夏玲芝 沈傳來

(南京金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所自身免疫性疾病檢測中心,南京 210061)

·專題綜述·

多發(fā)性硬化癥及實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎免疫療法的研究進(jìn)展①

夏玲芝 沈傳來②

(南京金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所自身免疫性疾病檢測中心,南京 210061)

多發(fā)性硬化癥(MS)是一種慢性進(jìn)行性中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)脫髓鞘的炎癥性自身免疫病，主要由自身反應(yīng)性CD4+T細(xì)胞對(duì)髓鞘自身抗原發(fā)生免疫應(yīng)答所致，自身反應(yīng)性CD8+T細(xì)胞[1]和B細(xì)胞[2]等也參與免疫損傷作用。小鼠、大鼠或豚鼠的實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)是目前最廣泛使用的MS動(dòng)物模型，與MS有相似的組織病理變化和疾病進(jìn)程、相同的髓鞘蛋白抗原，如髓鞘堿性蛋白(MBP)、髓鞘蛋白脂蛋白(PLP)、髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖化蛋白(MOG)等，以及很多已被明確的相同或相似的優(yōu)勢T細(xì)胞表位。近年來對(duì)EAE和MS的免疫療法研究繁多，本文刪繁就簡，根據(jù)免疫機(jī)制不同自行將之歸納為非特異性療法、“間接”特異性療法和“直接”特異性療法等三大類共14種治療策略進(jìn)行全面總結(jié)和綜合述評(píng)。

1 非特異性療法

即沒有使用自身抗原，而是使用其他免疫制劑，非特異性地靶向炎癥細(xì)胞因子、T細(xì)胞、B細(xì)胞、抗原提呈細(xì)胞(APC)或其他固有免疫細(xì)胞，抑制機(jī)體的整體免疫功能。根據(jù)靶向的目標(biāo)不同可分為如下主要策略。

1.2靶向CD4+T細(xì)胞 靜脈輸注anti-CD127，封閉CD4+T細(xì)胞膜上的IL-7Ra，從而阻止TH0細(xì)胞向TH1分化，抑制后者所介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)[9]；利用聚乳酸-羥基乙酸納米顆粒(PLGA-NPs)做載體，里面包裹KN93(鈣-鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶-4的小分子抑制劑)，表面覆蓋脂質(zhì)層并包被anti-CD4，制備成納米膠(Nanolipogel)，腹腔注射治療EAE和狼瘡樣疾病，靶向結(jié)合CD4+T細(xì)胞并在局部緩釋KN93，以旁分泌方式靶向抑制TH0細(xì)胞向TH17分化，降低炎癥反應(yīng)的發(fā)生[10]；經(jīng)凋亡細(xì)胞處理的樹突狀細(xì)胞(DC)，具有致耐受性DC(Tolerogenic DC)的特性，靜脈輸注后可以非特異性地抑制效應(yīng)性記憶CD4+T細(xì)胞(TEM)的發(fā)育和分化，阻止EAE發(fā)展，但對(duì)中樞記憶性CD4+T細(xì)胞(TCM)沒有影響[11]；鼠或人β-防衛(wèi)素(mBD14,hBD3)是一種抗菌肽，經(jīng)靜脈輸注后能非特異性地促使CD4+T細(xì)胞向調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)分化，治療接觸性過敏和EAE顯示有效[12]。這類策略靶向抑制CD4+T細(xì)胞向TH1、TH17或TEM分化，促進(jìn)其向Treg分化，抑制機(jī)體的細(xì)胞免疫和炎癥反應(yīng)，屬主動(dòng)免疫抑制療法，缺點(diǎn)是不具備自身抗原的特異性，必定影響機(jī)體針對(duì)其他病原體、腫瘤等抗原的CD4+T細(xì)胞的特異性免疫應(yīng)答能力。

1.3靶向抗原提呈細(xì)胞 用PLGA-NPs包裹PHCCC(一種小分子谷氨酸受體增強(qiáng)劑)，靜脈注射后被DC吞噬，改變DC代謝谷氨酸的方式，降低DC的活化和抗原提呈能力，并使其細(xì)胞因子的分泌發(fā)生偏移，誘導(dǎo)TH0向Treg分化、抑制TH17分化并減少炎癥因子的釋放，從而推遲EAE進(jìn)程，減輕癥狀[13]；GABA(γ-氨基丁酸)或γ-乙烯氨基丁酸(抗癲癇藥)口服或腹腔注射，抑制抗原提呈細(xì)胞(APC)活性，降低IL-6、TNF-α等水平，也能抑制EAE發(fā)展[14]； B7分子結(jié)合肽(CD80CAP1、B7AP、sF2)[15]或CTLA-4-Ig[16]靜脈輸注后能非特異性地阻斷APC細(xì)胞膜上的B7分子與T細(xì)胞膜上CD28分子的結(jié)合，抑制T細(xì)胞活化，用于治療EAE、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)和腎移植排斥等。靶向APC療法主要是一種間接影響CD4+T細(xì)胞活化的策略，不但缺少抗原特異性，而且其中不可控因素較多。

1.4靶向B細(xì)胞 Anti-CD20(如Rituximab、Ocrelizumab、Automumab等)、Anti-CD19(如MEDI-551)、Anti-BAFF-R(如VAY736)等單抗已被用于MS的臨床試驗(yàn)，非特異性地靶向清除和抑制B細(xì)胞[2]。其抑制體液免疫反應(yīng)的能力很強(qiáng)，療效顯著，但非特異性地清除B細(xì)胞必然引起整體免疫功能下降。未來應(yīng)更多考慮病變組織局部的給藥治療和B細(xì)胞不同分化階段的靶向療法，以降低對(duì)整體B細(xì)胞庫的損傷。

1.5靶向其他固有免疫樣細(xì)胞 利用硫脂抗原靶向抑制NKT細(xì)胞(包括invariant NKT和variant NKT)，間接抑制TH1、TH17和細(xì)胞毒T細(xì)胞(CTL)分化，降低炎性細(xì)胞因子水平，同時(shí)促進(jìn)Treg細(xì)胞分化增殖及IL-10、TGF-β等調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子釋放，但具體作用機(jī)制不明，在EAE治療中有很多矛盾的結(jié)果報(bào)道，可能與使用劑量、模型鼠遺傳背景等因素有關(guān)[17,18]。但是，a-GalCer(KRN7000)和OCH(a-GalCer anologue)等已廣泛用于臨床前和臨床研究，在抗腫瘤和抗肝炎病毒感染的治療中有明確的效果[19]；利用淀粉纖維如糊精Amylin28-33經(jīng)腹腔注射治療EAE，非特異性活化腹腔B1a細(xì)胞(CD19hi/CD5+)和巨噬細(xì)胞(CD11bhiF4/80+)，使其細(xì)胞膜上表達(dá)抑制性細(xì)胞受體如BTLA、IRF4、Siglec G等，同時(shí)分泌IL-10等調(diào)節(jié)性因子[20]。

2 “間接”特異性療法

使用了髓鞘自身抗原或多肽，但可能的主要機(jī)制是被APC攝取、提呈，通過選擇性活化途徑誘導(dǎo)致耐受性DC等抑制性APC細(xì)胞形成，從而間接抑制抗原特異性T細(xì)胞(AST)的分化和效應(yīng)功能。主要策略如下。

2.1可溶性多肽療法(Peptide immunotherapy，PIT) 如將MBP85-99、PLP139-151和MOG35-55等多肽混合物經(jīng)真皮注射治療MS患者顯示有效，Treg、IL-10、TGF-β等上升，TH1、TH17、IFN-γ等下降[21,22]；更多的髓鞘抗原多肽經(jīng)靜脈、真皮和口服等途徑治療EAE顯示有效，但口服方式在MS治療中不成功[23]?？扇苄远嚯牡淖饔脵C(jī)制有爭議，主要可能經(jīng)APC攝取和提呈途徑影響AST細(xì)胞，但也可能部分地直接與AST細(xì)胞上的TCR結(jié)合，誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡、無能或功能抑制等[24]；利用改變個(gè)別氨基酸的抗原多肽(Altered peptide ligand,APL)可以進(jìn)一步避免多肽療法引起的過敏反應(yīng)[25-27]；格拉默(Glatiramer acetate)是目前唯一被FDA批準(zhǔn)的治療MS的多肽藥物，是模擬髓鞘蛋白的四個(gè)氨基酸無規(guī)則聚合物，但只對(duì)少數(shù)患者有效。抗原性多肽制備容易，但已明確的種類有限，是否與患者高度多態(tài)性的HLA等位基因相匹配值得進(jìn)一步考慮。

2.2可溶性多肽鏈療法(Soluble antigen arrays，SAgAs) 如將PLP139-151多肽和LABL(一種ICAM-1分子的抑制性多肽，來自LFA-1分子)偶聯(lián)到線性結(jié)構(gòu)的透明質(zhì)酸聚合物(HA)上。LABL能與APC等細(xì)胞膜上的黏附因子ICAM-1結(jié)合，經(jīng)皮下或靜脈注射后有利于SAgAs靶向于APC，從而被攝取或與APC表面結(jié)合，但具體作用機(jī)制不明[28]；將PLP139-151多肽和能與B7分子結(jié)合的CD28或CTLA-4分子模擬多肽(B7AP、CD80-CAP、sF2)偶聯(lián)到HA上，則可利用這些模擬肽靶向結(jié)合APC上的B7分子，從而阻斷或封閉APC細(xì)胞與T細(xì)胞間的B7/CD28信號(hào)途徑[29]。這種攜帶多種抗原肽和抑制性信號(hào)分子的線性聚合物制備較容易，而且具有將抗原肽靶向提呈給APC并抑制APC活化的雙功能，但其療效往往取決于該可溶性聚合物的物理化學(xué)特征。聚合物大小、免疫分子的親和力、鏈纏結(jié)(Chain entanglement)等因素直接決定免疫反應(yīng)的走向：免疫原性或免疫耐受性。目前眾多探索發(fā)現(xiàn)SAgAs 療法能顯著降低EAE的臨床評(píng)分，推遲發(fā)病日期(Day of onset)以及降低發(fā)病率；同時(shí)顯示：T細(xì)胞活化的雙信號(hào)同時(shí)同地提呈給T細(xì)胞能顯著減輕EAE癥狀，但是不連接在一起的兩個(gè)信號(hào)成分的混合物(如混合多肽或多肽與HA混合物)則不能有效減輕EAE[28,30]。

2.3多肽或抗原共價(jià)結(jié)合的凋亡細(xì)胞療法(Ag-apoptotic cells) 凋亡細(xì)胞經(jīng)靜脈輸注后到達(dá)脾臟邊緣區(qū)，經(jīng)凋亡途徑降解后的細(xì)胞碎片被邊緣區(qū)巨噬細(xì)胞表面的清道夫受體SRBⅡ識(shí)別而后被吞噬。APC攝取這些凋亡細(xì)胞成分后通過選擇性活化途徑形成致耐受性APC而不是致炎癥性APC，分泌IL-10、TGF-β，誘導(dǎo)Treg升高，從而間接調(diào)節(jié)AST細(xì)胞，抑制TH細(xì)胞向TH1和TH17分化。比如，將格拉默多肽藥裝載于用絲裂酶素處理的DC或脾細(xì)胞，靜脈給藥治療EAE，則炎性細(xì)胞因子(IL-2、4、6、12、17,IFN-γ,TNF-α)分泌降低，抑制性細(xì)胞因子(TGF-β、IL-10)表達(dá)升高，T細(xì)胞增殖能力減弱[31，32]；將完整蛋白分子(PLP、MOG、MBP)、混合多肽(PLP139-151、PLP178-191、MBP84-104、MOG92-106)或脊髓組織勻漿等脈沖處理經(jīng)ECDI(Ethylenecar-bodiimide)固定后的脾細(xì)胞，ECDI可致細(xì)胞凋亡，靜脈給藥,已進(jìn)行MS的臨床Ⅱ期治療研究。這種抗原結(jié)合的脾細(xì)胞可能直接將抗原肽提呈給T細(xì)胞，但由于沒有共刺激分子的作用，將誘導(dǎo)AST細(xì)胞無能；或者通過間接提呈方式，即負(fù)載有抗原的凋亡脾細(xì)胞碎片被體內(nèi)APC細(xì)胞攝取，誘導(dǎo)致耐受性DC的形成，從而介導(dǎo)T細(xì)胞耐受而不是介導(dǎo)免疫應(yīng)答反應(yīng)。但是，這種負(fù)載抗原的凋亡細(xì)胞經(jīng)腹腔、皮下和口服等途徑治療MS或EAE則顯示無效[33-35]；新近，有人用雙功能交聯(lián)劑SMCC代替ECDI，將MOG35-55分別偶聯(lián)到凋亡的和活的脾細(xì)胞上，然后經(jīng)靜脈注射治療EAE。結(jié)果顯示，在主動(dòng)EAE、被動(dòng)EAE、再刺激EAE(re-challenged)模型中以及在EAE的防護(hù)性和治療性研究中，脊髓組織局部炎性細(xì)胞浸潤減少、脫髓鞘和軸突丟失現(xiàn)象減輕、CD4+T細(xì)胞的體外增殖能力減弱、Treg升高、IFN-γ和IL-17減少等。但是這兩種脾細(xì)胞形式得到了相似的治療效果，即抗原負(fù)載凋亡脾細(xì)胞與抗原負(fù)載活脾細(xì)胞的療效沒有顯著區(qū)別，提示不一定需要凋亡細(xì)胞才能在血中被APC吞噬而誘導(dǎo)自身免疫抑制或耐受，具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究[36]。

2.4多肽修飾或包裹的仿生納米顆粒療法(Antigen-decorated or encapsulated nanoparticles,Ag-NPs) 利用直徑400～500 nm的仿生納米顆粒模擬和代替凋亡細(xì)胞，將PLP139-151共價(jià)偶聯(lián)到羧化物聚苯乙烯或聚乳酸-羥基乙酸(PLG)納米顆粒表面，靜脈注射治療EAE，被脾臟邊緣區(qū)巨噬細(xì)胞膜上MARCO分子識(shí)別而被巨噬細(xì)胞和DC所吞噬，從而促使巨噬細(xì)胞和DC分泌IL-10和TGF-β，并進(jìn)一步誘導(dǎo)APC表面PD-L1的上調(diào)表達(dá)；這些致耐受性APC提呈抗原肽給自身抗原特異性T細(xì)胞，介導(dǎo)AST細(xì)胞克隆清除、無能或流產(chǎn)活化，從而誘導(dǎo)抗原特異性的耐受；同時(shí)，IL-10和TGF-β誘導(dǎo)產(chǎn)生的Treg可能起到保持長期耐受的作用。這種被稱為致耐受性NPs的體內(nèi)作用機(jī)制尚未完全清楚，但在對(duì)EAE模型的預(yù)防和治療研究中可以使發(fā)病推遲、臨床評(píng)分降低、中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴細(xì)胞、APC和小膠質(zhì)細(xì)胞浸潤減少，共培養(yǎng)中分泌INF-γ和IL-17的TH1和TH17細(xì)胞降低。該Ag-NPs經(jīng)靜脈輸注才能誘導(dǎo)T細(xì)胞耐受，腹腔注射只能誘導(dǎo)部分T耐受，皮下注射或口服則基本無效[37,38]；將芳香烴受體激動(dòng)劑ITE和MOG35-55共包被金納米顆粒，在治療EAE中誘導(dǎo)致耐受性DC，進(jìn)而促進(jìn)Treg產(chǎn)生，抑制EAE的發(fā)生和發(fā)展[39]；將多肽和雷帕霉素共包裹在PLG納米顆粒里面，靜脈或皮下給藥治療EAE或超敏反應(yīng)，抑制抗原特異性CD4+T和CD8+T細(xì)胞的活化，同時(shí)誘導(dǎo)抗原特異性的Treg和Breg(調(diào)節(jié)性B細(xì)胞)產(chǎn)生，且可以使B細(xì)胞產(chǎn)生針對(duì)多種免疫原的、持久性的耐受。這種致耐受性納米顆粒經(jīng)靜脈注射后聚集于肝、脾，并與巨噬細(xì)胞和DC共定位，皮下接種后集中于淋巴結(jié)[40]。裝載抗原肽的納米材料被APC吞噬，誘導(dǎo)致耐受性APC的形成，從而間接抑制自身抗原特異性T細(xì)胞的活化是這類策略的基本原理，但是否抑制其他抗原特異性T細(xì)胞的反應(yīng)能力需要進(jìn)一步明確。

2.5重組TCR配體療法(Recombinant TCR ligand,RTL) 即制備MHCⅡ類分子α1β1功能區(qū)與特定抗原肽的單鏈蛋白，經(jīng)皮下或靜脈給藥，治療MS和EAE。如RTL1000是HLA-DR2-α1β1-hMOG35-55的重組單鏈蛋白，已用于MS患者的臨床Ⅰ期治療研究[41]；RTL551(I-Ab-α1β1-mMOG35-55)[42]、RTL401(I-As-α1β1-mPLP139-151)[43]和RTL200 (ratRT1.B-α1β1-ratMBP69-89)[44]等用于EAE治療。這類多肽與MHCⅡ類分子復(fù)合物的部分結(jié)構(gòu)體的體內(nèi)作用機(jī)制尚未完全明確，主要是通過其β1結(jié)構(gòu)區(qū)與單核、巨噬細(xì)胞膜上的CD74分子結(jié)合，導(dǎo)致其表達(dá)下調(diào)，阻斷移動(dòng)抑制因子(MIF)與CD74結(jié)合,導(dǎo)致局部單核細(xì)胞數(shù)量減少，誘導(dǎo)M2型單核細(xì)胞和少膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生，進(jìn)而抑制下游炎性反應(yīng)的發(fā)生；同時(shí)也可能與TCR結(jié)合，阻斷CD4信號(hào)途徑，部分抑制T細(xì)胞效應(yīng)[45]。

3 “直接”特異性療法

即利用MHC分子與自身抗原肽的復(fù)合體(pMHC)直接靶向AST細(xì)胞，誘導(dǎo)其凋亡、無能或抑制。目前此類研究在MS和EAE中極少見，但在Ⅰ型糖尿病、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、同種移植和超敏反應(yīng)模型中已有所報(bào)道，主要策略如下。

3.1可溶性pMHC多聚體療法(pMHC multimers) 制備I-Ag7-Ig與胰島反應(yīng)性CD4+T 細(xì)胞(BDC2.5)的模擬肽1040-31相嵌合的MHC-Ⅱ類分子二聚體，在體外或NOD鼠體內(nèi)能有效誘導(dǎo)BDC2.5CD4+T死亡、分泌IL-10的Tr1樣細(xì)胞增殖，有效預(yù)防和抑制Ⅰ型糖尿病(T1D)的發(fā)生和發(fā)展[46,47]；可溶性HLA-DR0401-Ig/GAD65271-285二聚體在體外與T1D患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)共培養(yǎng)中也能誘導(dǎo)分泌IL-10的Tr1樣細(xì)胞增殖[48]；攜帶毒性物質(zhì)如皂草素、Ⅰ型核糖體滅活蛋白等的pMHCⅠ類分子的四聚體經(jīng)靜脈輸注可以選擇性地清除抗原特異性CD8+T細(xì)胞[49,50]，并在抑制移植排斥和推遲T1D發(fā)展中顯示效應(yīng)[51-53]?？扇苄詐MHC多聚體可直接靶向抗原特異性T細(xì)胞，誘導(dǎo)凋亡或殺傷，但是其體內(nèi)使用劑量可能較大，制備成本較高，而且需要新的保護(hù)策略以避免被蛋白酶降解。

3.2pMHC多聚體修飾的仿生納米顆粒療法(pMHC-NPs) 將pMHC-Ⅰ類多聚體負(fù)載在葡聚糖納米粒表面(114 nm)，靜脈輸注后可以保護(hù)NOD小鼠免于T1D的發(fā)生，也可以在新發(fā)病的T1D小鼠中治療胰島炎癥和維持正常的血糖量[54]。主要機(jī)制是：pMHC-NPs可以清除高親和力的自身反應(yīng)性CD8+T細(xì)胞；更能擴(kuò)增該抗原表位特異性的、低親和力的、具有記憶表型的自身調(diào)節(jié)性CD8+T細(xì)胞，而后者可以抑制或殺傷攜帶多種自身抗原的APC，從而抑制多種自身抗原的提呈，最終抑制多克隆自身反應(yīng)性T細(xì)胞的活化，而沒有裝載自身抗原的APCs不會(huì)被自身調(diào)節(jié)性CD8+T細(xì)胞所抑制或殺傷[55,56]。但是，pMHC-NPs是否適合其他的自身免疫病如MS，包被pMHCⅡ類分子的NPs是否可以擴(kuò)增自身調(diào)節(jié)性CD4+T細(xì)胞，在體內(nèi)是否易于被吞噬，pMHC的親和力、包被濃度以及NPs的種類、尺寸和注射劑量是否影響其功能等問題都需要進(jìn)一步研究[57]。與Ag-NPs主要作用于APC不同，pMHC-NPs主要直接靶向于抗原特異性T細(xì)胞，但面臨著如何避免被APC吞噬的問題。

3.3殺傷性抗原提呈細(xì)胞(KAPCs) 人們通過基因轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)使遞呈有靶抗原的DC[58]、單核細(xì)胞[59]、B細(xì)胞[60]、成纖維母細(xì)胞[61]、造血干細(xì)胞[62]或其他細(xì)胞系[63]等表達(dá)FasL，在體外培養(yǎng)[64]和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，通過細(xì)胞膜上的pMHC分子靶向結(jié)合抗原特異性T細(xì)胞，同時(shí)通過膜上的FasL與活化后T細(xì)胞膜上的Fas分子結(jié)合誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡，在同種移植排斥[61-63,65]、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎[66]及變態(tài)反應(yīng)[67]等的動(dòng)物模型中都有良好的治療效果。但是，KAPCs療法同時(shí)也遭到諸多質(zhì)疑：除了生物安全性和原代DC等細(xì)胞的大規(guī)模制備困難外，更重要的是FasL在載體細(xì)胞膜上的表達(dá)水平難以均勻控制。未表達(dá)或過低表達(dá)FasL的細(xì)胞會(huì)促進(jìn)抗原特異性T細(xì)胞活化擴(kuò)增；過高表達(dá)FasL又會(huì)導(dǎo)致非特異性殺傷；部分殺傷性細(xì)胞還能分泌可溶性FasL，誘導(dǎo)自身及其他表達(dá)Fas分子的組織細(xì)胞發(fā)生凋亡；另外還可引起嚴(yán)重的中性粒細(xì)胞反應(yīng)。因此表達(dá)FasL的殺傷性抗原遞呈細(xì)胞成為一種“雙刃劍”，在不少的治療實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)矛盾或相反的結(jié)果[68,69]。

3.4殺傷性人工抗原提呈細(xì)胞(KaAPCs) 以非細(xì)胞性仿生材料做載體，標(biāo)記pMHC多聚體和FasL，制備成殺傷性微米顆粒，靶向結(jié)合AST細(xì)胞并誘導(dǎo)其凋亡。2008年， Schutz等[70]用anti-Fas和HLA-A2/肽二聚體共同標(biāo)記細(xì)胞大小的磁珠(4.5 μm)，替代殺傷性抗原提呈細(xì)胞療法。CMVpp65-殺傷性磁珠或MART127-35-殺傷性磁珠在體外共培養(yǎng)中均可選擇性地誘導(dǎo)85%～87%的特異性CTL細(xì)胞株凋亡，而沒有標(biāo)記anti-Fas的對(duì)照磁珠只有3%～13%的凋亡率。這種殺傷性磁珠不能活化靜止的CTL，只能使已經(jīng)活化的CTL凋亡。2010 年，Schutz等[71]綜合述評(píng)了這種靶向殺傷性載體的現(xiàn)狀和前景，提出它具有殺傷性細(xì)胞所沒有的明顯優(yōu)勢：可以在GMP條件下標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)?；a(chǎn)，MHC抗原和FasL的包被量可自由控制，質(zhì)量均一，從而可有效控制毒副作用；沒有B7等共刺激分子和黏附分子，不能使靜止T細(xì)胞形成免疫突觸而活化，只能使已經(jīng)活化的T細(xì)胞凋亡，適合在自身免疫病、移植排斥和超敏反應(yīng)等患者體內(nèi)對(duì)過度活化T細(xì)胞進(jìn)行清除；不能加工遞呈其他抗原而引起非病原性T細(xì)胞的損傷；不能分泌可溶性FasL而引起自分泌和旁分泌殺傷，也不易被受者的CTL識(shí)別為靶細(xì)胞而被攻擊等。2011年，本文作者將H-2Kb單體和anti-Fas負(fù)載至4.5 μm膠乳微球表面，經(jīng)靜脈輸注治療小鼠皮膚移植排斥，證實(shí)KaAPCs在體內(nèi)能選擇性使脾細(xì)胞中H-2Kb同種反應(yīng)性T細(xì)胞頻率下降60%；皮膚移植物存活期延長6 d；移植物局部的炎性細(xì)胞、T細(xì)胞都顯著減少；而整體免疫功能沒有明顯下降[72]。2015年，用可生物降解、無毒性的聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)微球代替膠乳微球，得到相似的療效[73]。2016年，將H-2Kb-Ig/OVA257-264二聚體和anti-Fas偶聯(lián)于4.5 μm PLGA微球表面，在體外和OT-1 TCR轉(zhuǎn)基因鼠體內(nèi)系統(tǒng)研究了KaAPCs靶向殺傷OVA257-264特異性CD8+T細(xì)胞的能力和機(jī)制；經(jīng)尾靜脈輸注后，48 h時(shí)PBMC中OVA257-264特異性CD8+T細(xì)胞減少90%以上，殺傷效應(yīng)維持4 d；體內(nèi)滯留時(shí)間48 h；利用H-2Kb-Ig二聚體和anti-Fas共負(fù)載PLGA微球，在單個(gè)MHC基因位點(diǎn)錯(cuò)配的皮膚移植鼠內(nèi)(C57BL/6和bm1供受對(duì))，三次靜脈注射導(dǎo)致皮膚移植物成活期延長41.5 d[74]。這些同種移植排斥的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示了KaAPCs療法在自身免疫病，尤其是MS、RA等以T細(xì)胞介導(dǎo)為主的自身免疫病中有很好的治療潛能。

上述三大類免疫療法各有優(yōu)點(diǎn)，也有各自的不足。每一類療法中的各種治療策略更是如此。非特異性療法中免疫制劑的制備相對(duì)較容易，大多為細(xì)胞因子或抗體，免疫抑制效果明顯而且作用范圍廣。但其主要不足是能抑制機(jī)體的整體免疫功能，由此導(dǎo)致機(jī)體抗感染能力、抗腫瘤能力減弱等副作用。“間接”特異性療法雖然使用了髓鞘自身抗原或其多肽，但并非直接靶向于自身反應(yīng)性T細(xì)胞，而是被APC攝取，通過選擇性活化途徑誘導(dǎo)致耐受性APC形成，分泌IL-10、TGF-β，誘導(dǎo)Treg產(chǎn)生，間接抑制TH1和TH17產(chǎn)生等。其主要不足有：在體內(nèi)誘導(dǎo)致耐受性APC存在不確定性，牽涉多種因素如APC的種類、組織特異性和表面受體、免疫制劑大小和抗原量等，不精確的靶向(如靶向漿細(xì)胞樣DCs的NPs[75]，皮下接種的NPs[38,40])反而會(huì)增強(qiáng)免疫應(yīng)答，加重疾??；另外此類EAE研究極少涉及自身反應(yīng)性CD8+T細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)?！爸苯印碧禺愋辕煼壳吧袠O少見于MS和EAE的治療研究。在同種移植排斥中，供受者間MHC的差異能夠明確鑒定，因此移植抗原較為明確， 所以“直接”特異性療法在治療同種移植排斥中有優(yōu)勢。但是，在自身免疫病中，大多數(shù)自身抗原及其抗原表位尚不清楚，因此pMHC多聚體的制備受限于已知抗原表位肽較少，其靶向殺傷或抑制的自身反應(yīng)性T細(xì)胞克隆數(shù)則較少，臨床療效受限。未來的發(fā)展方向應(yīng)考慮整合上述多種免疫療法，相互取長補(bǔ)短，開拓新型的更有效的綜合免疫治療策略。

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10.3969/j.issn.1000-484X.2017.12.028

R741.05R744.3

A

1000-484X(2017)12-1881-07

①本文受國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81172823，81372448)資助。

②東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)與免疫學(xué)系,南京 210009。

夏玲芝(1970年-)，女，主管檢驗(yàn)師，主要從事免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)和基礎(chǔ)研究。

及指導(dǎo)教師：沈傳來(1968年-)，男，博士，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事腫瘤、移植排斥和自身免疫病的免疫生物治療和免疫學(xué)新技術(shù)方面的研究，E-mail:chuanlaishen@seu.edu.cn 。

[收稿2017-05-18 修回2017-06-20]

(編輯 倪 鵬)