粘連類型及致密程度處于平穩(wěn)期，這與Uguralp相關(guān)研究中“粘連形成于術(shù)后5～7 d”相吻合[8]。

3.3 盆腔粘連的評(píng)價(jià)

EMs盆腔粘連的發(fā)病機(jī)制尚不明確。郎景和團(tuán)隊(duì)在EM發(fā)病機(jī)制中提出“在位內(nèi)膜決定論”，認(rèn)為EM相關(guān)盆腔粘連是腹膜對(duì)逆流入腹腔經(jīng)血刺激的一種保護(hù)性機(jī)制的過(guò)度反應(yīng)[9]。異物、組織缺氧、感染、機(jī)械損傷等均可導(dǎo)致腹膜的損害，引起一系列多系統(tǒng)、多細(xì)胞及多因子參與復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)反應(yīng)，其中，纖維蛋白的沉淀和降解是腹膜粘連中重要的因素[10]。纖溶系統(tǒng)的作用是降解損傷腹膜修復(fù)過(guò)程中所形成的纖維，其中血管內(nèi)皮細(xì)胞、腹膜間皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等產(chǎn)生的tPA將纖溶酶原轉(zhuǎn)變成纖溶酶，后者主要的功能就是降解纖維素。漿膜腔tPA主要來(lái)源于腹膜間皮細(xì)胞，其纖溶活性決定了漿膜腔局部纖維蛋白的沉積和清除[8]。若tPA含量降低，纖溶活性受到抑制，纖維膠原組織無(wú)法降解，最終形成粘連[11]，因此tPA在粘連形成過(guò)程中起重要的抑制作用。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，造模5 d后，不同時(shí)間點(diǎn)模型大鼠粘連組織中tPA含量均顯著降低，造模術(shù)后5～21 d粘連組織中tPA活性持續(xù)喪失，纖維蛋白酶缺少，沉積的纖維蛋白不能及時(shí)溶解而機(jī)化，最終成為永久性纖維粘連。

注：A：M1組；B：M2組；C：M3組；D：M4-M7組；E：S組；F：B組。圖3 造模術(shù)后不同時(shí)期EMs大鼠病灶周圍組織比較(HE×200)Note.A: M1 group. B: M2 group. C: M3 group. D: M4-M7 group. E: S group. F: B group.Fig.3 Peritoneal adhesions of the model rats at different stages. HE staining

本實(shí)驗(yàn)采用自體移植法將子宮內(nèi)膜移植于腸系膜間建立EMs盆腔粘連模型，從盆腔粘連評(píng)分及含量檢測(cè)等方面進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)本實(shí)驗(yàn)造模成功率高達(dá)100%，造模后5～21 d纖溶活性一直處在抑制狀態(tài)；造模術(shù)后5 d模型作為成熟模型，造模術(shù)后5～7 d是預(yù)防粘連的關(guān)鍵時(shí)期；提高tPA表達(dá)水平可作為防治EMs盆腔粘連的方法之一。

注：與假手術(shù)、空白組相比，* P< 0.01；不同時(shí)期模型組與造模術(shù)后28 d組相比較，#P< 0.01。圖4 造模術(shù)后各組大鼠盆腔tPA含量比較Note.Compared with the sham operation group and blank group,* P< 0.01. Model groups of different periods compared with the group at four weeks after modeling,#P< 0.01.Fig.4 Comparison of the relative expression of tPA in EM rat peritoneum at different stages

[1] 李孟慧, 冷金花, 李成龍, 等. GnRH-α對(duì)EMs腹膜纖溶相關(guān)因子tPA/PAI表達(dá)影響的研究[J]. 現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展, 2012, 21:20-23.

[2] 陳萍. 子宮內(nèi)膜異位周圍組織粘連程度與患者的臨床特點(diǎn)、手術(shù)情況及術(shù)后復(fù)發(fā)的相關(guān)性分析 [J]. 中國(guó)婦幼保健，2014，29(5): 253-254.

[3] 劉媛媛，趙任峰. EMs盆腔粘連和疼痛的相關(guān)性研究 [J]. 廣西醫(yī)學(xué)，2013，35(5): 588-590.

[4] Haber E, Danenberg HD, Koroukhov N, et al. Peritoneal macrophage depletion by liposomal bisphosphonate attenuates endometriosis in the rat model [J]. Hum Reprod，2009，24(2): 398-407.

[5] The Surgical Membrane Study Group. Prophylaxis of pelvic sidewall adhesions with Gore-Tex surgical membrane: a multicenter clinical investigation [J]. Fertil Steril, 1992, 57(4): 921-923.

[6] Dehoux JP，Defrere S，Squifflet J. Is the baboon model appropriate for endometriosis studies? [J]. Fertil Steril, 2011, 96(3): 728-733.

[7] 馮雪，黃薇.子宮內(nèi)膜異位癥動(dòng)物模型研究進(jìn)展 [J]. 中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志，2014, 24(12): 67-70.

[8] Uguralp S, Akin M, Karabulut AB, et al. Reduction of peritoneal adhesions by sustained and local administration of epidermal growth factor [J]. Pediatr Surg Int, 2008, 24(2): 191-197.

[9] 李孟慧. 腹膜間皮細(xì)胞及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子在EMs粘連中作用研究 [D]. 北京，北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，2012.

[10] Esposito AJ, Heydrick SJ, Cassidy MR, et al. Substance P is an early mediator of peritoneal fibrinolytic pathway genes and promotes intra-abdominal adhesion formation [J]. J Surg Res, 2013, 181(1): 25-31.

[11] Shimomura M, Hinoi T, Ikeda S, et al. Preservation of peritoneal fibrinolysis owing to decreased transcription of plasminogen activator inhibitor-1 in peritoneal mesothelial cells suppresses postoperative adhesion formation in laparoscopic surgery [J]. Surgery, 2013, 153(3): 344-356.

Establishmentandevaluationofaratmodelofendometriosiswithpelvicadhesions

LI Tian-tian1,2， SUN Wei-wei1， ZHAO Rui-hua1*

(1.Guang’anmen Hospital, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100053, China； 2.The Beijing Muslem People’ s Hospital, Beijing 100054)

ObjectiveTo establish and evaluate a rat model of endometriosis with pelvic adhesions.MethodsTo establish a rat model of endometriosis and pelvic adhesions by autologous transplantation of endometrial tissue to the mesenterium. After modeled, eight rats were randomly selected for examination at 1, 3, 5, 7, 14, 21 and 28 days after operation. The American Society for Reproductive Medicine Classification of Endometriosis and Haber Adhesion Score were used to evaluate the pelvic adhesions. At the same time, the lesions and surrounding peritoneal adhesions were taken for pathological examination using HE staining. The tissue-type plasminogen activator (tPA) content was detected at 5, 7, 14, 21 and 28 days after operation.ResultsThe two adhesion scoring methods showed that typical pelvic adhesions were formed 5 days after modeling. Compared with the blank control group and the sham operation group, the tPA content in the pelvic adhesions of the model group was significantly decreased after 5 days (P< 0.01), and increased at 28 days after model establishment, but still significantly lower than that of the blank control group and sham operation group (P< 0.01).ConclusionsThe autologous transplantation method is successfully used to establish a rat model of pelvic adhesions of endometriosis in the mesenterium. The model is matured at 5 days after surgery. The tPA is correlated with the formation of pelvic adhesions of endometriosis.

Endomeitriosis; Pelvic adhesions; Rat; Tissue-type plasminogen activator, tPA

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81373678)。

李田田(1989-)，女，住院醫(yī)師，碩士研究生，研究方向：中醫(yī)婦科。E-mail： 836859326@qq.com

趙瑞華(1959-)，女，主任醫(yī)師，博士，研究方向：中醫(yī)婦科。E-mail： Rhz801@sohu.com

A

1671-7856(2017) 12-0008-08

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.12.002