呂建華，李忠民，魯玉佳，曹坤，張金秀，王立安*

(1.河北師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，河北 石家莊 050024；2.平泉縣食用菌產(chǎn)業(yè)服務(wù)局，河北 平泉 067500)

朱紅栓菌菌絲體的化學(xué)成分研究△

呂建華1，李忠民2，魯玉佳1，曹坤1，張金秀1，王立安1*

(1.河北師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，河北 石家莊 050024；2.平泉縣食用菌產(chǎn)業(yè)服務(wù)局，河北 平泉 067500)

目的明確朱紅栓菌菌絲體的主要化學(xué)成分。方法通過(guò)100 L發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)朱紅栓菌菌絲體，烘干粉碎后用乙酸乙酯提取，提取物采用硅膠和凝膠等柱色譜方法進(jìn)行分離純化，獲得的單體化合物利用核磁共振波譜、質(zhì)譜等技術(shù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果從朱紅栓菌菌絲體的乙酸乙酯提取物共分離純化得到11個(gè)化合物，分別是1，3-二油酰甘油酯(1)、α，α′-雙棕櫚酰甘油酯(2)、麥角甾醇(3)、鄰苯二甲酸二丁酯(4)、啤酒甾醇(5)、阿拉伯糖醇(6)、樺褐孔菌二糖(7)、尿嘧啶(8)、金雀異黃酮(9)、琥珀酸(10)、油酸(11)。結(jié)論以上化合物均為首次從朱紅栓菌菌絲體中分離得到。

朱紅栓菌；菌絲體；化學(xué)成分；啤酒甾醇；金雀異黃酮

本文對(duì)朱紅栓菌菌絲體的乙酸乙酯提取物的主要化學(xué)成分進(jìn)行了研究，從中分離純化共得到11個(gè)化合物，分別為1，3-二油酰甘油酯(1)、α，α′-雙棕櫚酰甘油酯(2)、麥角甾醇(3)、鄰苯二甲酸二丁酯(4)、啤酒甾醇(5)、阿拉伯糖醇(6)、樺褐孔菌二糖(7)、尿嘧啶(8)、金雀異黃酮(9)、琥珀酸(10)、油酸(11)，以上化合物均為首次從朱紅栓菌菌絲中分離得到。其中金雀異黃酮曾是一種在大豆中發(fā)現(xiàn)的多酚類化合物，本文對(duì)朱紅栓菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)，所用的培養(yǎng)基的成分含有大豆餅粉，但發(fā)酵結(jié)束后，培養(yǎng)液清澈透明，發(fā)酵產(chǎn)物過(guò)20目篩，菌絲體反復(fù)用水洗滌3次，菌絲體中所帶的大豆餅粉含量很少。劉思妤等[8]在靈芝中也分離鑒定出金雀異黃酮，而朱紅栓菌是一種與靈芝很相似的藥用真菌，故本文認(rèn)為金雀異黃酮是來(lái)源于朱紅栓菌菌絲體。

1 儀器與材料

1.1 儀器

核磁共振儀ZMD(德國(guó)BRUKER光譜儀器公司)；電子天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；100 L發(fā)酵罐(上海百倫公司)；真空干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；石油醚、乙酸乙酯、無(wú)水乙醇、無(wú)水甲醇、三氯甲烷、丙酮均為國(guó)產(chǎn)分析純，氘代試劑為進(jìn)口色譜純，正向硅膠(100～200目，200～300目)、GF254薄層色譜板均為青島海洋化工廠生產(chǎn)。

1.2 材料

朱紅栓菌Trametescinnabarina菌種由河北師范大學(xué)真菌實(shí)驗(yàn)室分離并通過(guò)ITS方法鑒定。將朱紅栓菌母種接種于平板上(土豆200 g、葡萄糖20 g、蛋白胨3 g、硫酸鎂1 g、磷酸二氫鉀3 g、瓊脂20 g、水1 L)，27 ℃培養(yǎng)10 d，取3塊直徑為5 mm的菌種接種于裝有250 mL培養(yǎng)基的三角瓶中(土豆200 g、葡萄糖20 g、蛋白胨3 g、硫酸鎂1 g、磷酸二氫鉀3 g、水1 L)，27 ℃、120 r·min-1的恒溫?fù)u床中培養(yǎng)7 d。以2%的接種量接種于裝有80 L培養(yǎng)基(大豆餅粉20 g、葡萄糖10 g、玉米粉10 g、酵母粉5 g、硫酸鎂1 g、磷酸二氫鉀3 g、水1 L，pH 5.5)的100 L發(fā)酵罐中，發(fā)酵培養(yǎng)122 h。發(fā)酵培養(yǎng)條件：溫度為27 ℃，通氣量為32 L·min-1，罐壓控制在0.04 MPa。發(fā)酵產(chǎn)物過(guò)濾后，在4 ℃、3500 r·min-1離心收集菌絲體。

2 提取與分離

菌絲體用真空冷凍干燥機(jī)干燥后，用中草藥粉碎機(jī)粉碎，得到朱紅栓菌菌絲體干粉1259 g。用乙酸乙酯對(duì)菌絲干粉萃取3次，萃取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，得到乙酸乙酯浸膏11.2 g。

對(duì)乙酸乙酯提取物進(jìn)行硅膠柱色譜，用三氯甲烷-甲醇梯度洗脫，三氯甲烷-甲醇(10∶1)析出黃色黏稠物質(zhì)為化合物7(37 mg)。三氯甲烷-甲醇(1∶1)析出白色結(jié)晶為化合物6(16 mg)；三氯甲烷-甲醇(5∶1)經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜得到化合物8(9 mg)和10(8 mg)；三氯甲烷-甲醇(15∶1)經(jīng)反復(fù)硅膠與凝膠柱色譜得到化合物1(13 mg)和2(19 mg)。

收集純?nèi)燃淄橄疵撓聛?lái)的物質(zhì)，采用硅膠柱色譜進(jìn)行石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，在石油醚-乙酸乙酯(5∶1)中得到化合物4(7 mg)；石油醚-乙酸乙酯(10∶1)進(jìn)行反復(fù)硅膠柱色譜得到化合物11(19 mg)、3(11 mg)和5(14 mg)；石油醚-乙酸乙酯(1∶1)進(jìn)行凝膠柱色譜得到化合物9(8 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色固體(石油醚-乙酸乙酯)。EI-MSm/z：602[M-H2O]+，576[M-C2H4O]，339[M-C13H18O2]，325[M-C19H35O2]，313，264，239，129，97，83，69，57，55。1H-NMR(CDCl3，500 MHz)δ：5.34(4H，m，H-9，10，9′，10′)，4.08～4.20(5H，m，H-a，a′，β)，2.34(4H，t，J=7.5 Hz，H-2，2′)，2.00(4H，m，H-8，11，8′，11′)，1.62(4H，m，H-3，3′)，1.25～1.30(40H，br s，H-4～7，12～17，4′～7′，12′～17′)，0.88(6H，t，J=6.8 Hz，H-18，18′)；13C-NMR(CDCl3，125 MHz)δ：174.0(C-1，1′)，130.2(C-10，10′)，129.9(C-9，9′)，68.6(C-β)，65.2(C-a，a′)，34.2(C-2，2′)，32.1(C-16，16′)，29.2～29.9(C-4～7，12～15，4′～7′，12′～15′)，27.4(C-8，8′)，27.3(C-11，11′)，25.0(C-3，3′)，22.8(C-17，17′)，14.3(C-18，18′)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道基本一致，故鑒定為1，3-二油酰甘油酯，為首次從朱紅栓菌菌絲中分離得到。

化合物2：白色固體(石油醚-乙酸乙酯)。EI-MSm/z：550[M-H2O]+，碎片離子峰，m/z354，331，299，239，171，98，83，71，57，43表明分子具有長(zhǎng)鏈結(jié)構(gòu)。1H-NMR(CDCl3，500 MHz)δ：4.08～4.20(5H，m，H-a，a′，β)，2.34(4H，t，J=7.6 Hz，H-2，2′)，1.62(4H，m，H-3，3′)，1.25～1.28(48H，br s，H-4～15，4′～15′)，0.88(3H，t，J=6.9 Hz，H-16，16′)；13C-NMR(CDCl3，125 MHz)δ：174.1(C-1，1′)，68.6(C-β)，65.2(C-a，a′)，34.3(C-2)，32.1(C-14)，29.3～29.9(C-4～13)，25.0(C-3)，22.8(C-15)，14.3(C-16)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道基本一致，故鑒定為α，α′二棕櫚酰甘油酯，為首次從朱紅栓菌菌絲中分離得到。

化合物3：無(wú)色結(jié)晶(三氯甲烷)。FAB-MSm/z396[M]+。1H-NMR(CDCl3，500 MHz)δ：3.62(1H，m，H-3)，5.37(1H，br s，H-6)，5.55(1H，d，J=3.2 Hz，H-7)，0.62(3H，s，H-18)，0.93(3H，s，H-19)，1.03(3H，d，J=6.6 Hz，H-21)，5.16(1H，dd，J=15.2，7.8 Hz，H-22)，5.22(1H，dd，J=15.2，7.2 Hz，H-23)，0.83(3H，d，J=7.1 Hz，H-26)，0.82(3H，d，J=7.2 Hz，H-27)，0.91(3H，J=6.8 Hz，H-28)；13C-NMR(CDCl3，125 MHz)δ：39.2(C-1)，32.1(C-2)，70.5(C-3)，40.9(C-4)，139.9(C-5)，119.7(C-6)，116.4(C-7)，141.4(C-8)，46.4(C-9)，37.1(C-10)，21.2(C-11)，38.5(C-12)，42.9(C-13)，54.7(C-14)，23.1(C-15)，28.4(C-16)，55.9(C-17)，12.2(C-18)，16.4(C-19)，40.6(C-20)，21.2(C-21)，132.1(C-22)，135.7(C-23)，42.9(C-24)，33.2(C-25)，19.8(C-26)，20.1(C-27)，17.7(C-28)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道基本一致，故鑒定為麥角甾醇，為首次從朱紅栓菌菌絲中分離得到。

化合物4：黃色油狀物(三氯甲烷)。1H-NMR(CD3OD，500 MHz)δ：7.72(2H，dd，J=5.7，3.3 Hz，H-2，5)，7.61(2H，dd，J=5.7，3.3 Hz，H-3，4)，4.29(4H，t，J=6.6 Hz，H-1′，1″)，1.72(4H，m，H-2′，2″)，1.46(4H，m，H-3′，3″)，0.97(6H，m，H-4′，4″)；13C-NMR(CD3OD，125 MHz)δ：169.3(C-7，7′)，133.7(C-1，6)，132.3(C-3，4)，129.9(C-2，5)，66.7(C-1′，1″)，31.7(C-2′，2″)，20.3(C-3′，3″)，14.0(C-4′，4″)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道基本一致，故鑒定為鄰苯二甲酸二丁酯，為首次從朱紅栓菌菌絲中分離得到。

化合物5：無(wú)色針狀結(jié)晶(甲醇)。EI-MSm/z：430[M]+。1H-NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ：3.76(1H，m，H-3)，4.24(1H，d，J=5.6 Hz，H-6)，5.08(1H，m，H-7)，0.54(3H，s，H-18)，0.90(3H，s，H-19)，0.99(3H，d，J=6.6 Hz，H-21)，5.16(1H，dd，J=15.3，8.1 Hz，H-22)，5.23(1H，dd，J=15.3，7.2 Hz，H-23)，0.81(3H，d，J=6.6 Hz，H-26)，0.80(3H，d，J=6.6 Hz，H-27)，0.91(3H，J=6.8 Hz，H-28)；13C-NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ：36.7(C-1)，31.2(C-2)，66.0(C-3)，42.0(C-4)，74.5(C-5)，72.1(C-6)，119.5(C-7)，139.7(C-8)，43.0(C-9)，36.7(C-10)，22.6(C-11)，42.3(C-12)，48.6(C-13)，55.3(C-14)，27.7(C-15)，27.7(C-16)，54.2(C-17)，12.1(C-18)，19.5(C-19)，42.0(C-20)，21.3(C-21)，135.4(C-22)，131.4(C-23)，43.0(C-24)，32.5(C-25)，19.8(C-26)，21.0(C-27)，19.8(C-28)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道基本一致，故鑒定為啤酒甾醇，為首次從朱紅栓菌菌絲中分離得到。

化合物6：白色針狀結(jié)晶(甲醇)。FAB-MSm/z：153[M+H]+。1H-NMR(CD3OD，500 MHz)δ：3.88(1H，t，J=6.2 Hz，H-2)，3.80(1H，dd，J=11.1，3.5 Hz，H-4)，3.70(1H，m，H-3)，3.60～3.64(3H，m，H-1，5)，3.53(1H，dd，J=8.0，1.5 Hz，H-1)；13C-NMR(CD3OD，125 MHz)δ：73.0(C-3)，72.4(C-2)，72.0(C-4)，65.0(C-1)，64.8(C-5)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道基本一致，故鑒定為阿拉伯糖醇，為首次從朱紅栓菌菌絲中分離得到。

化合物7：黃色糖漿狀(甲醇)。1H-NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ：4.88(1H，d，J=3.8 Hz，H-1)，3.53(1H，dd，J=10.4，3.6 Hz，H-2)，3.39(1H，m，H-3)，3.01(1H，m，H-4)，3.12(1H，m，H-5)，3.43(1H，dd，J=12.0，4.8 Hz，H-6)，4.25(1H，d，J=4.7 Hz，H-1′)，2.88(1H，t，J=8.2 Hz，H-2′)，3.09(1H，m，H-3′)，3.03(1H，m，H-4′)，3.10(1H，m，H-5′)，3.47(1H，dd，J=12.0，4.8 Hz，H-6′)；13C-NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ：97.0(C-1)，72.5(C-2)，73.3(C-3)，70.5(C-4)，72.1(C-5)，61.4(C-6)，92.4(C-1′)，75.0(C-2′)，76.9(C-3′)，70.5(C-4′)，76.9(C-5′)，61.4(C-6′)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道基本一致，故鑒定為樺褐孔菌二糖，為首次從朱紅栓菌菌絲中分離得到。

化合物8：白色粉末(甲醇)。EI-MSm/z：112[M+，100]，69[M+-NHCO]，42[69-HCN]。1H-NMR(DMSO-d6，500 MHz)δ：10.98(2H，br s，1-NH，3-NH)，7.39(1H，d，J=7.6 Hz，H-6)，5.44(1H，d，J=7.6 Hz，H-5)；13C-NMR(DMSO-d6，125 MHz)δ：164.3(C-4)，151.5(C-2)，142.2(C-6)，100.2(C-5)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道基本一致，故鑒定為尿嘧啶，為首次從朱紅栓菌菌絲中分離得到。

化合物9：黃色粉末(石油醚-乙酸乙酯)。1H-NMR(CD3OD，500 MHz)δ：8.13(1H，s，H-2)，7.43(2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，H-6′)，6.89(2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，H-5′)，6.39(1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，6.27(1H，d，J=2.1 Hz，H-6)；13C-NMR(CD3OD，125 MHz)δ：180.7(C-4)，164.5(C-7)，162.5(C-5)，158.3(C-4′)，157.6(C-9)，153.5(C-2)，130.3(C-2′，6′)，123.2(C-3)，122.0(C-1′)，115.1(C-3′，5′)，105.0(C-10)，99.0(C-6)，93.6(C-8)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報(bào)道基本一致，故鑒定為金雀異黃酮，為首次從朱紅栓菌菌絲中分離得到。

化合物10：白色晶體(甲醇)。1H-NMR(CD3OD，500 MHz)δ：2.57(4H，s，H-2)；13C-NMR(CD3OD，125 MHz)δ：176.2(C-1)，29.8(C-2)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]報(bào)道基本一致，故鑒定為琥珀酸，為首次從朱紅栓菌菌絲中分離得到。

化合物11：白色粉末(石油醚-乙酸乙酯)。EI-MSm/z：282[M]+。1H-NMR(CD3OD，500 MHz)δ：5.35(2H，m，H-9，10)，2.27(2H，t，J=7.4 Hz，H-2)，2.00(4H，m，H-8，11)，1.60(2H，m，H-3)，1.30～1.33(20H，br s，H-4～7，12～17)，0.90(3H，t，J=6.8 Hz，H-18).13C-NMR(CD3OD，125 MHz)δ：177.7(C-1)，130.9(C-10)，130.8(C-9)，35.0(C-2)，33.1(C-16)，30.2～30.9(C-4～7，12～15)，28.1(C-8，11)，26.1(C-3)，23.8(C-17)，14.5(C-18)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]報(bào)道基本一致，故鑒定為油酸，為首次從朱紅栓菌菌絲中分離得到。

[1] 徐錦堂，蘭進(jìn).中國(guó)藥用真菌學(xué)[J].醫(yī)學(xué)研究雜志，2002，31(1)：29.

[2] 卯曉嵐.中國(guó)蕈菌[M].北京：科學(xué)出版社，2009:350-351.

[3] 戴玉成，圖力古爾.中國(guó)東北野生食藥用真菌圖志[M].北京：科學(xué)出版社，2007:107-108.

[4] 黃年來(lái).中國(guó)大型真菌原色圖鑒[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1998:76-77.

[5] 盧衛(wèi)紅，朱峰，劉漢基.朱紅栓菌活性物質(zhì)的提取及其抗菌活性研究[J].畜牧與獸醫(yī)，2012，(增刊1)：375.

[7] 劉學(xué)湘，潘揚(yáng)，蔣亞平.紅栓菌液態(tài)發(fā)酵后馬錢(qián)子總堿中2種生物堿含量的變化[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40(22)：11225-11226.

[8] 劉思妤.靈芝化學(xué)成分的研究[D].沈陽(yáng)：沈陽(yáng)藥科大學(xué)，2007.

[9] Su B N，Chang L C，Park E J，et al.Bioactive constituents of the seeds ofBruceajavanica[J].Planta Med，2002，68(8)：730-733.

[10] 劉云海，吳曉云，方建國(guó)，等.板藍(lán)根化學(xué)成分研究(V)[J].中南藥學(xué)，2003(5)：302-305.

[11] 呂子明，姜永濤，吳立軍，等.人工蛹蟲(chóng)草子實(shí)體化學(xué)成分研究[J].中國(guó)中藥雜志，2008，33(24)：2914-2917.

[12] 嚴(yán)振，田洋，馬躍平，等.雷公藤根化學(xué)成分研究[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2010，12(1)：23-24.

[13] 劉玉紅，徐凌川，王建平，等.茶藨子葉孔菌化學(xué)成分的研究[J].中藥材，2005，28(11)：998-999.

[14] 王春蘭，張集慧，郭順星，等.粉紅粘帚霉化學(xué)成分的研究[J].微生物學(xué)通報(bào)，2001，28(4)：24-27.

[15] 王寧輝.白檀化學(xué)成分及其生物活性研究[D].西安：陜西科技大學(xué)，2015.

[16] 趙余慶，李銑.紅毛五加化學(xué)成分的研究[J].中國(guó)中藥雜志，1991，16(7)：421-424.

[17] Agrawal P K.Carbon-13 NMR of flavonoids[J].Studies in Organic Chemistry，1989，39：283.

[18] 黃文強(qiáng)，施敏峰，宋曉平，等.使君子化學(xué)成分研究[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2006，34(4)：79-82.

[19] 姬志強(qiáng)，唐娜娜，張建民，等.山風(fēng)化學(xué)成分研究[J].中國(guó)藥師，2015，18(12)：2067-2069.

StudyonChemicalConstituentsofMyceliumofTrametescinnabarina

LYUJianhua1，LIZhongmin2，LUYujia1，CAOKun1，ZHANGJinxiu1，WANGLi’an1*

(1.TheLifeScienceCollege，HebeiNormalUniversity，Shijiazhuang050024，China；2.PingquanEdibleFungiIndustryServiceBureau，Pingquan067500，China)

Objective：To study the chemical constituents of mycelium ofTrametescinnabarinaby liquid fermentation.MethodsLiquid fermentation was performed in 100 L fermentor.Mycelium ofT.cinnabarinawas extracted by ethyl acetate.Chemical constituents were isolated and purified using silica gel and gel column chromatographies.MS and NMR spectral analysis were used to identify their structures.ResultsEleven compounds were isolated from mycelium ofT.cinnabarinaand identified as 1，3-diolein(1)，plamitic acid-α，α′-dipropyl ester(2)，ergosterol(3)，dibutylphthalate(4)，cerevisterol(5)，arabitol(6)，inotodisaccharide(7)，uridine(8)，genistein(9)，succinic acid(10)，and oleic acid(11).ConclusionAll the compounds were isolated from mycelium ofT.cinnabarinafor the first time.

Trametescinnabarina；mycelium；chemical constituent；cerevisterol；genistein

河北省科技計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(16237301D)；河北省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(HBCT2013060201)

*

王立安，教授，研究方向：食用菌菌種選育及大型真菌天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)；Tel：(0317)80787571，E-mail：wlian1965@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.11.008

2017-03-29)