梁 琛，李小賞，劉煥娣

河北省衡水市第二人民醫(yī)院(衡水053000)

TCF4、β-catenin和E-cadherin在卵巢癌癌組織中的表達水平及意義*

梁 琛，李小賞，劉煥娣

河北省衡水市第二人民醫(yī)院(衡水053000)

目的：探討TCF4、β-catenin和E-cadherin在卵巢癌癌組織中的表達水平及意義。方法：采用免疫組織化學染色法(SP)檢測卵巢良性組織、卵巢交界性腫瘤組織及卵巢癌組織中TCF4、β-catenin和E-cadherin分子的表達情況。結果：與卵巢良性組織比較，卵巢癌組織和卵巢交界性腫瘤組織中TCF4、β-catenin陽性表達率和表達評分顯著升高(P<0.05)，而E-cadherin陽性表達和表達評分顯著降低(P<0.05)，與卵巢交界性腫瘤組織比較，卵巢癌組織TCF4、β-catenin陽性表達率和表達評分顯著升高(P<0.05)，而E-cadherin陽性表達和表達評分顯著降低(P<0.05)。結論：TCF4、β-catenin和E-cadherin異常表達可能參與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展過程，對三者聯(lián)合檢測能夠提高患者早期診斷及判斷預后的重要指標。

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性中腫瘤之一，其病亡率居女性生殖系統(tǒng)腫瘤首位，其發(fā)病年齡逐漸趨于年齡化，嚴重威脅婦女健康和生命[1-2]。β-連環(huán)蛋白(β-catenin)、E-鈣粘附素(E-cadherin)、T細胞因子4(TCF4)作為Wnt信號通路主要成員之一，其在腫瘤增殖、侵襲及轉移過程中扮演著重要角色[3-4]。本研究通過利用免疫組織化學法檢測TCF4、β-catenin和E-cadherin分子在卵巢良性組織、卵巢交界性腫瘤組織及卵巢癌組織中的表達情況，為尋找卵巢腫瘤轉移特異標記物及其分子靶向治療藥物提供基礎。

資料與方法

1 一般資料 收集衡水市第二人民醫(yī)院2012年1月至2014年12月病理科確診的306例卵巢腫瘤組織標本，其中102例卵巢良性組織(A組)、102例卵巢交界性腫瘤組織(B組)及102例卵巢癌組織(C組)，其中卵巢癌組織中患者年齡35～60歲，平均年齡(52.36±4.36)歲，按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)標準分期：Ⅰ～Ⅱ期50例，Ⅲ～Ⅳ52例；根據(jù)組織病理分級：高分化者47例，中、低分化者55例；遠處轉移者61例，無遠處轉移者41例，病理類型：漿液性76例，黏液性26例。

2 方 法 采用免疫組織化學染色法(SP)檢測卵巢良性組織、卵巢交界性腫瘤組織及卵巢癌組織中TCF4、β-catenin和E-cadherin分子的表達情況。收集所有組織標本經(jīng)10%中性多聚甲醛浸泡，石蠟包埋后切片，60 ℃恒溫烤箱烤片，二甲苯Ⅰ、Ⅱ進行脫蠟，各濃度梯度無水乙醇脫水，枸櫞酸緩沖液抗原修復后用3% H2O2內(nèi)滅活內(nèi)源性過氧化物酶，封閉后滴加一抗(TCF4、β-catenin和E-cadherin工作濃度均為1∶100)，于4℃冰箱保存，然后滴加含生物素標記二抗及辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，孵育后DAB顯色5 min，自來水沖洗，終止顯色，復染后分化返藍，然后進行脫水、透明、晾干處理，并用中性樹膠封片，鏡下觀察并攝像。

3 染色結果評定 染色結果采用陽性細胞染色比例和染色強度進行評價。隨機選取5個高倍視野并計數(shù)100個細胞，計算陽性細胞比例。

4 觀察指標 觀察比較TCF4、β-catenin和E-cadherin分子在三種組織中(卵巢良性、交界性腫瘤組織及卵巢癌組織)的表達情況。

5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計學軟件，計量資料采用均數(shù)±標準差表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料采用頻數(shù)和百分比表示，組間比較采用卡方檢驗，檢驗水準α=0.05。

結 果

1 TCF4、β-catenin和E-cadherin在各組間陽性表達率比較 與卵巢良性組織比較，卵巢癌組織和卵巢交界性腫瘤組織中TCF4、β-catenin陽性表達率顯著升高，而E-cadherin表達顯著降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，與卵巢交界性腫瘤組織比較，卵巢癌組織TCF4、β-catenin陽性表達率顯著升高，而E-cadherin表達顯著降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 TCF4、β-catenin和E-cadherin在各組間陽性表達率比較[n(%)]

注：與A組比較，*P<0.05；與B組比較，#P<0.05

2 TCF4、β-catenin和E-cadherin在各組間表達評分比較 與卵巢良性組織比較，卵巢癌組織和卵巢交界性腫瘤組織中TCF4、β-catenin表達評分顯著增加，而E-cadherin表達評分顯著降低(P<0.05)，且卵巢癌組織TCF4、β-catenin表達評分顯著高于卵巢交界性腫瘤組織(P<0.05)，而E-cadherin表達評分顯著低于卵巢交界性腫瘤組織，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 TCF4、β-catenin和E-cadherin在各組間表達評分比較

注：與A組比較，*P<0.05；與B組比較，#P<0.05

討 論

癌癥的發(fā)生是多種因素共同作用形成的，其中機體內(nèi)原癌基因和抑癌基因表達失衡是主要的分子機制[5]。研究表明，Wnt信號通路于人類腫瘤密切相關，Wnt信號轉導通路主要傳到生長和發(fā)育有關信號，進而參與機體內(nèi)細胞增殖、分化、粘附等過程[6]。大量文獻報道顯示，在肝癌、食管癌、胃癌、子宮內(nèi)膜癌等實體性腫瘤內(nèi)，均存在Wnt信號表達異常，使位于細胞膜上的E-cadherin蛋白表達含量降低，導致細胞膜穩(wěn)定性發(fā)生改變，細胞內(nèi)E-cadherin/β-catenin復合體分解，引起細胞質和細胞核β-catenin含量增加，進一步激活Wnt信號通路，同時異常激活Wnt信號通路能夠與E-cadherin基因啟動子結合，使E-cadherin基因轉錄下調(diào)，導致腫瘤細胞出現(xiàn)異常增殖，促進癌癥的發(fā)生[7-9]。 β-catenin是表達于細胞膜的一種胞內(nèi)蛋白，能夠特異性結合跨膜黏附分子E-cadherin，正常生理條件下細胞質及細胞核中含量極少。細胞黏附分子E-cadherin是一種鈣依賴性跨膜糖蛋白，主要存在于上皮細胞，參與形成和維持正常細胞間聯(lián)系，其對Ca2+具有高度特異性，其蛋白結構胞內(nèi)端能夠通過連接蛋白與微絲、中間絲、激動蛋白相連接，形成穩(wěn)定復合體并固定于細胞骨架，相鄰細胞間E-cadherin分子能夠緊密結合形成穩(wěn)定連接。而TCF4作為TCF/LEF家族主要成員之一，TCF4是一種基礎bHLH轉錄因子，具有雙重調(diào)控作用，在Wnt/β-catenin信號途經(jīng)中發(fā)揮著調(diào)控其下游基因的表達的作用，可表現(xiàn)為轉錄激活或轉錄抑制的作用，影響一系列下游靶基因的表達，在胚胎的分化及腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有明顯調(diào)控作用。

本研究結果顯示，與卵巢良性組織比較，卵巢癌組織和卵巢交界性腫瘤組織中TCF4、β-catenin陽性表達率顯著升高，而E-cadherin表達顯著降低，與卵巢交界性腫瘤組織比較，卵巢癌組織TCF4、β-catenin陽性表達率顯著升高，而E-cadherin表達顯著降低。同時比較三種分子在各組間表達含量評分，結果顯示，卵巢癌組織中TCF4、β-catenin表達評分顯著高于卵巢良性組織和卵巢交界性腫瘤組織，而E-cadherin表達評分顯著低于卵巢良性組織和卵巢交界性腫瘤組織，提示TCF4與β-catenin的表達增高和E-cadherin表達降低與卵巢癌惡性轉化密切相關，同時β-catenin信號異常會激活Wnt信號轉導通路，最終導致腫瘤的發(fā)生，而隨著病情發(fā)展，E-cadherin表達進一步降低，破壞維持上皮細胞極性和完整性中起重要作用的E-cadherin/β-catenin復合體功能異常，導致腫瘤的浸潤和轉移。因此，對卵巢良性組織、卵巢交界性腫瘤組織和卵巢癌組織中TCF4、β-catenin和E-cadherin表達的檢測，能夠成為揭示卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展機制之一?？紤]到本樣本病例數(shù)較少，TCF4、β-catenin和E-cadherin分子與卵巢交界性腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關系還需要進一步研究探討。

綜上所述，TCF4、β-catenin和E-cadherin的異常表達可能是通過上皮間質轉化促進卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉移等生理過程，臨床上對TCF4、β-catenin和E-cadherin聯(lián)合檢測將有助于提高卵巢癌患者的早期診斷的準確性及預后判斷，可能為卵巢癌治療提供一個新的方向。

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ExpressionlevelsandsignificanceofTCF4,β-cateninandE-cadherininovariancancertissues

Liang Chen，Li Xiaoshang，Liu Huanti.

Hengshui Second People 's Hospital in Hebei Province(Hengshui 053000)

Objective:To explore the expression levels and significance of TCF4, β-catenin and E-cadherin in ovarian cancer tissues. Methods: The expression levels of TCF4, β-catenin and E-cadherin in the ovarian benign tissues, the ovarian borderline tumor tissues and the ovarian cancer tissues were detected by immunohistochemical staining (SP).Results: Compared with those in the ovarian benign tissues, the positive expression rates and the expression scores of TCF4 and β-catenin were significantly increased (P<0.05) while the expression rate and the expression scores of E-cadherin were significantly decreased (P<0.05) in the ovarian cancer tissues and the ovarian borderline tissues. Compared with the borderline ovarian tumor tissues, the positive expression rates and the expression scores of TCF4 and β-catenin were significantly increased (P<0.05) in the ovarian cancer tissues while the expression of E-cadherin was significantly decreased (P<0.05). Conclusions: The abnormal expression of TCF4, β-catenin and E-cadherin may be involved in the development and progression of ovarian cancer, and the combined detection of TCF4, β-catenin and E-cadherin can improve the early diagnosis and prognosis of patients.

Ovarian Neoplasms @TCF4 @E-cadherin

*河北省衡水市科學技術局資助項目(2016014075Z)

卵巢腫瘤 @T細胞因子 @E-鈣粘附素

R737.31

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.12.061

(收稿：2017-04-16)