施紹瑞，漆曉玲，陳江，孫蓉

(宜賓市第二人民醫(yī)院檢驗科，四川 宜賓 644000)

宜賓地區(qū)健康新生兒淋巴細胞免疫分型研究

施紹瑞，漆曉玲，陳江，孫蓉

(宜賓市第二人民醫(yī)院檢驗科，四川 宜賓 644000)

目的研究宜賓地區(qū)健康新生兒的淋巴細胞免疫分型特點，探討健康新生兒與正常成人之間淋巴細胞免疫分型的差異。方法選取2015年1月至2016年12月在宜賓市第二人民醫(yī)院分娩及兒童保健科正常體檢的新生兒26例作為新生兒組，隨機選取同期本院健康體檢者44例作為成人組。采集新生兒足跟血60 μL，成年人全血2～3 mL，所有標本均在24 h內用BD FACSCanto II流式細胞儀完成檢測。結果與成人相比，宜賓地區(qū)新生兒末梢血CD3+T淋巴細胞百分比[(81.40±6.04)%vs(70.10±5.83)%]、CD3+CD4+CD8-T淋巴細胞百分比[(57.50±8.38)%vs(38.90±4.83)%]及CD3+T淋巴細胞絕對計數(shù)[(3 407.50±945.57)×106個/μL vs(1 429.50±376.44)×106個/μL]、CD3+CD4+CD8-T淋巴細胞絕對計數(shù)[(2 396.00±671.27)×106個/μL vs(791.70±237.18)×106個/μL]、CD3-CD19+B淋巴細胞絕對計數(shù)[(407.60±281.40)×106個/μL vs(249.50±92.46)×106個/μL]、CD3+CD4-CD8+T淋巴細胞絕對計數(shù)[(980.40±396.68)×106個/μL vs(531.70±155.51)×106個/μL]顯著增高，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，而CD3+CD4-CD8+T淋巴細胞百分比[(23.20±6.64)%vs(26.20±4.27)%]、CD3-CD16+CD56+NK細胞百分比[(6.00±2.91)%vs(16.50±5.64)%]及CD3-CD16+CD56+NK細胞絕對計數(shù)[(252.90±151.38)×106個/μL vs(325.80±129.25)×106個/μL]顯著降低，差異也均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；新生兒末梢血CD3-CD19+B淋巴細胞百分比與成人組之間比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。結論 宜賓地區(qū)健康新生兒末梢血淋巴細胞免疫分型與正常成年人之間存在差異，呈現(xiàn)了淋巴細胞隨著人類的生長發(fā)育而表現(xiàn)出的不同特點。

宜賓地區(qū)；健康新生兒；淋巴細胞亞群；免疫分型

隨著流式細胞術在臨床上的推廣和應用，很多醫(yī)院均已開展了淋巴細胞免疫分型。淋巴細胞免疫分型對于很多疾病的診斷、病情及療效評估都具有重要的作用[1-7]。但是國內關于健康新生兒淋巴細胞免疫分型的研究大部分都是基于新生兒臍血研究，新生兒末梢血淋巴細胞免疫分型的報道極少。本研究應用流式細胞術檢測健康新生兒末梢血淋巴細胞免疫分型，以了解宜賓地區(qū)健康新生兒的淋巴細胞免疫分型特點，并與正常成年人進行比較，為臨床上更好地應用淋巴細胞免疫分型提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1月至2016年12月在宜賓市第二人民醫(yī)院分娩及兒童保健科正常體檢的新生兒26例作為新生兒組，年齡0～28 d，平均(14.2±5.2)d；男性16例，女性10例。所有新生兒出生時Apgar評分均為10分。排除標準：(1)新生兒窒息；(2)新生兒高膽紅素血癥；(3)感染性疾病，如新生兒肺炎、病毒性感染等；(4)先天性免疫缺陷病或使用免疫調節(jié)劑；(5)母親妊娠后期用藥、妊娠糖尿?。?6)母親患有免疫性疾病或使用影響免疫功能的藥物。隨機選取同期本院健康體檢者44例作為成人組，其中男性24例，女性20例；年齡20～62歲，平均(40.75±9.15)歲。排除標準：(1)各種急慢性感染、急慢性傳染??；(2)免疫性疾病或使用影響免疫功能的藥物；(3)腫瘤、肝腎疾病和糖尿病等。本研究經宜賓市第二人民醫(yī)院倫理委員會批準，所有研究對象均簽署知情同意書，新生兒由其監(jiān)護人同意并簽署知情同意書。

1.2 試劑和儀器 美國BD公司生產的BD Multitest 6-Color TBNK Reagent六色免疫熒光抗體(CD3 FITC/CD16 PE+CD56 PE/CD45 PerCP-Cy5.5/CD4 PE-Cy7/CD19APC/CD8 APC-Cy7)、BDTrucountTMTubes絕對計數(shù)管、BD FACS Lysing Solution溶血素(10×)、BD熒光校準微球、BD FACSCantoⅡ流式細胞儀和BD FACSCanto分析軟件。

1.3 樣本采集及處理 采集新生兒足跟血60 μL，成人全血2～3 mL，均用K2EDTA抗凝。用移液器將20 μL BD Multitest 6-Color TBNK Reagent六色免疫熒光抗體加至標記好的BD Trucount?Tubes絕對計數(shù)管，再加入50 μL血液標本。混勻，室溫下避光反應15 min，然后再加入450 μL FACS溶血素(1×)?；靹颍覝叵卤芄夥磻?5 min后上機檢測。所有標本均在24 h內完成檢測。檢測結果用BD FACSCanto分析軟件分析。每次檢測前均用BD熒光校準微球校準優(yōu)化儀器檢測條件。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布，以均數(shù)±標準差(x-±s)表示，兩組樣本間均值比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 新生兒組和成人組T淋巴細胞亞群比較 新生兒組CD3+、CD3+CD4+CD8-T淋巴細胞百分比及絕對計數(shù)及CD3+CD4-CD8+T淋巴細胞絕對計數(shù)均高于成人組，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，而CD3+CD4-CD8+T淋巴細胞百分比低于成人組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表1、圖1和圖2。

2.2 新生兒組和成人組NK細胞和B淋巴細胞比較 新生兒組CD3-CD16+CD56+NK細胞百分比及絕對計數(shù)均低于成人組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，而CD3-CD19+B淋巴細胞絕對計數(shù)高于成人組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，新生兒組CD3-CD19+B淋巴細胞百分比與成人組之間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，見表2，圖3、圖4。

表1 新生兒組和成人組T淋巴細胞亞群比較(x-±s)

圖1 新生兒組和成人組T淋巴細胞亞群百分比

圖2 新生兒組和成人組T淋巴細胞亞群絕對值

表2 新生兒組和成人組NK細胞和B淋巴細胞比較(x-±s)

圖3 新生兒組和成人組NK細胞和B細胞百分比

圖4 新生兒組和成人組NK細胞和B細胞絕對值

3 討論

淋巴細胞是人類免疫系統(tǒng)的組成部分，目前，臨床上常見的淋巴細胞免疫分型是將淋巴細胞分為T淋巴細胞、B淋巴細胞和NK細胞，其中T淋巴細胞又可分為CD3+CD4-CD8+T淋巴細胞，以及CD3+CD4+CD8-T淋巴細胞[8]。新生兒是一個特殊的群體，他們剛脫離母體成為獨立的個體，免疫系統(tǒng)尚處于發(fā)育成熟的過程中，因而掌握新生兒的淋巴細胞免疫分型特點是非常必要的。

受社會、環(huán)境等多種因素的影響，不同地區(qū)、種族、年齡的人群淋巴細胞免疫分型存在差異[9-11]。目前國內關于健康新生兒淋巴細胞免疫分型的報道極少，且大都是基于臍血的研究，尚無四川宜賓地區(qū)健康新生兒的相關報道。但是臍血是脫離嬰兒個體后所獲得的標本，所呈現(xiàn)的淋巴細胞免疫分型特點與嬰兒體內循環(huán)血的淋巴細胞免疫分型特點的一致性未見相關報道來證實。另外臍血所呈現(xiàn)的淋巴細胞免疫分型特點也不能代表整個新生兒期。本研究新生兒組以年齡0～28 d的新生兒為研究對象，在年齡分布上覆蓋了整個新生兒期。臨床上檢測健康新生兒淋巴細胞免疫分型常采集足跟血，故本研究亦將足跟血作為標本研究，目的是最大限度的模擬實際應用情況來評價健康新生兒的淋巴細胞免疫分型情況。

本研究結果顯示宜賓地區(qū)新生兒末梢血CD3+、CD3+CD4+CD8-T淋巴細胞百分比及絕對計數(shù)均高于成人，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，而CD3+CD4-CD8+T淋巴細胞百分比、CD3-CD16+CD56+NK細胞百分比及絕對計數(shù)均低于成人，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。宜賓地區(qū)新生兒末梢血CD3-CD19+B淋巴細胞百分比與成人組差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，CD3-CD19+B淋巴細胞絕對計數(shù)高于成人，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，與林珊等[12]的報道不一致?？赡芤驗榱稚旱冗x擇外周血，而本研究將末梢血作為標本研究，另外也可能存在地區(qū)的差異[13]。

本研究結果顯示宜賓地區(qū)健康新生兒末梢血淋巴細胞免疫分型與正常成年人存在差異。這為研究人類免疫系統(tǒng)的發(fā)育過程提供了線索，也為臨床上更好地掌握新生兒淋巴細胞免疫分型提供了依據(jù)，同時再次證實了淋巴細胞免疫分型存在年齡、地區(qū)上的差異[14-15]。

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Immunophenotype of lymphocyte in healthy newborns of Yibin Regions.

SHI Shao-rui,QI Xiao-ling,CHEN Jiang,SUN Rong.Department of Clinical Laboratory,the Second People's Hospital of Yibin,Yibin 644000,Sichuan,CHINA

ObjectiveTo investigate the characteristics of peripheral blood lymphocyte subsets in healthy newborns in Yibin regions,and to explore the lymphocyte subsets differences between healthy newborns and normal adults.MethodsFrom January 2015 to December 2016,26 newborns delivered in the delivery room or had a physical examination in Department of Child Care in the Second People’s Hospital of Yibin were taken as the newborn group,and 44 normal adults of physical examination were randomly selected as the adult group.A total of 26 heel blood sample from healthy newborns and 44 whole blood samples from normal adults were collected.The percentages and absolute counts of lymphocyte subsets were detected by BD FACSCanto II flow cytometry within 24 hours.ResultsThe percentages of CD3+T lymphocyte,CD3+CD4+CD8-T lymphocyte,and absolute counts of CD3+T lymphocyte,CD3+CD4+CD8-T lymphocyte,CD3+CD4-CD8+T lymphocyte,B lymphocyte in the newborn group were(81.40±6.04)%,(57.50±8.38)%,(3 407.50±945.57)×106/μL,(2 396.00±671.27)×106/μL,(980.40±396.68)×106/μL,(407.60±281.40)×106/μL,respectively,which were significantly higher than corresponding(70.10±5.83)%,(38.90±4.83)%,(1 429.50±376.44)×106/μL,(791.70±237.18)×106/μL,(531.70±155.51)×106/μL,(249.50±92.46)×106/μL in the adult group(P＜0.05),while the percentages of NK cell,CD3+CD4-CD8+T lymphocyte and absolute counts of NK cell were(6.00±2.91)%,(23.20±6.64)%,(252.90±151.38)×106/μL,respectively,which were significantly lower than corresponding(16.50±5.64)%,(26.20±4.27)%,(325.80 ± 129.25)× 106/μ L in the adult group(P＜0.05).There was no significant difference in the percentages of CD3-CD19+B lymphocyte between the newborn group and adult group(P＞0.05).ConclusionThere is a difference between healthy newborns and normal adults in the immunocytochemistry of peripheral blood lymphocytes in Yibin regions,which shows the different characteristics of lymphocytes with human growth and development.

Yibin Regions;Healthy newborns;Lymphocyte subsets;Immunophenotype

R722

A

1003—6350（2017）22—3686—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.22.023

四川省宜賓市重點科技項目(編號：2014SF016)

施紹瑞。E-mail：774516315@qq.com

2017-04-29)