黃艷華

(韶關(guān)市中心血站成分科，廣東 韶關(guān) 512026)

中速、變速和高速離心方法對(duì)制備洗滌紅細(xì)胞質(zhì)量的效果對(duì)比

黃艷華

(韶關(guān)市中心血站成分科，廣東 韶關(guān) 512026)

目的觀察不同離心方法對(duì)制備洗滌紅細(xì)胞質(zhì)量的影響。方法選取經(jīng)無(wú)償獻(xiàn)血收集的懸浮紅細(xì)胞36袋(ALT>40 U·L-1)，隨機(jī)分為中速、變速、高速3組，每組12袋。采用人工三聯(lián)袋生理鹽水洗滌法，分別以不同離心速度制備洗滌紅細(xì)胞，制備完畢后檢測(cè)其紅細(xì)胞回收率、白細(xì)胞清除率、血漿蛋白清除率及血紅蛋白含量、上清蛋白質(zhì)含量和溶血率。結(jié)果3組洗滌紅細(xì)胞的紅細(xì)胞回收率、血漿蛋白清除率、上清蛋白質(zhì)含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)；中速組洗滌紅細(xì)胞的白細(xì)胞清除率、血紅蛋白含量及溶血率指標(biāo)明顯優(yōu)于變速組與高速組(P<0.05)。結(jié)論在滿足洗滌紅細(xì)胞制備標(biāo)準(zhǔn)的情況下，采用中速離心方法制備的洗滌紅細(xì)胞質(zhì)量較高。

離心方法； 洗滌紅細(xì)胞； 白細(xì)胞清除率； 效果對(duì)比

洗滌紅細(xì)胞是指健康全血去除全部血漿與90%白細(xì)胞及血小板，是外科常用的成分輸血制品，臨床常用于自身免疫性疾病、高鉀血癥及對(duì)血漿蛋白過(guò)敏的患者[1]。近年來(lái)隨著血液制備技術(shù)的不斷提高，洗滌紅細(xì)胞在臨床上應(yīng)用越來(lái)越廣泛，受到了臨床醫(yī)生的高度認(rèn)可。2001年版的洗滌紅細(xì)胞制備國(guó)標(biāo)[2]為紅細(xì)胞回收率≥70%，白細(xì)胞清除率≥80%，血漿蛋白清除率≥98%；隨著臨床上對(duì)洗滌紅細(xì)胞的要求越來(lái)越高，舊版的3種要求已不合時(shí)宜，2012年7月1日開(kāi)始實(shí)施的新版《全血及成分血質(zhì)量要求》[3]中對(duì)于洗滌紅細(xì)胞制備的要求為血紅蛋白含量≥36 g、上清蛋白質(zhì)含量<1.0 g、溶血率<紅細(xì)胞總量的0.8%和無(wú)菌生長(zhǎng)。在制備過(guò)程中，離心速度為影響洗滌紅細(xì)胞質(zhì)量的關(guān)鍵因素，本研究對(duì)采用3種不同離心速度制備的洗滌紅細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)分析，旨在為制定科學(xué)、有效的制備方法提供客觀依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 制備材料

韶關(guān)市中心血站2016年11月至2017年3月經(jīng)無(wú)償獻(xiàn)血收集的外觀正常、血袋無(wú)破損，2～6 ℃保存期在3～4 d 的懸浮紅細(xì)胞36袋，均為2 U·袋-1，ALT>40 U·L-1；500 mL生理鹽水和500 mL 生理鹽水洗滌聯(lián)袋(上海輸血技術(shù)有限公司)。

1.2 制備設(shè)備

無(wú)菌接合機(jī)(型號(hào)：902880/compodak，廠家：德國(guó)費(fèi)森尤斯公司)，SIGMA8K大容量低溫機(jī)(河南兄弟儀器設(shè)備有限公司)，高效熱合機(jī)(型號(hào)：SE330，廠家：Centron Technologies公司)，血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀(日本Sysmex Kx-21)，邁瑞B(yǎng)S-420全自動(dòng)生化分析儀(測(cè)定氰化高鐵血紅蛋白吸光度值)，752型可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海光譜儀器有限公司)，血漿游離血紅蛋白試劑盒(瑞爾達(dá)生物科技有限公司)，培養(yǎng)基(南京便診生物科技有限公司)。

1.3 制備方法

將懸浮紅細(xì)胞隨機(jī)分為中速、變速和高速3組，每組12袋。將1袋500 mL生理鹽水與懸浮紅細(xì)胞使用無(wú)菌接管機(jī)分別與洗滌聯(lián)袋接合，灌入150 mL生理鹽水后混勻離心一次，分出上清液和白膜，擠出上層清液和白膜，重復(fù)上述操作進(jìn)行第2、3次離心，最后加入生理鹽水配成70%體積比的紅細(xì)胞懸液，即為洗滌紅細(xì)胞懸液。中速組第一次離心速度為3500 r·min-1，溫度4 ℃，持續(xù)12 min；第2、3次離心時(shí)間為10 min。變速組第一次離心速度為3000 r·min-1，溫度4 ℃，時(shí)間12 min；第2、3次離心速度為3800 r·min-1，溫度4 ℃，時(shí)間10 min。高速組第一次離心速度為4000 r·min-1，溫度4 ℃，持續(xù)10 min；第2、3次離心時(shí)間6 min。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)

制備完畢后嚴(yán)格按照《血站技術(shù)操作規(guī)程(2015版)》(國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委.國(guó)衛(wèi)醫(yī)發(fā)〔2015〕95號(hào))采樣并檢測(cè)每袋懸混液白細(xì)胞總數(shù)、紅細(xì)胞總數(shù)及血漿白蛋白含量，計(jì)算紅細(xì)胞回收率、白細(xì)胞清除率、血漿蛋白清除率；采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)血紅蛋白含量、生化分析儀檢測(cè)上層清蛋白質(zhì)含量及溶血率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 3組洗滌紅細(xì)胞紅細(xì)胞回收率、白細(xì)胞清除率及血漿蛋白清除率比較

3組洗滌紅細(xì)胞的紅細(xì)胞回收率、血漿蛋白清除率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，中速組洗滌紅細(xì)胞的白細(xì)胞清除率明顯高于變速組和高速組(P<0.05)，見(jiàn)表1。

組別n紅細(xì)胞回收率白細(xì)胞清除率血漿蛋白清除率中速組1282．43±2．6692．46±1．6899．23±0．46變速組1281．79±2．5887．52±1．44?98．75±0．39高速組1282．56±2．7987．39±1．57?98．94±0．51

*P<0.05與中速組比較。

2.2 3組洗滌紅細(xì)胞血紅蛋白含量、上清蛋白含量及溶血率比較

3組洗滌紅細(xì)胞的上清蛋白含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，中速組血紅蛋白含量及溶血率指標(biāo)明顯優(yōu)于其他2組(P<0.05)，見(jiàn)表2。

組別n血紅蛋白含量m/g上清蛋白含量m/g溶血率/%中速組1271．63±6．380．72±0．260．43±0．11變速組1261．51±3．94?0．68±0．330．64±0．17?高速組1262．49±4．35?0．71±0．290．62±0．09?

*P<0.05與中速組比較。

3 討論

洗滌紅細(xì)胞的質(zhì)量要求從原來(lái)的針對(duì)紅細(xì)胞回收率、白細(xì)胞及血漿蛋白清除率的要求轉(zhuǎn)變?yōu)獒槍?duì)血液制品本身上來(lái)，2012版《全血及成分血質(zhì)量要求》[3]的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)用性更強(qiáng)，但同時(shí)也對(duì)制備過(guò)程提出了更加嚴(yán)格的要求。血站常用的洗滌紅細(xì)胞方法為全自動(dòng)機(jī)洗和手工洗，由于全自動(dòng)機(jī)洗成本較高，目前尚未廣泛應(yīng)用[4]，本血站多采用手工洗的方式，離心速度在制備過(guò)程中對(duì)洗滌紅細(xì)胞質(zhì)量起著重要影響。本研究結(jié)果顯示，中速組在白細(xì)胞清除率、血紅蛋白含量及溶血率指標(biāo)明顯優(yōu)于其他2組，證實(shí)了白細(xì)胞的清除效果與離心條件有關(guān)[5]。由于粒細(xì)胞與成熟度低的紅細(xì)胞比重較為接近，中速離心條件下，粒細(xì)胞可以懸浮在白膜下易于分離。變速條件下，雖然第一次離心可以達(dá)到清除白細(xì)胞的效果，但由于第2、3次采用的是低速離心，以致白細(xì)胞不能夠很好地懸浮在白膜下，而是置于紅細(xì)胞上層液中，影響清除與紅細(xì)胞的回收。高速離心方式雖然可以達(dá)到白細(xì)胞懸浮在白膜下，但由于離心速度過(guò)快，易導(dǎo)致白細(xì)胞呈片狀黏附在血袋壁上，影響去除效果。也有報(bào)道[6]指出，離心2次紅細(xì)胞回收率高于離心3次，但其白細(xì)胞清除率存在達(dá)標(biāo)率低的缺點(diǎn)，所以，國(guó)內(nèi)主流報(bào)道仍?xún)A向于離心3次[7]。

綜上所述，在滿足洗滌紅細(xì)胞質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的情況下，采用中速離心3次的制備方法獲得的洗滌紅細(xì)胞質(zhì)量較優(yōu)。

[1] 劉妹，鄧小軍，王丹.不同離心方法對(duì)制備洗滌紅細(xì)胞質(zhì)量的影響[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2016，18(1)：56-58.

[2] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.GB18469-2001全血及成分血質(zhì)量要求[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2001.

[3] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部、中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB18469-2012全血及成分血質(zhì)量要求[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2012.

[4] 徐亮.不同方法制備洗滌紅細(xì)胞檢測(cè)指標(biāo)比較思路構(gòu)建[J].中國(guó)民康醫(yī)學(xué)，2016，28(12)：30-31,32.

[5] 紀(jì)云鵬，朱紅芹，蔡莉.對(duì)洗滌紅細(xì)胞質(zhì)量控制項(xiàng)目刪除白細(xì)胞清除率的探討[J].中國(guó)輸血雜志，2014，27(10)：1044-1045.

[6] 周俊，吳濤，姜瑞民，等.懸浮紅細(xì)胞制備洗滌紅細(xì)胞不同方式的比較分析[J].中國(guó)輸血雜志，2013，26(9)：887-888.

[7] 莊運(yùn)芳.紅細(xì)胞保存液混懸洗滌紅細(xì)胞的制備及質(zhì)量控制[J].現(xiàn)代醫(yī)院，2016，16(8)：1183-1185.

2017-05-09

R457

A

1009-8194(2017)09-0017-02

10.13764/j.cnki.lcsy.2017.09.008

(責(zé)任編輯：鐘榮梅)