柯慶青，李詩(shī)言，周 凡，鄭重鶯，貝亦江，王鼎南，王 揚(yáng)*

基于通過(guò)型固相萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定水產(chǎn)品中的氯霉素和紅霉素

柯慶青，李詩(shī)言，周 凡，鄭重鶯，貝亦江，王鼎南，王 揚(yáng)*

（浙江省水產(chǎn)質(zhì)量檢測(cè)中心，浙江 杭州 310023）

建立通過(guò)型固相萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時(shí)快速測(cè)定水產(chǎn)品中氯霉素和紅霉素的分析方法。樣品通過(guò)乙腈提取，Oasis PRiME HLB小柱一步法凈化，采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式檢測(cè)和同位素內(nèi)標(biāo)定量。檢測(cè)水產(chǎn)品中的氯霉素和紅霉素定量限分別為0.1 μg/kg和0.5 μg/kg。不同水產(chǎn)品（魚(yú)、蝦和蟹）在3 個(gè)添加水平的平均回收率在86.7%～102.6%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5%（n=6）。本方法簡(jiǎn)單易行、靈敏度較高，在日常檢測(cè)方面存在一定優(yōu)勢(shì)。

固相萃??；高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜；水產(chǎn)品；氯霉素；紅霉素

水產(chǎn)品種類(lèi)繁多，營(yíng)養(yǎng)豐富，廣受消費(fèi)者喜愛(ài)。近些年來(lái)，隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大，水產(chǎn)養(yǎng)殖病害日益嚴(yán)重。盲目用藥、使用人藥、過(guò)量用藥等濫用藥物現(xiàn)象比較普遍，這易造成養(yǎng)殖環(huán)境的惡化污染，也可能引起藥物在水產(chǎn)品體內(nèi)的殘留，進(jìn)而影響到食用者的身體健康。氯霉素是一種廣譜抑菌抗生素，曾長(zhǎng)期在國(guó)內(nèi)外廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的細(xì)菌性疾病治療。氯霉素對(duì)人體的造血功能有一定的毒副作用，可以引發(fā)再生障礙性貧血，血小板減少等[1]。紅霉素是一種大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素，對(duì)支原體、葡萄球菌、鏈球菌和各種革蘭氏陽(yáng)性菌均有較強(qiáng)的抑制作用，因而被廣泛用于畜牧業(yè)中疾病的防治[2]。食用水產(chǎn)品中的氯霉素和紅霉素可以通過(guò)食物鏈在人體內(nèi)累積，從而威脅人類(lèi)健康[3-4]。歐盟等許多國(guó)家和地區(qū)已經(jīng)禁止氯霉素的使用并規(guī)定了紅霉素在可食性動(dòng)物組織中的最大殘留量。我國(guó)NY 5070—2002《無(wú)公害食品 水產(chǎn)品中漁藥殘留限量》中規(guī)定水產(chǎn)品中不得檢出氯霉素；農(nóng)業(yè)部235號(hào)公告《動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量》規(guī)定動(dòng)物性食品中不得檢出氯霉素，紅霉素最高殘留限量為200 μg/kg。因此建立一種靈敏、高效、選擇性好的分析方法用于檢測(cè)水產(chǎn)品中氯霉素和紅霉素具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

目前氯霉素殘留常見(jiàn)的檢測(cè)方法有液相色譜法[5-6]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[7-14]、氣相色譜法[15-17]、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[18]、酶聯(lián)免疫法[19-20]；紅霉素的檢測(cè)方法有分子印跡液相色譜法[2]、液相色譜熒光法[21]、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[22-24]。其中，氣相色譜法和氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法需要衍生化，前處理復(fù)雜；酶聯(lián)免疫法結(jié)果易出現(xiàn)假陽(yáng)性，因此只能作為篩選方法；液相色譜法由于只靠保留時(shí)間定性，抗干擾能力較弱，易出現(xiàn)假陽(yáng)性。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法具有定性能力強(qiáng)、選擇性好、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。目前水產(chǎn)品中紅霉素和氯霉素的測(cè)定主要采用的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法就是基于固相萃取法凈化的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法，其中氯霉素的測(cè)定方法為農(nóng)業(yè)部781號(hào)公告—2—2006《動(dòng)物源食品中氯霉素殘留量的測(cè)定 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》[25]，紅霉素的測(cè)定方法為GB 29684—2013《水產(chǎn)品中紅霉素殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》[26]。近年來(lái)，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法在獸藥殘留分析中得到了廣泛應(yīng)用，但同時(shí)測(cè)定水產(chǎn)品中氯霉素和紅霉素殘留量少見(jiàn)報(bào)道。在我國(guó)水產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)項(xiàng)目中，常常會(huì)同時(shí)對(duì)氯霉素和紅霉素的藥物殘留進(jìn)行監(jiān)測(cè)，因此，使用一種方法快速、簡(jiǎn)易地測(cè)定水產(chǎn)品中氯霉素和紅霉素殘留量就顯得十分重要。

已有的氯霉素和紅霉素的凈化手段有正己烷脫脂法[24]以及固相萃取法[1,23,25-27]等。正己烷脫脂法雖然方法簡(jiǎn)單但基質(zhì)效應(yīng)較大；國(guó)標(biāo)方法和很多檢測(cè)方法采用的傳統(tǒng)的固相萃取法則需要有機(jī)試劑提取，溶劑轉(zhuǎn)化后才能上樣還需活化，淋洗、洗脫等，步驟較為繁瑣，同時(shí)吸附再脫附的步驟可能會(huì)致使回收率降低。本研究前處理采用Oasis PRiME HLB小柱一步法凈化，前處理簡(jiǎn)單，并且基質(zhì)效應(yīng)較小、靈敏度較高，能得到較為滿(mǎn)意的效果。Oasis PRiME HLB是在Oasis HLB技術(shù)基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)出的新一代反相固相萃取吸附劑，可以有效地吸附樣品中的脂肪和磷脂，較以往固相萃取劑具有更簡(jiǎn)單、更快速、更潔凈的優(yōu)勢(shì)[28-29]。本實(shí)驗(yàn)樣品可以在用有機(jī)相提取后，無(wú)需溶劑轉(zhuǎn)換，一步法直接通過(guò)Oasis PRiME HLB柱收集，無(wú)需淋洗、洗脫，用同一種前處理方法可以同時(shí)檢測(cè)氯霉素和紅霉素，縮短了檢測(cè)的時(shí)間、節(jié)約了成本。將本方法與現(xiàn)有國(guó)標(biāo)方法比較，本方法具有前處理簡(jiǎn)單、快速、使用試劑耗材少、回收率高等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)靈敏度也能滿(mǎn)足日常檢測(cè)需求，適合于實(shí)驗(yàn)室大批量檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

所有鯽魚(yú)、對(duì)蝦、梭子蟹樣品均來(lái)自2015年浙江省水產(chǎn)質(zhì)量檢測(cè)中心監(jiān)督抽查任務(wù)，所有樣品均取肌肉部分，絞碎均質(zhì)后，-20 ℃冷凍保存，待檢測(cè)。

氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品（純度98.5%）、紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品（純度97.0%）、氘代氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品、紅霉素-13C標(biāo)準(zhǔn)品（純度91.5%） 德國(guó)Dr. Ehrenstorfer公司；乙腈、甲醇、乙酸乙酯和正己烷（均為色譜純） 美國(guó)Tedia公司；乙酸（色譜純） 美國(guó)ROE Scientific Inc公司；其他試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

API4000型四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀 美國(guó)AB公司；高效液相色譜儀 美國(guó)Agilent公司；2202S型電子天平 德國(guó)賽多利斯有限公司；Centrifuge 5427R高速冷凍離心機(jī)德國(guó)Eppendorf公司；RE-2000B型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠；N-EVAP112水浴式氮吹濃縮儀 美國(guó)Oranomation Aassociates Inc公司；Oasis PRiME HLB固相萃取小柱（6 mL/200 mg） 美國(guó)Waters公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品提取

準(zhǔn)確稱(chēng)取均質(zhì)后的樣品2.50 g于15 mL帶蓋聚乙烯離心管中，加入400 ng/mL氯霉素內(nèi)標(biāo)和200 ng/mL紅霉素內(nèi)標(biāo)50 μL，加入8 mL乙腈，旋渦均勻1 min后，振蕩10 min，5 000 r/min離心5 min后取上清液于另一干凈10 mL帶蓋離心管中，向提取液中加入2 mL超純水混合均勻。

1.3.2 樣品凈化

向Oasis PRiME HLB固相萃取小柱中加入提取液，保持每秒1 滴的流速，收集所有的流出液在40 ℃條件下氮?dú)獯蹈桑昧鲃?dòng)相乙腈-水（45∶55，V/V）定容至1 mL，旋渦充分溶解后加入1 mL正己烷，快速旋渦1 min后，4 ℃、14 000 r/min離心10 min，棄去正己烷層后過(guò)0.22 μm微孔濾膜，上機(jī)測(cè)試。

1.3.3 樣品測(cè)試

將內(nèi)標(biāo)和不同體積的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液混勻，吹干后用流動(dòng)相定容至1 mL，配制成一系列質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品在同一條件下進(jìn)行測(cè)定，記錄保留時(shí)間和峰面積，內(nèi)標(biāo)法定量，用Mass Hunter工作站對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。

1.3.4 儀器分析條件

1.3.4.1 高效液相色譜條件

Waters Eclipse plus C18色譜柱（2.1 mm×150 mm，5 μm）；柱溫：30 ℃；流動(dòng)相：乙腈-0.02%乙酸溶液（45∶55，V/V）；流速：250 μL/min；進(jìn)樣量：20 μL。

1.3.4.2 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)。

紅霉素：正離子掃描，電噴霧電壓：5 000 V；氣簾氣壓力：10 psi；霧化器壓力：40 psi；輔助氣壓力：45 psi；去簇電壓：60 V；碰撞入口電壓：10 V；碰撞室出口電壓：13 V；離子源汽化溫度：500 ℃。紅霉素及紅霉素內(nèi)標(biāo)物的母離子、子離子及其碰撞能量見(jiàn)表1。

氯霉素：負(fù)離子掃描，電噴霧電壓：-4 500 V；氣簾氣壓力：20 psi；霧化器壓力：50 psi；輔助氣壓力：35 psi；去簇電壓：-50 V；碰撞入口電壓：-10 V；碰撞室出口電壓：-10 V；離子源汽化溫度：500 ℃。氯霉素及氯霉素內(nèi)標(biāo)物的母離子、子離子及其碰撞能量見(jiàn)表1。

表1 氯霉素和紅霉素及相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物質(zhì)譜參數(shù)Table 1 Mass spectral parameters for the analysis of chloramphenicol,erythromycin and their corresponding internal standards

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)譜參數(shù)與色譜條件優(yōu)化

2.1.1 質(zhì)譜參數(shù)的優(yōu)化

在電噴霧離子源下，分別對(duì)質(zhì)量濃度為1 μg/mL的氯霉素和紅霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液做負(fù)離子和正離子進(jìn)行一級(jí)質(zhì)譜掃描得到響應(yīng)最佳準(zhǔn)分子離子峰，再對(duì)準(zhǔn)分子離子峰進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜分析，得到子離子的質(zhì)量數(shù)，采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)優(yōu)化碰撞能等參數(shù)使得子離子響應(yīng)最佳。根據(jù)歐盟2002/657/EC決議中有關(guān)質(zhì)譜分析方法必須不少于4 個(gè)識(shí)別點(diǎn)的規(guī)定[30]，為氯霉素和紅霉素分別選取質(zhì)譜響應(yīng)最佳的兩對(duì)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)離子對(duì)及相應(yīng)的參數(shù)作為最終的質(zhì)譜采集參數(shù)。

2.1.2 色譜流動(dòng)相的選擇

本實(shí)驗(yàn)采用同一色譜條件對(duì)紅霉素和氯霉素進(jìn)行檢測(cè)，這樣可以在不用換流動(dòng)相和色譜柱的情況下，同時(shí)提交兩種質(zhì)譜方法實(shí)現(xiàn)紅霉素和氯霉素的同時(shí)檢測(cè)。紅霉素用正源檢測(cè)，一定酸度的流動(dòng)相可以提高紅霉素峰的響應(yīng)和改善峰形，但紅霉素在酸性條件下不穩(wěn)定、易分解；氯霉素用負(fù)源檢測(cè)，用酸性流動(dòng)相則會(huì)影響峰的強(qiáng)度和峰形。因此需要選擇合適酸度的流動(dòng)相同時(shí)滿(mǎn)足紅霉素和氯霉素的檢測(cè)。分別選用乙腈和不同體積分?jǐn)?shù)的乙酸溶液（0%、0.01%、0.02%、0.05%、0.1%）作為流動(dòng)相對(duì)氯霉素和紅霉素進(jìn)行分析。結(jié)果表明，純水時(shí)紅霉素峰形較差且響應(yīng)較低，隨著乙酸體積分?jǐn)?shù)的增加，紅霉素的響應(yīng)逐漸增強(qiáng)，峰形變好；氯霉素則隨著酸度的增加，峰形和響應(yīng)逐漸變差，0.05%乙酸溶液作為流動(dòng)相時(shí)則氯霉素在低體積分?jǐn)?shù)時(shí)峰較差，用0.1%乙酸溶液作流動(dòng)相時(shí)氯霉素則響應(yīng)不穩(wěn)定且出現(xiàn)峰拖尾的現(xiàn)象，綜合以上情況考慮使用0.02%的乙酸溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)，能夠同時(shí)保證氯霉素和紅霉素具有較好的峰形和響應(yīng)。乙腈和0.02%的乙酸溶液作為流動(dòng)相時(shí)氯霉素和紅霉素的標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖、空白魚(yú)肉樣品色譜圖和魚(yú)肉樣品加標(biāo)色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 樣品多反應(yīng)監(jiān)測(cè)色譜圖Fig. 1 MRM chromatograms of samples

2.2 預(yù)處理方法優(yōu)化

2.2.1 提取試劑的選擇

本實(shí)驗(yàn)首先考察乙腈、乙酸乙酯、甲醇3 種常用提取試劑對(duì)目標(biāo)化合物的提取情況。結(jié)果表明，乙腈對(duì)紅霉素、氯霉素均有較好的提取效果，乙酸乙酯和甲醇則分別對(duì)紅霉素和氯霉素的提取效果不佳，加標(biāo)絕對(duì)回收率偏低。乙腈作為提取溶劑既能保證目標(biāo)化合物的提取效率，又可以減少引入強(qiáng)極性雜質(zhì)和類(lèi)弱極性雜質(zhì)，還能起到沉淀蛋白的作用，減少基質(zhì)效應(yīng)，因此本研究選擇乙腈作為提取劑。本實(shí)驗(yàn)還考察了乙腈和水的混合溶液對(duì)目標(biāo)化合物的提取效果，結(jié)果表明，純乙腈的提取效率最高，隨著提取劑中水比例的增大，提取效率不斷降低，因此本實(shí)驗(yàn)采用純乙腈作為提取試劑。

2.2.2 凈化方法的優(yōu)化

水產(chǎn)品成分比較復(fù)雜，基質(zhì)中含有大量的脂肪、蛋白質(zhì)、色素等成分干擾檢測(cè)。本研究采用Oasis PRiME HLB小柱一步凈化，高體積分?jǐn)?shù)有機(jī)相提取液上樣，直接收集，通過(guò)保留樣品基質(zhì)中的雜質(zhì)流出目標(biāo)物的方式實(shí)現(xiàn)樣品溶液的凈化，無(wú)需活化、平衡和洗脫。Oasis PRiME HLB固相萃取小柱可以有效去除脂肪、磷脂、部分色素等雜質(zhì)干擾而且步驟簡(jiǎn)單，大大提高了預(yù)處理的效率。同時(shí)，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)在純乙腈提取液中加入一定比例的水時(shí)通過(guò)Oasis PRiME HLB固相萃取小柱時(shí)去除脂質(zhì)雜質(zhì)的效果更佳。相對(duì)于水溶液，脂肪和磷脂在乙腈中的溶解性更強(qiáng)，純乙腈提取液上樣會(huì)有部分磷脂或者脂肪溶出，不能完全吸附在柱子上，導(dǎo)致基質(zhì)效應(yīng)變大；而提取液乙腈體積分?jǐn)?shù)太低則會(huì)有部分藥物保留在柱上，導(dǎo)致藥物損失。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)加標(biāo)比較絕對(duì)回收率的形式，比較了上樣提取液中乙腈體積分?jǐn)?shù)分別為100%、90%、80%、70%和60%時(shí)通過(guò)固相萃取小柱時(shí)的凈化效果（圖2）。綜合比較，本實(shí)驗(yàn)選擇了80%乙腈溶液上樣，此時(shí)去雜質(zhì)凈化效果更好，氯霉素和紅霉素的絕對(duì)回收率最高。固相萃取小柱凈化后的樣品經(jīng)氮?dú)獯蹈捎昧鲃?dòng)相復(fù)溶，加入正己烷進(jìn)一步去除脂肪和色素。通過(guò)冷凍離心，在低溫下蛋白質(zhì)變性沉淀，色素和脂肪在水相中的溶解度降低，轉(zhuǎn)移到正己烷層，離心去除正己烷層達(dá)到更佳的凈化效果。

圖2 提取液中乙腈體積分?jǐn)?shù)對(duì)凈化效果的影響Fig. 2 Effect of acetonitrile concentration on purification efficiency

2.3 線性范圍、檢出限與定量限

移取一定體積的氯霉素和紅霉素內(nèi)標(biāo)和標(biāo)準(zhǔn)溶液，混勻后氮?dú)獯蹈?，流?dòng)相定容至1 mL，配成氯霉素質(zhì)量濃度分別為0.25、0.5、1、5、10、30 ng/mL，紅霉素質(zhì)量濃度為1.25、2.5、5、25、50、250 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。以目標(biāo)物色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，化合物的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明：氯霉素在質(zhì)量濃度為0.25～30 ng/mL，紅霉素在質(zhì)量濃度為1.25～250 ng/mL范圍內(nèi)呈線性，線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)如表2所示。根據(jù)檢出限大于等于3 倍信噪比，定量限大于等于10 倍信噪比的計(jì)算方法，得出氯霉素的方法檢出限為0.05 μg/kg，定量限為0.1 μg/kg；紅霉素的方法檢出限為0.2 μg/kg，定量限為0.5 μg/kg。

表2 魚(yú)肉中氯霉素和紅霉素的回歸方程、線性范圍和相關(guān)系數(shù)Table 2 Regression equations, correlation coefficients and linear ranges of chloramphenicol and erythromycin in fish meat

2.4 回收率和精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

為了考察本實(shí)驗(yàn)的可行性，向鯽魚(yú)、對(duì)蝦、梭子蟹和脂肪含量較高的養(yǎng)殖大黃魚(yú)空白樣品中添加3 個(gè)水平的紅霉素和氯霉素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，每組做6 個(gè)平行，按照上述前處理方法和儀器條件進(jìn)行測(cè)定，回收率和精密度結(jié)果見(jiàn)表3。不同水產(chǎn)品（魚(yú)、蝦和蟹）在3 個(gè)添加水平的平均回收率在86.7%～102.6%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5%。

表3 氯霉素和紅霉素在水產(chǎn)品中的平均加標(biāo)回收率和精密度結(jié)果（n=6）Table 3 Average recoveries and relative standard deviations for chloramphenicol and erythromycin in spiked aquatic products (n= 6)

2.5 和國(guó)標(biāo)方法比較

表4 本實(shí)驗(yàn)方法與國(guó)標(biāo)方法比較Table 4 Comparison of the method developed in this study with the Chinese national standard method

為考察本方法的可行性，通過(guò)在空白魚(yú)肉樣品加標(biāo)的方式將本方法與國(guó)標(biāo)方法進(jìn)行比較，結(jié)果見(jiàn)表4。在實(shí)際工作中檢測(cè)方法除了滿(mǎn)足靈敏度要求外，還要考慮檢測(cè)成本和效率問(wèn)題。國(guó)標(biāo)以及現(xiàn)有的大多數(shù)紅霉素和氯霉素的檢測(cè)方法通常是大體積有機(jī)試劑提取，經(jīng)過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸干后溶劑轉(zhuǎn)換，經(jīng)固相萃取小柱三步法凈化，需要花費(fèi)較多的時(shí)間和試劑。相比國(guó)標(biāo)方法，本方法前處理只需小體積有機(jī)溶劑提取，直接通過(guò)固相萃取一步法凈化，簡(jiǎn)單易于操作，且能同時(shí)實(shí)現(xiàn)紅霉素和氯霉素的定量檢測(cè)，提高檢測(cè)效率，降低檢測(cè)成本，靈敏度滿(mǎn)足水產(chǎn)品中藥物殘留檢測(cè)要求，適合實(shí)驗(yàn)室大批量檢測(cè)。

2.6 實(shí)際樣品測(cè)定和實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)

圖3 氯霉素陽(yáng)性樣品色譜圖Fig. 3 Chromatogram of chloramphenicol positive sample

用本實(shí)驗(yàn)方法對(duì)50 批次不同種類(lèi)的水產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，其中1批次黃鱔樣品檢出氯霉素，含量為0.899 μg/kg（圖3），其余樣品均未檢出，質(zhì)控樣品的回收率等指標(biāo)均達(dá)到分析要求，表明結(jié)果準(zhǔn)確可靠。同時(shí)，本方法檢測(cè)了陽(yáng)性魚(yú)肉凍干粉中氯霉素的含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與6 家實(shí)驗(yàn)室（均采用國(guó)標(biāo)方法進(jìn)行氯霉素檢測(cè)）進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于15%。

3 結(jié) 論

本研究基于高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)建立了快速測(cè)定水產(chǎn)品中的氯霉素和紅霉素的檢測(cè)方法。本方法簡(jiǎn)單易行，靈敏度滿(mǎn)足日常檢測(cè)要求。相比國(guó)標(biāo)方法，該方法縮短分析時(shí)間，減少有機(jī)試劑用量，是一種高效率低成本的檢測(cè)方法。本方法還驗(yàn)證了在魚(yú)、蝦、蟹等不同種類(lèi)的水產(chǎn)品基質(zhì)中檢測(cè)的可行性，適用于實(shí)驗(yàn)室大批量樣品快速檢測(cè)。

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Simultaneous Determination of Chloramphenicol and Erythromycin Residues in Aquatic Products by High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry with Oasis PRiME HLB Solid Phase Extraction Cleanup

KE Qingqing, LI Shiyan, ZHOU Fan, ZHENG Chongying, BEI Yijiang, WANG Dingnan, WANG Yang*
(Aquatic Products Quality Inspection Center of Zhejiang Province, Hangzhou 310023, China)

A rapid method was developed for the simultaneous determination of chloramphenicol and erythromycin residues in aquatic products by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry with solid phase extraction(SPE). Samples were extracted with acetonitrile and the extract was then purified by an Oasis PRiME HLB SPE cartridge.The analytes were detected in the multi-reaction monitoring (MRM) mode and quantified by the isotope internal standard method. The limits of quantification (LOQ) for chloramphenicol and erythromycin were 0.1 and 0.5 μg/kg, respectively.The average recoveries of the 2 analytes ranged from 86.7% to 102.6% with relative standard deviations of less than 5% in aquatic products (fish, shrimp and crab) at three spiked levels (n = 6). This proposed method was advantageous in routine detection of antibiotic residues in aquatic products for its simplicity and high sensibility.

solid phase extraction; high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; aquatic products;chloramphenicol; erythromycin

DOI∶10.7506/spkx1002-6630-201724039

O657.63

A

1002-6630（2017）24-0241-06

柯慶青, 李詩(shī)言, 周凡, 等. 基于通過(guò)型固相萃取-高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定水產(chǎn)品中的氯霉素和紅霉素[J]. 食品科學(xué), 2017, 38(24)∶ 241-246. DOI∶10.7506/spkx1002-6630-201724039. http∶//www.spkx.net.cn

KE Qingqing, LI Shiyan, ZHOU Fan, et al. Simultaneous determination of chloramphenicol and erythromycin residues in aquatic products by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry with Oasis PRiME HLB solid phase extraction cleanup[J]. Food Science, 2017, 38(24)∶ 241-246. (in Chinese with English abstract) DOI∶10.7506/spkx1002-6630-201724039. http∶//www.spkx.net.cn

2016-12-05

浙江省2013年農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化研究項(xiàng)目

柯慶青（1988—），女，助理工程師，碩士，研究方向?yàn)樗a(chǎn)品質(zhì)量與安全。E-mail：kqqgogo@163.com

*通信作者：王揚(yáng)（1973—），女，高級(jí)工程師，碩士，研究方向?yàn)樗a(chǎn)品質(zhì)量與安全。E-mail：wangyangruanfeng@163.com