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1.廣東省中山市石岐蘇華贊醫(yī)院藥劑科，廣東 中山 528400；2.廣東藥科大學(xué)藥學(xué)院，廣東 廣州 510006

黑果枸杞與枸杞子水提取液抗氧化活性比較研究

曾秀蘭1施帆2鄭琪2張曉蕾2黎芷暉2陳欣彤2王治平2*

1.廣東省中山市石岐蘇華贊醫(yī)院藥劑科，廣東 中山 528400；2.廣東藥科大學(xué)藥學(xué)院，廣東 廣州 510006

目的對(duì)黑果枸杞和枸杞子水提取液的清除自由基抗氧化活性進(jìn)行比較研究。方法采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除法、總抗氧化能力測(cè)試法(鐵離子還原法)及亞鐵離子螯合法測(cè)定黑果枸杞和枸杞子水提取液的抗氧化能力。結(jié)果黑果枸杞清除DPPH自由基、亞鐵離子螯合能力IC50值分別為0.4194 mg/mL、104.46 mg/mL(枸杞子分別為2.6969mg/mL、276.02 mg/mL，濃度為1.96 mg/mL黑果枸杞水提液總抗氧化能力相當(dāng)于11.14 μg/mL維生素C(同濃度枸杞子水提液為4.51 μg/mL)。結(jié)論黑果枸杞水提液清除自由基抗氧化活性強(qiáng)于枸杞子水提取液，二者均具有明顯的體外清除自由基抗氧化活性及開(kāi)發(fā)天然抗氧化劑的潛力。

黑果枸杞；枸杞子；抗氧化；對(duì)比研究

黑果枸杞為茄科植物黑果枸杞LyciumruthenicumMurr.的干燥成熟果實(shí)，為藥食兼用的植物，含多糖、黃酮、色素、甜菜堿、微量元素等成分[1]，具有抗氧化[1-5]、抗動(dòng)脈粥樣硬化[6]、抗肝損傷[7]等作用。枸杞子為茄科植物寧夏枸杞LyciumbarbarumL.的干燥成熟果實(shí)，具有滋補(bǔ)肝腎，益精明目之功[8]，與黑枸杞類似，含有多糖、黃酮等成分，具有抗氧化[9-11]、抗結(jié)腸炎[12]、無(wú)健康風(fēng)險(xiǎn)[13]、改善糖尿病大鼠β細(xì)胞功能[14]、抗應(yīng)激[15]、降血脂[16]等活性。黑枸杞與枸杞子名稱僅一字之差，其所含成分類似，唯其顏色一黑一紅，李兆君等[2]比較了二者的黃酮含量及抗DPPH自由基活性，發(fā)現(xiàn)略有差別。由于市場(chǎng)對(duì)黑枸杞的熱炒及消費(fèi)者的盲從，致其價(jià)格上漲，資源面臨枯竭。迄今為止，未見(jiàn)對(duì)二者水提取液抗氧化活性進(jìn)行比較研究的文獻(xiàn)報(bào)道。本文采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除法、鐵離子還原法(普魯士藍(lán)法)、亞鐵離子螯合法，進(jìn)行黑枸杞和枸杞子水提液的抗氧化能力比較研究，以期為資源發(fā)掘及天然抗氧化劑開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(島津，MODEL：UV-2600 220V CH，SERIAL NO：A11665030141CS)，超聲波清洗器(2510型)，電子天平(BS201S型，d=0.01 mg，Sartourius公司)，超純水器(Millipore公司)。

1.2 試藥 1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH，貨號(hào)：S30629-1g)、菲洛嗪(貨號(hào)：S30675-1g)、三氯化鐵(無(wú)水，貨號(hào)：S24122-500g)、硫酸亞鐵(七水合物，貨號(hào)：S50639-500g)、鐵氰化鉀(貨號(hào)：S24282-500g)等購(gòu)于上海源葉生物科技有限公司；維生素C對(duì)照品(批號(hào)：100425-201504，廣東省藥品檢驗(yàn)所)；黑果枸杞(青海，批號(hào)：160901)及枸杞子(寧夏中寧，批號(hào)：1608009)購(gòu)于廣州美佳康藥店心誼路店。

2 方法

2.1 供試溶液的制備

2.1.1 維生素C對(duì)照溶液 精密稱取維生素C適量，用水制成每1 mL含1 mg維生素C的對(duì)照溶液，即得。

2.1.2 黑果枸杞及枸杞子水提液供試液 精密稱取黑果枸杞和枸杞子粗末約100 mg，置具塞瓶中，加水20 mL，超聲處理(水浴溫度60℃)45 min，過(guò)濾，即得。

2.2 清除DPPH自由活性測(cè)定[11]

2.2.1 DPPH工作液的配制 精密稱取DPPH 約5 mg，置100 mL量瓶中，加入70%乙醇溶液，超聲處理使溶解，搖勻，即得儲(chǔ)備液。取上述儲(chǔ)備液用70%乙醇適當(dāng)稀釋，即得DPPH工作液。

2.2.2 DPPH自由基清除活性測(cè)定 精密吸取“2.1”制備的水提液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，分別置10 mL具塞試管中，加入DPPH工作液2 mL，分別補(bǔ)加70%乙醇至4 mL，搖勻，密閉避光放置30 min，于517 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，每份樣品平行操作6次。按下式計(jì)算DPPH自由基清除率。

DPPH自由基清除率(%)=[1-(As-Ai)/Ac]×100%

式中：As=樣品溶液加入DPPH工作液的吸光度值，Ai=樣品溶液未加DPPH工作液的吸光度值，Ac=未加樣品溶液的DPPH工作液的吸光度值。

時(shí)代的發(fā)展與社會(huì)的進(jìn)步日新月異，然而在田野鄉(xiāng)間，婦女們?nèi)匀粋鞒胁l(fā)展著繡花鞋墊這種古老的民間手工藝。傳統(tǒng)繡花鞋墊不僅走出鄉(xiāng)間，成為民俗民藝展銷會(huì)上的亮點(diǎn)，而且也成為鄉(xiāng)親們創(chuàng)收致富的一種文化產(chǎn)業(yè)。當(dāng)前，如何保持其實(shí)用性與觀賞性，延續(xù)其民俗文化心態(tài)的穩(wěn)定特征，是土家族繡花鞋墊得以傳承與良性發(fā)展的關(guān)鍵所在。

2.3 普魯士藍(lán)法測(cè)定抗氧化能力[17-18]

2.3.1 維生素C標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密吸取“2.1”制備的維生素C對(duì)照品溶液20、40、60、80、100 μL，分別置5 mL量瓶中，加入1%鐵氰化鉀溶液1.25 mL，搖勻，水浴(50℃)加熱20 min，取出，依次加入10%三氯乙酸1.25 mL、0.1%三氯化鐵溶液0.5 mL，加水至刻度，搖勻，于700 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖1)，得回歸方程：A=0.0149C+0.31，相關(guān)系數(shù)為0.9991。

2.3.2 總抗氧化能力測(cè)定 精密吸取“2.1”制備的水提液0.5 mL，分別置5 mL量瓶中，同維生素C標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方法操作，每份樣品平行操作6次。

2.4 亞鐵離子螯合能力測(cè)定[17-18]精密吸取“2.1”制備的水提液0.1、0.25、0.5、0.75、1 mL，分別置10 mL具塞試管中，依次加入0.6 mmol/L硫酸亞鐵(FeSO4)0.1 mL，5 mmol/L菲洛嗪0.1 mL，加水至3 mL，搖勻，室溫放置10 min，以水作為空白對(duì)照，于562 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，每份樣品平行操作6次。按下式計(jì)算亞鐵離子螯合率。

亞鐵離子螯合率(%)=(1-A1)/A0 ×100%

式中：A1=樣品溶液的吸光度值，A0=空白對(duì)照溶液的吸光度值。

3 結(jié)果

3.1 DPPH自由清除能力的比較 采用體外DPPH自由基清除法，測(cè)試結(jié)果以Excel 2007計(jì)算IC50值，黑果枸杞和枸杞子水提液的IC50值分別為0.4194 mg/mL及2.6969 mg/mL，表明黑果枸杞水提液清除DPPH自由基活性更強(qiáng)(6.5倍)。見(jiàn)表1。

3.2 總抗氧化能力的比較 采用鐵離子還原法(普魯士藍(lán)法)測(cè)試總抗氧化能力，以回歸方程計(jì)算得出相當(dāng)于維生素C的量，結(jié)果顯示，1.96 mg/mL黑果枸杞水提液相當(dāng)于11.14 μg/mL維生素C(同濃度枸杞子水提液為4.51 μg/mL)的2.5倍(見(jiàn)表1)，相當(dāng)于維生素C的量越大則抗氧化活性越強(qiáng)，說(shuō)明黑果枸杞水提液抗氧化活性強(qiáng)于枸杞子水提液。

3.3 亞鐵離子螯合能力的比較 采用亞鐵離子菲洛嗪螯合法，測(cè)試結(jié)果以濃度對(duì)應(yīng)螯合率表示，以Excel 2007計(jì)算IC50值，結(jié)果顯示，黑果枸杞水提液及枸杞子水提液的IC50值分別為104.46 mg/mL及276.02 mg/mL(2.6倍)。結(jié)果見(jiàn)表1。

樣品DPPH自由基清除率IC50mg/mL總抗氧化能力/μg/mL亞鐵離子螯合能力IC50/mg/mL黑果枸杞0.4194±0.0073*11.14±0.719*104.46±4.176*枸杞子2.6969±0.20444.51±0.466276.02±8.013

注：與枸杞子比較，*P<0.05。

4 討論

黑果枸杞即黑枸杞，蒙名為“喬諾英-哈爾馬格”、藏藥名“旁瑪”。《四部醫(yī)典》、《晶珠本草》等藏藥經(jīng)典著作記載治療心熱病、心臟病、月經(jīng)不調(diào)、停經(jīng)等，藥效明顯。民間作滋補(bǔ)強(qiáng)壯，降壓用藥。我國(guó)甘肅酒泉、青海西部、新疆、內(nèi)蒙古西部和西藏等地有零星分布[1]。枸杞子為我國(guó)傳統(tǒng)民貴中藥材，同時(shí)又是國(guó)家衛(wèi)生部公布的藥食同源品種之一，在我國(guó)已有2000多年的使用歷史。

DPPH是一種以氮為中心的穩(wěn)定的自由基，加入抗氧化劑時(shí)DPPH 的單電子被配對(duì)，溶液顏色與配對(duì)電子數(shù)呈劑量相關(guān)性?？偪寡趸芰y(cè)試時(shí)的鐵離子還原能力與普魯士藍(lán)生成量成正比[17]。研究表明，黑果枸杞水提液清除DPPH自由基的能力、總抗氧化能力及亞鐵離子螯合能力均強(qiáng)于枸杞子水提液，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。由于抗氧化保健市場(chǎng)需求不斷增加，有必要對(duì)其清除自由基抗氧化活性及其功效物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行深入細(xì)致的研究。

[1]甘青梅，左振常，昌也平，等.藏藥“旁瑪”的考證及生藥學(xué)研究[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥，1995，4(1)：31-33.

[2]李兆君，丁潤(rùn)梅.寧夏枸杞與黑果枸杞總黃酮含量及抗自由基活性的比較研究[J].食品研究與開(kāi)發(fā)，2014(24)：39-41.

[3]伍玉輝，羅俊.黑果枸杞色素藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2015，24(7)：20-22.

[4]J Zheng, CX Ding, LS Wang, et al. Anthocyanins composition and antioxidant activity of wildLyciumruthenicumMurr.from Qinghai-Tibet Plateau [J]. Food Chem，2011(126)：859-865.

[5]T Wu，HY Lv，F(xiàn)Z Wang，et al.Characterization of Polyphenols fromLyciumruthenicumFruit by UPLC-Q-TOF/MS E and Their Antioxidant Activity in Caco-2 Cells[J].J Agric Food Chem,2016，64(11)：2280.

[6]林麗，李進(jìn)，呂海英，等.黑果枸杞花色苷對(duì)小鼠動(dòng)脈粥樣硬化的影響[J].中國(guó)中藥雜志，2012，37(10)：1460-1466.

[7]王超，蔣寶平，龍軍，等.黑果枸杞對(duì)急性酒精性肝損傷的保護(hù)及其抗氧化作用的影響[J].中藥新藥與臨床藥理，2015，26(2)：192-196.

[8]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015.

[9]楚笑輝，王伽伯，周燦平，等.不同商品等級(jí)枸杞子的抗氧化活性比較及其生物效價(jià)檢測(cè)[J].中國(guó)新藥雜志，2011，20(7)：599-603.

[10]李洋，馬文平，倪志婧. 寧夏枸杞體外抗氧化機(jī)理研究[J].食品科學(xué)，2014，35(1)：79-84.

[11]CC Wang，SC Chang，BS Inbaraj，et al.Isolation of carotenoids, flavonoids and polysaccharides fromLyciumbarbarumL.and evaluation of antioxidant activity[J].Food Chem，2010，120(1)：184-192.

[12]張東濤，白耘，馬寧，等.寧夏枸杞粗提物抗大鼠潰瘍性結(jié)腸炎的作用[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2016(9)：2087-2089.

[13]彭啟志.枸杞中5種微量元素的檢測(cè)及其健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)[J].中國(guó)醫(yī)藥科學(xué)，2014，4(9)：121-123.

[14]劉峰，黃國(guó)棟，朱凌燕，等.枸杞多糖對(duì)2型糖尿病大鼠胰腺β細(xì)胞PDX-1基因表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)醫(yī)藥科學(xué)，2013,3(1):34-36.

[15]程鵬，何先元，明拂曉，等.常用補(bǔ)虛藥水煎液對(duì)小鼠抗應(yīng)激作用的比較研究[J].中國(guó)醫(yī)藥科學(xué)，2013，3(17):36.

[16]趙春苗，李亮亮.枸杞水煎液對(duì)急慢性高血脂模型的影響[J].中國(guó)醫(yī)藥科學(xué)，2016，6(15)：27-30.

[17]I Kilic，Y Yesiloglu，Y Bayrak.Spectroscopic studies on the antioxidant activity of ellagic acid[J].Spectrochimica Acta Part A，2014，130(17)：447-452.

[18]闞永軍，趙立，楊彬君，等.野生和林下種植金線蓮的體外抗氧化活性研究[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2017，26(6)：15-17.

ComparativeStudytheAntioxidantActivityofWaterExtractbetweenLyciumruthenicumFruitsandLyciiFructus

ZENG Xiulan1SHI Fan2ZHENG Qi2ZHANG Xiaolei2WANG Zhiping2*

1.Zhongshan Shiqi Suhuazan Hospital, Zhongshan 428400, China; 2.School of Pharmacology, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006,China

ObjectiveTo compare antioxidant activity of water extract betweenLyciumruthenicumMurr.Fruits and Lycii FructusMethodsThe antioxidant capacity of water extract ofLyciumruthenicumMurr.Fruits and Lycii Fructus was evaluated by DPPH free radical, and total antioxidant capacity test(ferric reducing ability),ferrous ion chelating ability.ResultsThe IC50valueofLyciumruthenicumMurr.Fruits with DPPH free radical scavenging capacity and ferrous ion chelating abilitywas0.4194 mg·mL-1and 104.46 mg·mL-1,respectively(Lycii Fructus 2.6969 mg·mL-1,276.02 mg·mL-1,respectively).The total antioxidant capacity(ferric reducing power)of 1.96 mg·mL-1LyciumruthenicumMurr.Fruits equal to 11.14 μg· mL-1vitamin C(the same concentration of Lycii Fructus was 4.51 μg·mL-1).ConclusionThe results suggest thatLyciumruthenicumfruits and Lycii Fructus fruit show remarkably high antioxidant activity in vitro and are natural antioxidant development potential.

Lyciumruthenicumfruits；Lycii Fructus；Antioxidant；Comparitive

中山市科技計(jì)劃項(xiàng)目(2015B1282)，廣東省創(chuàng)新強(qiáng)校-省級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(51340169)。

曾秀蘭(1978-)，女，漢族，副主任藥師，研究方向?yàn)橹兴幹苿┘八幚韺W(xué)研究。E-mail: 1485491840@qq.com

王治平(1965-)，男，漢族，博士研究生，研究方向?yàn)橹兴幩幮镔|(zhì)、新劑型及質(zhì)量控制研究。E-mail:wzping_jshb@126.com

R285.5

A

1007-8517(2017)22-0021-03

2017-10-16 編輯：梁志慶)